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药品临床综合评价是药品供应保障决策的重要技术工具，是关乎人民群众健康、提升药物临床价值的基础性工作[1]。2019年国家卫生健康委下发《关于开展药品使用监测和临床综合评价工作》的通知，推进药品临床综合评价的开展；2021年发布《药品临床综合评价管理指南（试行2021年版）》，在评价方案的制定和质量控制指标体系方面有了明确指导，推动了药品临床综合评价工作规范发展。文献计量学是运用数学和统计方法对所有知识载体进行定量分析的交叉科学。CiteSpace是一款基于Java程序开发的，广泛应用于分析和展示某个学科领域的研究进展、研究趋势和研究前沿的可视化软件，是文献计量和网络分析的重要工具[2-3]。文献计量学分析现已运用于药物治疗疾病的临床综合评价，如阿利沙坦酯治疗原发性高血压[4]、稳心颗粒治疗心律失常[5]、地氯雷他定治疗荨麻疹等[6] 。本研究以《中国期刊全文数据库》(中国知网）、《中国学术期刊数据库》（万方）和《中文科技期刊数据库》（维普）为数据来源，收集了自该工作开展以来关于药品临床综合评价的相关文献，利用CiteSpace软件根据对文献的年发文量、作者、研究机构和关键词等进行文献计量分析，构建可视化图谱，展示自建库以来国内临床综合评价的研究的现状、发展脉络及热点；同时进行分析与思考，以期为后续的相关研究工作提供参考。
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以中国知网、万方和维普数据库为数据来源。选择精准搜索、期刊文献，检索主题为“临床综合评价”，检索时间设定为建库至2022年8月31日。检出文献数量分别是中国知网1206篇、万方数据库201篇和维普数据库79篇。将检索得到文献的题录导入NoteExpress3.5.0软件，根据“题录类型”、“作者”、“年份”和“标题”字段进行查重，保留资料最完整的文献，并通过人工阅读全文的方式筛选符合纳入标准的文献。对检出文献进行数据清洗后，最后共纳入有效文献126篇。有效文献以refworks-CiteSpace 2021格式导出，以导出的数据文件命名“download_**.txt”的格式导入数据分析软件。
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使用基于Java平台的文献计量学分析软件CiteSpace6.1.R3进行分析。首先，用该软件对原始数据进行去重复、转化和阈值参数设置：“Node Types”值分别选择institute、author、keyword；“Top N”值设定为50；时间设定为1978至2022，以4年为时间切片。选择机构（institute）、作者（author）、关键词（keywords）等节点进行分析。
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根据各设置参数，对纳入的126篇相关文献进行年发文量、作者合作网络分析、研究机构合作网络分析和关键词合作网络分析，对关键词进行共现分析、聚类分析和突现分析，并结合人工文献阅读和谱图分析，深入分析临床综合评价。
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研究往年文献发文数量的趋势走向，可以反应临床综合评价研究的发展速度和未来走向。由图1可知，2015年之前药品临床综合评价相关发文量普遍偏低，在2019年至2022年连续四年间发文量逐年增长，处于持续发展状态。
图 1 年发文量
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共有133家机构发表临床综合评价文献，发文量前三名的研究机构分别是中国中医科学院中医临床基础医学研究所（15篇）、中国中医科学院西苑医院（6篇）、北京大学医药管理国际研究中心（5篇）。
对临床综合评价发表机构合作进行可视化分析，见图2。各发文机构存在广泛的合作，表现为医科/中医药高校（南方医科大学、北京中医药大学）及其附属医院，中国中医科学院及其附属医院，各类研究中心（国家卫生健康委卫生发展研究中心、中国中医药循证医学中心），综合性大学（暨南大学）及其附属医院这四大类合作紧密的机构。
图 2 临床综合评价研究机构合作网络
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共有51位作者发表临床综合评价相关文献，排名前10位作者见表1。发文量排名第1的作者为谢雁鸣（13篇），其次为王志飞（12篇）、张强（12篇）和崔鑫（11篇），发文强度最高的作者是谢雁鸣，引文半衰期最高的作者是张强。
表 1 临床综合评价发文量排名前10位作者
序号 作者姓名 发文量 发文强度（%） 引文半衰期 1 谢雁鸣 13 10.32 0.923 2 王志飞 12 9.52 0.916 3 张 强 12 9.52 0.958 4 崔 鑫 11 8.83 0.954 5 廖 星 6 4.76 0.667 6 王晓玲 5 3.97 0.800 7 贾露露 5 3.97 0.750 8 尉耘翠 5 3.97 0.800 9 韩 晟 5 3.97 0.800 10 戴泽琦 5 3.97 0.800 对临床综合评价发文作者合作网络进行可视化分析，见图3。发文量较多的作者之间存在合作关系，并形成稳定的团队。中国中医科学院中医临床基础医学研究所的谢雁鸣、王志飞、张强等人是临床综合评价研究的核心人物，做出了很大贡献。138条连线代表这些作者之间合作较多，研究内容相关性强。
图 3 临床综合评价作者合作网络
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应用CiteSpace6.1.R3软件分析文献关键词得到10个共现性较强的关键词，其中有“综合评价”（34次）、“多准则决策分析”（13次）、“药品临床综合评价”（12次）、“中成药”（10次）、“安全性”（6次）、“有效性”（6次），高中心性关键词有“多准则决策分析”（0.3）、“安全性”（0.2）、“综合评价”（0.09），见图4。结合高频次关键词、高中心性关键词分布，可以基本得出该领域重点研究内容为多准则决策分析是主要研究方法，研究者最关注的研究对象是中成药，安全性和有效性则是重点关注的药品研究指标。
图 4 临床综合评价关键词共现关系
采用对数似然比（LLR）算法对文献中关系紧密的关键词进行聚类分析和时间线图可视化分析，见图5。分析得到的研究重点分别是卫生技术评估、有效性、临床证据。其中卫生技术评估是规模最大、文献数量最多的聚类，聚类时间跨度从2010年延续到2019年，突出反映该聚类在临床综合评价中占有重要地位。药品的有效性、安全性评价开始逐渐成为研究重点内容，形成稳定的方向。
图 5 临床综合评价关键词时间线视图
分析结果获得了9个突现词，其中“临床疗效”开始时间是2006年，结束时间是2017年，强度数值超过3.4，表明这个突现词的影响力较大。突现词“中成药”出现时间为2020年，年份区间延续到2022年，推测该关键词可能是未来临床综合评价的研究热点。
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将“download_**”文件里的关键词信息设置为研究的维度，而后进行共现分析。用CiteSpace6.1.R3软件分析研究维度，其中排名前6位的维度分别为“有效性”（43次）、“安全性”（431次）、“经济性”（31次）、“适宜性”（22次）、“可及性”（22次）和“创新性”（22次），见表2。各研究维度之间的共现关系见图6，其中安全性和有效性共现次数最多，说明在各维度研究中，研究者普遍最关注药品的研究指标是安全性和有效性，其次是经济性和适宜性。
表 2 临床综合评价研究维度排名
序号 维度 词频 1 有效性 43 2 安全性 43 3 经济性 31 4 适宜性 22 5 可及性 22 6 创新性 22 7 中医药特色 6 8 药学特性 4 9 其他属性 2 
图 6 临床综合评价研究维度共现关系
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对本次纳入研究的文献所涉及的药物品种进行分析，排名前4的药物品种分别是心脑血管药物、消化系统药物、抗菌药物和抗肿瘤药物，见图7。其中心脑血管相关的文献数为26篇，涉及药品数量32个，消化系统相关的文献数为11篇，涉及药品数量19个，可见这两类常见病、慢性病受到研究者广泛的关注。比如，多项研究对索拉菲尼、仑伐替尼、FOLFOX4、银杏内酯注射液等开展药品临床综合评价[7-8]。此外，在所有的研究对象中，化学药品和中成药分别为78、41个，可见化学药品是临床综合评价的主要研究对象，中成药近年来也逐渐受到从业者的关注，见图8。
图 7 各类药物的文献与药品数量柱形图
图 8 化学药品与中成药的分布情况
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对本次纳入研究的文献所涉及的疾病进行分析，结果显示感染和脑卒中的文献频次均为8次，分别涉及16种和12种药物的临床综合评价，位列所有疾病分类首位。其次是肿瘤、心力衰竭和冠心病，见表3。可见临床上的常见病、多发病、慢病、难治性疾病因治疗周期长、治疗方案复杂等原因，其治疗药物在临床综合评价中容易受研究者关注。
表 3 文献所涉及的疾病分析结果
序号 疾病 文献频次 药品频次 1 感染 8 16 2 脑卒中 8 12 3 肿瘤 7 12 4 心力衰竭 5 6 5 冠心病 4 4 -
本次纳入研究的126篇文献中，其中提供了明确的药物治疗评级的结论文献共81篇，占总文献的64%；提供临床综合评价的建议及方法的结论文献共28篇，占22%；提供临床综合评价指南或规范的结论文献为13篇，占11%；形成专家共识性结论的文献4篇，占3%，见图9。
图 9 不同研究结果占比图
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自2019年药品临床综合评价开展以来，在完善基本药物目录制度、促进临床合理用药等研究领域得到广泛应用，如宋子扬所在团队[9]通过卫生技术评估联合多准则决策分析建立我国儿童用药临床综合评价方法。本研究检索时间设定为建库至2022年，但药品临床综合评价的正式通知始于2019年。因此，大多数早于2019年发表的文献由于未按照规范进行临床综合评价均未被纳入分析。
在研究对象选择上，大部分研究以药品为切入点，如崔鑫等[10]对冠心舒通胶囊、段承阿鑫等[4]对阿利沙坦酯开展了临床综合评价，这些客观反映了药物的临床治疗价值。也有研究则以疾病为切入点：如王可可等[11]对骨质疏松症临床药物综合价值、符雨嫣等[12]对晚期肝癌一线系统治疗药品的临床综合评价，此类研究的结果常作为合理用药决策的参考。
在数据库的选择上，CiteSpace系统默认为单一数据库分析，可能导致分析结果存在片面性。本研究将中国知网、万方和维普这三个数据库中符合要求的文献数据导入NoteExpress3.5.0软件，对数据进行去重处理，再以“refworks”格式导出合并分析。此外，在外文数据库检索相关文献篇数过少，且不符合纳入分析要求，故未纳入分析。
目前中药大多存在科学基础薄弱，临床价值评估不清等问题。随着中医药的优势作用不断被认可[13]，依托循证医学的中药临床综合评价工作势在必行[14-15]。本研究“中成药”词频呈现出最高共现性，如谢雁鸣、王志飞所在团队先后以天舒胶囊[16]、银杏内酯注射液[7]、热炎宁合剂[17]为例开展中成药临床综合评价，并形成了《中成药临床综合评价技术规范》[18]，为中药的临床综合评价开展了示范性工作。就评价维度而言，中药在化学药品常用的6个维度上，增加中医药特性的维度（即“6+1”），主要对证候、组方、配伍、人用经验等中医药特有的方面进行评价[19]，以体现中药独特的临床价值。
综上所述，虽然中药临床综合评价体系不断进步和完善，但仍存在评价研究质量有差异、核心要素不明显、技术层面不规范等系列问题[20-23]。如何利用现有评价方法提升药物综合临床评价的准确性和可靠性，仍是未来研究的课题。
Visual analysis of clinical comprehensive evaluation of drugs in China by bibliometric analysis
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摘要:
目的 通过分析总结国内药品临床综合评价的研究现状，预测该领域的发展趋势，为进一步规范我国药品临床综合评价提供参考。 方法 利用《中国期刊全文数据库》(中国知网）、《中国学术期刊数据库》（万方）和《中文科技期刊数据库》（维普），检索建库至2022年临床综合评价的相关文献，获取文献的基本信息，评价文献质量，运用文献计量学及CiteSpace6.1.R3软件对研究作者、研究机构及关键词等内容进行可视化展示。 结果 经过筛选最终纳入126篇文献。分析结果显示：发文量有持续上升趋势，文献贡献最多的机构和作者分别是中国中医科学院和谢雁鸣。 结论 研究人员紧跟政策要求，以药品临床价值为导向开展了药品临床综合评价。建议研究人员进一步根据政府机构、医药行业、临床应用关注的重点和要求，组织开展综合评价。 Abstract:Objective To analyze the research status and predict the development trend of clinical comprehensive evaluation of drugs in China, and to provide reference for clinical comprehensive evaluation. Methods CNKI, Wanfang and VIP database were used to search the published articles of clinical comprehensive evaluation. Literature searching was set from the building time of the database to 2022, the basic information about the published articles was obtained for the evaluation of the literature quality. Bibliometrics and CiteSpace 6.1.R3 software were used to visualize the research authors, research institutions, and key words. Results After data screening, a total of 126 Chinese published articles were selected. The analysis showed that the numbers of published articles were rising continuously, and China Academy of Chinese Medical Sciences and Xie Yanming were the institute and the author with the maximum number of literatures, respectively. Conclusion The clinical comprehensive evaluation of drugs was conducted based on the clinical value of drugs, guided by the policy requirements. It is suggested that researchers should conduct the comprehensive evaluation according to the focus and requirements of government agencies, the pharmaceutical industry and the clinical applications. -
Key words:
- Clinical comprehensive evaluation /
- Bibliometric /
- CiteSpace /
- Information visualization
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高脂血症是指血液中脂质水平异常，通常表现为总胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)升高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低[1]。高脂血症是心脑血管疾病的重要危险因素，可诱发动脉粥样硬化，导致冠心病、脑卒中、心肌梗死，增加心脑血管疾病的发病率和病死率。因此，预防和控制高脂血症具有重要意义[2]。国内外研究和临床实践证明，血脂异常是可以预防和控制的。胆固醇水平降低可显著减少心肌梗死、缺血性卒中事件、心血管死亡，提高心血管病患者的生活质量，有效减轻疾病带来的负担[3]。据统计全球每年约有3000万人死于高脂血症等脂代谢紊乱疾病，且呈逐年增长趋势[4]。
姜黄素是从姜科植物姜黄的干燥根茎中提取的一种多酚类物质[5]。它被认为是姜黄中最重要一类活性成分，具有一系列药理活性，如抗氧化、抗癌、抗炎、细胞保护和降低血脂等[6]。有研究表明，姜黄素对氧化应激、抑制癌症和炎症的进展有显著疗效[7]。此外，姜黄素的降脂作用也被广泛研究。综上所述，姜黄素可作为一种潜在的候选药物用于控制高脂血症所诱导的疾病，如动脉粥样硬化。众所周知，他汀类药物是一种临床常用的治疗高胆固醇血症和相关动脉粥样硬化疾病的处方药，而目前姜黄素已被证明在降低血浆总胆固醇和甘油三酯方面与他汀类药物疗效相当。然而姜黄素存在溶解度低和渗透差的问题，从而导致其口服给药时药物生物利用度低，对于高脂血、动脉粥样硬化等需要达到一定血药浓度为疗效前提的病症来说，姜黄素的传统剂型与市售剂型均无法达到理想的治疗效果。
本研究前期成功构建了姜黄素纳米乳口服给药系统，改善了姜黄素水溶性差的特性。基于此，本文继续探究了姜黄素纳米乳在大鼠体内的药动学特性，观察其对高脂血症模型大鼠的治疗作用，为姜黄素的临床应用提供更多的理论依据。
1. 仪器与试药
1.1 仪器
101A-2型干燥箱（上海实验仪器总厂）；AG285十万分之一电子分析天平（瑞士MettlerToledo公司）；SB100D超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；EPPENDORF5804R 高速冷冻离心机（德国Eppendorf有限公司）；DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂）；Agilent 6410 Triple Quad LC/MS（美国Agilent科技有限公司）；全自动生化分析仪Chemray 240 （深圳雷杜生命科技有限公司）；微型旋涡混合器（上海沪西分析仪器厂有限公司）。
1.2 药品与试剂
姜黄素原料药（批号XC20190521，西安小草植物科技有限公司）；姜黄素对照品（批号1108135-201412，纯度>99.8 %，中国食品药品检定研究院）；1,2-丙二醇（批号20190418，上海凌峰化学试剂有限公司）；Tween-80（批号2018161，上海凌峰化学试剂有限公司）；丙二醇单辛酸酯（Capryol 90，批号18139，上海嘉法狮贸易有限公司）；高脂饲料（批号20036219，常州鼠一鼠二生物科技有限公司）；姜黄素片（批号20190925，美国自然之宝®股份有限公司）；辛伐他汀片（SV，批号J20190011，舒降之®杭州默沙东制药公司）；TG试剂盒（批号2020012）、TC试剂盒（批号2020006）、HDL-c试剂盒（批号2020003）、LDL-c试剂盒（批号2020010，长春汇力生物技术有限公司）；SOD试剂盒（批号20200617）；MDA试剂盒（批号20200720）；肝脏匀浆TG试剂盒（批号20200810）；肝脏匀浆TC试剂盒（批号20200411，南京建成有限公司）；乌来糖（国药集团化学试剂有限公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国 TEDIA 有限公司）；水为重蒸水。
1.3 实验动物
雄性SD大鼠，SPF级，体重（180±20）g，海军军医大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（沪）2019-0004。温度：20~25 ℃；相对湿度：40 %~70 %；饮用水：高压灭菌，符合SPF级动物饮用水标准；光照条件：人工光线，12 h照射，12 h黑暗。
2. 方法与结果
2.1 姜黄素纳米乳的制备
姜黄素纳米乳的处方如下：油相Capryol 90在体系中占比为33.10 %，表面活性剂Tween-80为 34.16 %，助表面活性剂1,2-丙二醇为17.21 %，水相占比为15.52 %。制备方法为：精密称取处方量油相Capryol 90、表面活性剂Tween-80和助表面活性剂1,2-丙二醇，混合置于锥形瓶中，于45 ℃ 恒温搅拌至全溶，称取适量姜黄素原料药，搅拌至原料药完全溶解于上述体系中，冷却至室温后向体系中缓慢滴加蒸馏水至体系变为透明均匀的液体，即得姜黄素纳米乳，测得载药量为0.919 mg/g。对姜黄素纳米乳进行特性表征，结果表明所制备的纳米乳粒径分布范围窄且呈正态分布，平均粒径为（123.5±1.2）nm，PDI为(0.204±0.07)，表明该制剂的粒径分布及均匀性均符合纳米乳制剂要求。最优处方制备的纳米乳的透射电镜如图1所示。结果表明，纳米乳呈圆整均一的球体或类球体，具明显层状结构，粒径大小约为123.5 nm。
2.2 血浆中姜黄素的LC/MS含量测定方法的建立
2.2.1 色谱质谱条件[8]
色谱条件：色谱柱：Dikma Inspire C18柱（2.1 mm×100 mm，3 μm）；流动相：乙腈-0.1 %（V/V）甲酸水溶液（70∶30）；流速：0.3 ml/min；进样量：5 μl；柱温：35 ℃。
质谱条件：ESI离子源，正离子化模式，扫描方式为多反应监测（MRM模式），干燥气温度：350 ℃，干燥气流速：10 L/min，雾化压力：35 psi，裂解电压145eV，碰撞能量30 eV，定量离子对为m/z=369.3→286.4和m/z=369.3→177.0。
2.2.2 方法学考察
取7份大鼠空白血浆，每份600 μl，分别加入各浓度姜黄素标准品溶液 600 μl，涡旋震荡2 min，再加入1 000 μl甲醇及2 000 μl乙腈沉淀蛋白，涡旋震荡5 min，于4 ℃ 12 000 r/min离心15 min。上清液用氮气吹干，1 000 μl甲醇复溶，过0.22 μm针式微孔滤膜，所得滤液即加药血浆样品。同法处理空白血浆。按2.2.1项下条件进样测定，记录色谱图及峰面积。方法学考察表明，血浆中姜黄素在2.00~500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好，回归方程为：Y = 411.32 X+2071.88（r= 0.999 9）。专属性考察结果表明，血浆内源物质对姜黄素的含量测定没有干扰，方法专属性良好（结果如图2）。低、中、高3个浓度的姜黄素-血浆溶液的日内精密度分别为0.54 %、1.21 %、0.93 %，日间精密度分别为0.91 %、0.76 %、0.42 %。3个浓度血浆中的姜黄素提取回收率分别为72.9.2%、78.3%、80.2%，表明该方法可用于血浆中姜黄素的含量测定。
2.3 姜黄素纳米乳的药动学研究
2.3.1 给药方案
18只大鼠随机分为3组（姜黄素原料药组、姜黄素片剂组、姜黄素纳米乳组），每组6只，适应性饲养3 d后，禁食不禁水12 h。3组大鼠分别给予姜黄素原料药混悬液（62.8 mg/kg，以姜黄素含量计算）、姜黄素片剂粉末混悬液（62.8 mg/kg，以姜黄素含量计算）各1 ml，姜黄素纳米乳（31.4 mg/kg，以姜黄素含量计算）2 ml。于灌胃给药后的0、1、2、4、8、12、16、24、30、36 h时眼球后静脉丛取血1 ml，置预肝素化离心管中，上下颠倒混匀后3 000 r/min离心15 min，上清液即为含药血浆样品。吸取含药血浆样品600 μl，照“2.2.2”项下方法处理，上清液照“2.2.1”项下色谱条件进样测定。
2.3.2 药动学参数计算
药动学参数计算通过软件Kinetica 5.0对数据进行分析处理得到，计算结果如图3及表1所示。结果表明，与原料药相比，片剂的相对生物利用度为112.10 %，纳米乳的相对生物利用度为313.47 %。与纳米乳组相比，原料药组的cmax为201.48 %，片剂组的cmax为193.02 %，且平均滞留时间（MRT）比原料药组及片剂组更高（为原料药组的183.52 %，是片剂组的154.21 %），表明纳米乳组具有延缓药物吸收的效果，从而在更大程度上发挥稳定血药浓度，提高药物生物利用度的作用。
表 1 各给药组姜黄素的药动学参数($\bar x $ ±s，n=6)原料药组 片剂组 纳米乳组 cmax (ng/ml) 116.18±11.33 121.27±12.12 234.08±17.55 Tmax (t/h) 2.00±0.00 2.00±0.00 4.00±0.00 AUC0→36(ng·h/ml) 1151.12±125.77 1341.34±103.59 2914.42±323.15 AUC0→∞(ng·h/ml) 1202.71±115.28 1348.77±131.39 3770.15±333.28 t1/2 (t/h) 6.66±0.33 7.52±0.51 12.17±0.35 MRT(t/h) 9.89±0.59 11.77±0.31 18.15±0.38 2.4 药效学研究
2.4.1 动物分组、造模及给药
取SD大鼠56只，进行为期一周的适应性饲养后随机分为空白对照组（n=8）和模型组（n=48），空白组饲喂正常饲料，模型组饲喂定制高脂饲料（饲料含2-硫氧嘧啶0.2 %，可可脂17.18 %，胆固醇1.25%，蔗糖12.5 %，胆盐0.22 %）。整个造模周期为16 d，造模期间每日观察各组大鼠的精神、活动、食量、排便量变化等。结束造模后，所有大鼠禁食不禁水12 h，于眼球后静脉丛取血1 ml，室温静置30 min，3 000 r/min离心20 min，取上层血清检测各项生化指标（TC、TG、HDL-c、LDL-c）[9,10]。
造模成功后将上述模型组大鼠再随机分为模型组、姜黄素片剂组、阳性药（SV）组和姜黄素纳米乳低、中、高剂量组，每组8只。空白组（A组）及模型组（B组）给予生理盐水5 ml/ (kg·d)；阳性药组（C组）给与辛伐他汀20 mg/ (kg·d)（以辛伐他汀含量计）；姜黄素片剂组（D组）给与姜黄素片 62.8 mg/ (kg·d)（以姜黄素的含量计）；姜黄素纳米乳低（E组）、中（F组）、高（G组）3组给药剂量分别为15、30、60 mg/ (kg·d)（以姜黄素的含量计），连续21天灌胃给药。第21天给药结束后，各组大鼠禁食不禁水12 h，于第22天眼球后静脉丛取血1 ml离心取血清待测。
2.4.2 统计学处理
实验所得数据采用SPSS Statistics 22.0统计软件进行处理，方差齐性检验后，采用单因素方差分析，其中组间比较采用LSD法，两两比较采用独立样本t检验；若方差不齐，采用非参数检验。实验结果均以（
$\bar x $ ±s）表示，P<0.01表示具极显著性差异，P<0.05表示具显著性差异。采用 GraphPad Prism 6 绘制图表。2.4.3 肝脏指数
大鼠颈椎脱臼处死，称定体重后解剖取肝脏，冰PBS洗净血迹，称定肝脏湿重并记录，计算肝脏指数；肝脏指数=肝脏湿重/体重×100 %。
图4为给药前后各组大鼠的体重变化。结果表明，给药3周后，与空白组相比，各组均存在极显著性差异（P<0.001）。给药的前2周纳米乳组的体重均表现出正向增长趋势，而模型组、阳性药组以及姜黄素片剂组体重则呈现负增长情况；给药第3周时，仅姜黄素纳米乳高剂量组的体重出现正向增长，阳性药组以及姜黄素纳米乳低、中剂量组大鼠体重降低幅度略有缩小但仍呈下降趋势。
实验结束后剖取大鼠肝脏，肉眼观察到空白组大鼠的肝脏呈现出鲜红色且有光泽，边缘清晰锐利，质地软，与周围组织无明显黏连；模型组大鼠的肝脏肥大，色泽偏黄，边缘圆钝，质地稍硬，且表面的白色沉积明显，与周围组织黏连明显。各给药组大鼠的肝脏比空白组略大，颜色呈不同程度的泛黄白带红，其中以姜黄素纳米乳中剂量组肝脏的颜色与空白组最为接近。
肝脏湿重：如图5所示，除空白组外，各给药组与模型组间均无显著差异，但各给药组肝脏湿重与空白组均具极显著性差异（P<0.001）；
肝脏指数：如图5所示，除姜黄素纳米乳低剂量组外，其他各给药组与模型组之间均存在显著性差异，表明肝脏指数的降低与药物剂量间存在依赖性。阳性药组和片剂组肝脏指数尚未恢复到正常水平，推测原因可能是阳性药和片剂的给药周期还不能完全抵消造模导致的肝脏增重所致。
2.4.4 HE染色、油红O染色及病理切片
取肝脏左、右外叶上端分别于多聚甲醛中固定，脱水，切片，染色后置于光镜下观察。图6为肝脏的HE染色切片。其中A组肝细胞排列整齐，呈索状，内壁边界清晰，无中性粒细胞浸润，仅有零星小泡性脂肪病变；B组视野内可见明显的弥漫性大泡性脂肪病变，肝细胞肿胀，胞浆基质疏松，淡染，存在严重的气球样病变，可见Mallory小体，肝小叶边界不清，汇管区肿大，呈现中性粒细胞浸润，存在重度的肝细胞脂变率；C组和D组以中轻度脂肪病变为主，脂肪细胞占比显著减少；E组汇管区细胞排列比C、D两组更为整齐，肝细胞整体肿胀程度减轻，大泡性脂肪病变仅存在于Ⅲ带，炎性浸润程度减轻，水样病变减轻；F组和G组以小泡性脂变为主，少见大泡性脂变。
图 6 各组大鼠肝脏病理切片H&E染色（200×）A.空白组；B.模型组；C.阳性药组；D.姜黄素片剂组；E.姜黄素纳米乳低剂量组；F.姜黄素纳米乳中剂量组；G.姜黄素纳米乳高剂量组；黑色箭头指大泡样脂肪病变，黄色箭头指小泡样脂肪病变，黄色无柄箭头指气球样病变，黑色无柄箭头指Mallory小体。染色结果：空泡为脂滴，细胞核为蓝紫色，细胞质为紫红色。图7为油红O染色切片。A组大鼠肝细胞结构完整，细胞核颜色明显；B组肝细胞存在大片鲜艳脂滴，细胞核萎缩、色浅，存在重度脂肪病变；C组和D组仍存在大片连续脂滴，但汇管区附近脂滴颜色明显变淡；E组Ⅲ带脂滴色浅且小；F组和G组视野内所见均为浅色小脂滴，细胞核体积趋向空白组细胞核体积。
图 7 各组大鼠肝脏病理切片油红O染色（200×）A.空白组；B.模型组；C.阳性药组；D.姜黄素片剂组；E.姜黄素纳米乳低剂量组；F.姜黄素纳米乳中剂量组；G.姜黄素纳米乳高剂量组；染色结果：脂滴呈橘红色至鲜红色，细胞核呈蓝色。2.4.5 血清中TC、TG、HDL-c、LDL-c的表达水平
第21天给药结束后，所有大鼠禁食不禁水12 h，于第22天眼球后静脉丛取血1ml，室温静置2 h后3 000 r/min离心15 min取血清，按试剂盒操作说明检测血清中TC、TG、HDL-c、LDL-c的表达水平。
给药3周后，大鼠血清中各生化指标变化如表2所示。与模型组相比，姜黄素纳米乳低、中、高3个剂量组对TC降低效果均有统计学意义（P<0.001），其中，以中剂量组为佳，低剂量组对LDL-c的改善效果更为明显。对于血清中TG、TC的改善情况，与阳性药组相比，纳米乳低、中、高3个剂量组之间差异无统计学意义（P<0.05）；中、高剂量组TC与HDL比值的降低具有统计学意义（P<0.05），表明血脂比存在纳米乳剂量依赖性。
表 2 大鼠血清中TG、TC、HDL-c、LDL-c的表达水平及TC/HDL-C的变化趋势($\bar x $ ±s，n=8）组别 TG（mmol/L） TC（mmol/L） HDL-c（mmol/L） LDL-c（mmol/L） TC/HDL 空白组 1.34±0.09 2.90±0.44 0.31±0.10 1.88±0.17 9.35±0.41 模型组 2.88±0.51 12.45±0.13 1.84±0.10 3.56±0.66 6.77±1.14 阳性药组 1.41±0.25## 10.81±0.36## 3.03±0.53# 2.87±0.20## 3.57±0.47 姜黄素片剂组 1.79±0.22## 11.24±1.21 3.42±0.42# 4.08±0.32 3.29±0.89 姜黄素纳米乳低剂量组 1.29±0.20## 8.88±0.73## 2.39±0.62## 2.85±0.33# 3.72±0.57# 姜黄素纳米乳中剂量组 1.44±0.04## 7.68±0.34## 1.94±0.78## 2.57±0.82 3.96±0.36# 姜黄素纳米乳高剂量组 1.38±0.28## 8.89±0.64## 1.83±0.34## 2.85±0.67 4.86±0.49## *P<0.05， **P<0.001，与空白组比较；#P<0.05，##P<0.001，与模型组比较 2.4.6 肝脏中TC、TG、MDA、SOD的表达水平
将肝脏分为4份，一份置于−80 ℃冷冻保存，一份按如下步骤处理后待测：冰PBS冲洗肝组织表面血迹→研磨后制成10 %匀浆→离心→取上清液→测定各生化指标。
给药3周后大鼠肝脏匀浆中各生化指标表达水平如表3所示。结果表明，模型组肝脏匀浆中TG、TC表达水平的增幅与空白组相比具有统计学意义（P<0.001）；给药3周后，阳性药组和纳米乳低、中剂量组的TG、TC表达水平与模型组相比均有统计学差异（P<0.001），姜黄素纳米乳低、中、高3个剂量对大鼠肝脏中TG、TC表达水平的降低均具有统计学意义（P<0.05），其中，低剂量组效果最佳，这也与血清中TC水平变化趋势相一致。
表 3 大鼠肝脏匀浆中TG、TC、SOD以及MDA的变化趋势（$\bar x $ ±s，n=8）组别 TG（mmol/L） TC（mmol/L） SOD（U/mgprot） MDA（nmol/mgprot） 空白组 0.42±0.16 0.11±0.03 956.31±142.64 0.47±0.06 模型组 0.69±0.05** 0.09±0.02** 769.26±141.64**## 1.98±0.26** 阳性药组 0.50±0.11*## 0.7±0.01*## 988.25±168.90## 0.64±0.15*## 姜黄素片剂组 0.66±0.10**# 0.04±0.01*## 933.99±103.39# 0.79±0.11** 姜黄素纳米乳低剂量组 0.64±0.07**## 0.06±0.02*## 972.23±142.10## 0.80±0.03**# 姜黄素纳米乳中剂量组 0.58±0.05**## 0.07±0.02**## 916.55±117.32# 0.59±0.09## 姜黄素纳米乳高剂量组 0.54±0.13## 0.10±0.03** 799.81±121.85** 0.70±0.23*## *P<0.05， **P<0.001，与空白组比较；#P<0.05，##P<0.001，与模型组比较 超氧化物歧化酶（SOD）是机体内重要的抗氧化酶，能催化自由基清除反应，保护细胞免受自由基的攻击，明显改善肝肾等组织的氧化损伤，能直观的反映体内抗氧化酶的活性[11]。MDA是脂质过氧化反应的产物，反映了自由基的活跃程度，可用于评价机体内脂质过氧化的程度[12]。因此，选择SOD和MDA作为评价高脂血症大鼠肝功能损伤程度的指标。
给药3周后，与模型组相比，阳性药组及姜黄素纳米乳低剂量组均能够上调大鼠肝脏中SOD的表达水平（P<0.001），姜黄素纳米乳中剂量组对其表达水平也有正向影响（P<0.05）；此外，实验中发现，与姜黄素纳米乳低、中剂量组相比，高剂量组对体内SOD的表达呈现出抑制，推测此现象与姜黄素的双向调节机制有关；对于MDA的表达水平，与模型组相比，阳性药组和姜黄素纳米乳各剂量组对其表达的抑制作用均具有统计学意义（P<0.001），但效果仍以中剂量组为佳。
3. 讨论
姜黄素是一种被广泛研究的中药多酚类物质，具有抗氧化、抗炎和降血脂的药理活性。已有报道将他汀类与姜黄素对于改善血脂的功效进行了比较。他汀类药物是治疗高胆固醇血症和高脂血症的一线药物。研究表明，姜黄素在降低甘油三酯(TG)方面最有效，而他汀类药物在降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)方面最有效。姜黄素影响血浆脂质改变的途径与他汀类药物相似[13]。几乎所有胆固醇运输的途径都会受到药物制剂的影响，包括胃肠道对膳食中胆固醇的吸收、肝细胞对血浆胆固醇的清除、胆固醇逆向运输的介质以及从外周组织中清除胆固醇。此外，姜黄素的活性氧(ROS)清除能力降低了脂质过氧化的风险，而脂质过氧化会引发炎症反应，导致心血管疾病(CVD)和动脉粥样硬化[14]。综上所述，姜黄素或可作为一种安全且耐受性良好的他汀类药物辅助药物，更有效控制高脂血症。
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表 1 临床综合评价发文量排名前10位作者
序号 作者姓名 发文量 发文强度（%） 引文半衰期 1 谢雁鸣 13 10.32 0.923 2 王志飞 12 9.52 0.916 3 张 强 12 9.52 0.958 4 崔 鑫 11 8.83 0.954 5 廖 星 6 4.76 0.667 6 王晓玲 5 3.97 0.800 7 贾露露 5 3.97 0.750 8 尉耘翠 5 3.97 0.800 9 韩 晟 5 3.97 0.800 10 戴泽琦 5 3.97 0.800 
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