留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

《药学实践与服务》杂志目前不收取审稿费、版面费、加急费等费用,如收到邮件声称是编辑部X编辑,要求加作者微信的,请谨防财产损失!编辑部用于作者校对时绑定微信的邮件通过yxsjzzs@163.com发送,标题是《药学实践与服务》XML数字出版服务微信绑定,请区分开。

二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展

张艺昕 关欣怡 王博宁 闻俊 洪战英

张艺昕, 关欣怡, 王博宁, 闻俊, 洪战英. 二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
引用本文: 张艺昕, 关欣怡, 王博宁, 闻俊, 洪战英. 二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
ZHANG Yixin, GUAN Xinyi, WANG Boning, WEN Jun, HONG Zhanying. Advances in chiral analysis and stereoselective pharmacokinetics of dihydropyridine calcium antagonists[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
Citation: ZHANG Yixin, GUAN Xinyi, WANG Boning, WEN Jun, HONG Zhanying. Advances in chiral analysis and stereoselective pharmacokinetics of dihydropyridine calcium antagonists[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062

二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
基金项目: 海军军医大学本科生创新实践能力孵化基地项目(FH2021105)
详细信息
    作者简介:

    张艺昕,药学本科生,Email:1561667952@qq.com

    通讯作者: 洪战英,博士生导师,研究方向:生物体内药物分析,Email:hongzhy001@163.com
  • 中图分类号: R917

Advances in chiral analysis and stereoselective pharmacokinetics of dihydropyridine calcium antagonists

  • 摘要: 手性药物与安全有效用药的关系密切,大多数二氢吡啶类药物具有手性碳原子,以消旋体入药,进入体内后产生立体选择性处置特征,可能影响用药的安全有效。该研究围绕该类药物手性拆分及药动学特点,综述了近年来该类药物的手性高效液相色谱法(HPLC)和手性毛细管电泳法(CE)方法选择规律及体内分析应用;列举并比较了该类药物间的立体选择性药动学研究情况,发现该类药物部分具有明显的立体选择性差异,体内药效和毒性也随之不同。
  • 流感是一种严重的上呼吸道病毒感染,由于其高毒力和突变率,该病毒仍然是对公众健康的主要威胁。据美国疾病控制与预防中心和世界卫生组织估计,每年有多达65 万人死于季节性流感引起的呼吸道疾病[1]。传统中医药预防和治疗流感病毒导致的感染(如呼吸道肺炎和支气管炎)已成为中国临床上常规治疗策略,发挥了独特的医疗优势[2,3]

    感冒安颗粒是由金银花、连翘、板蓝根、拳参、桑叶、紫苏和荆芥等七味中药制成的复方制剂,临床应用30 多年,具有疏散风邪,解表退热功能,其预防和治疗呼吸道感染的作用已得到很好的临床验证,特别是在病毒感染初期的治疗效果尤其显著,但药效物质基础并不清楚。目前,建立了TLC法对方中的板蓝根和连翘两味药材进行特征鉴别;同时对方中各药味的共有成分绿原酸和齐墩果酸也建立了TLC鉴别方法。在含量限度方面,则建立了制剂中连翘酯苷A的HPLC法。尽管这些获批的标准已用于制剂常规质量控制,但尚需进一步进行质量评价,以期更客观、准确地反映感冒安颗粒的临床疗效。

    由于中药复方复杂的化学成分,它的药理作用是通过多靶点、多途径而实现的。流感病毒感染的病理生理过程主要是病毒的直接作用和宿主免疫反应损伤(如细胞因子风暴所致的炎性损伤和ROS导致的氧化应激损伤)的结果[2,4]。为了研究感冒安颗粒临床效果的药效物质基础,我们对组方各药味的化学成分进行了文献追踪,发现方中药味含有多种黄酮类成分,如异槲皮苷、芦丁、木樨草素及木樨草苷等[5-9]。而黄酮类成分对流感病毒的作用越来越受到关注[10,11]。异槲皮苷抑制流感病毒A和B的复制,与抗病毒药amantadine或者oseltamivir合用可抑制它们导致的耐药病毒出现[12]。槲皮素与流感病毒A H1N1(A/PR/8/34)的神经酰胺酶的结合与zanamivir相当,体内研究也证实了其抗流感病毒能力,可作为抗甲型H1N1流感的有效先导化合物[13]。Zima研究认为木犀草素及其同源物是强效流感核酸内切酶抑制剂,揭示黄酮类化合物的抗流感作用[14]。鉴于此,本研究在总黄酮含量测定的基础上[15],采用HPLC-MS/MS方法建立5 种黄酮类成分的定量方法,不仅为制剂质量评价提供方法学,也为进一步研究感冒安颗粒防治流感病毒引起的呼吸道感染机制奠定物质基础。

    Agilent Technologies 6410 Triple Quad LC/MS仪,配以Triple Quad B.02.01(B2043.12)数据处理软件(美国安捷伦公司);XS205DU电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);DL-720A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)。

    感冒安颗粒(本院院内制剂,批号110418、110704、111025、111121、111130、111221、120131、120201、120207、120214);芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,供UV法测定,含量以92.5 %计,批号:100080-200707);金丝桃苷对照品(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,含量以93.9 %计,批号:111521-201004);木犀草素对照品(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,批号:111520-200504);槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,批号:100081-200406);异槲皮苷对照品(成都曼斯特生物制品有限公司,纯度>99.0 %,批号:MUST-10021901);甲醇为色谱纯;甲酸为分析纯;水为蒸馏水。

    2.1.1   对照品溶液制备

    分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和木犀草素对照品各适量,用甲醇溶解,摇匀,各配制成500 μg/ml的对照品贮备液。分别精密量取5种对照品贮备液适量,稀释成浓度如下:分别含芦丁0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 μg/ml,金丝桃苷0.002、0.008、0.020、0.032、0.044、0.056、0.080 μg/ml,异槲皮苷0.03、0.10、0.25、0.45、0.65、0.95、2.00 μg/ml,槲皮素0.02、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.70 μg/ml,木犀草素0.012、0.026、0.040、0.054、0.082、0.096、0.200 μg/ml的混合对照品溶液。

    2.1.2   供试品溶液制备

    按已优化的黄酮提取方法进行[15]。取样品约0.5 g,精密称定,置量瓶中,加70 %甲醇35 ml,超声提取30 min,放冷,过滤,滤液加70 %甲醇溶液定容至50 ml,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

    色谱条件:采用Kromasil C 18(4.6 mm×150 mm,5 μm,100 Å)色谱柱;甲醇(A)- 0.1 %甲酸(B)作为流动相,按0~20 min,35 % A;20~40 min,45 % A梯度洗脱。

    质谱条件:电喷雾负离子化(ESI)源:毛细管电压 3.0 kV;气体温度 350 ℃,气体流速 10 L/min,雾化气压 35 psi。多反应模式(MRM)监测。5种黄酮检测的离子对:芦丁m/z 609.1→300.1、金丝桃苷和异槲皮苷m/z 463.0→300.1、槲皮素m/z 301.0→151.0、木犀草素m/z 285.0→132.9。

    2.3.1   检测限和定量限

    采用上述色谱条件,每个待测化合物对照品用70%甲醇溶液进行系列稀释,分别以信噪比(S/N)等于3和10确定各自的检测限和定量限。结果见表1

    表  1  5种黄酮成分的线性方程、相关系数、线性范围、检测限和定量限
    黄酮化合物 线性方程 相关系数
    r
    线性范围
    (ng/ml)
    检测限
    (ng/ml)
    定量限
    (ng/ml)
    芦丁 Y=24 527X–162.17 0.999 7 250~8 000 0.025 0.50
    金丝桃苷 Y=34 123X1.7381 0.999 1 2~80 0.005 0.01
    异槲皮苷 Y=29 935X+1 597.80 0.999 1 30 ~2 000 0.02 0.50
    槲皮素 Y=19 667X+370.71 0.999 2 20~700 0.02 0.10
    木犀草素 Y=33 076X–177.98 0.999 7 12~200 0.005 0.01
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格
    2.3.2   线性范围考察

    精密量取“2.1.1”项下配制的5 种黄酮成分的对照品混合溶液,照“2.2”项下进样测定,记录各待测组分的峰面积积分值。横坐标为黄酮成分质量浓度(X,ng/ml),纵坐标为峰面积(Y),进行线性回归,计算回归方程和相关系数。结果见表1,表明5 种黄酮成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系。

    2.3.3   精密度试验

    精密吸取供试品溶液(批号120131),照“2.2”项下操作,进样,连续测定5 次和连续测定5 d,记录各待测组分的峰面积积分值,计算日内、日间RSD。结果显示,芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和木犀草素的日内精密度RSD分别为1.09 %、1.42 %、1.69 %、0.86 %、1.27 %(n=5),日间精密度RSD分别为1.85 %、1.76 %、1.43 %、2.01 %、1.90 %(n=5),表明仪器精密度良好。

    2.3.4   重复性试验

    取同一批号样品(批号120131)5 份,各0.5 g,精密称定,照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,照“2.2”项下操作,进样,测定峰面积积分值,并进行含量测定。结果显示,芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和木犀草素的含量分别为260.16、1.84、19.76、13.39、3.73 μg/g(n=5),RSD分别为1.51 %、1.73 %、0.90 %、1.44 %、1.68 %(n=5),表明方法的重复性良好。

    2.3.5   加样回收率试验

    取已知含量的样品(批号120131)9 份,每份约0.5 g,精密称定,各精密加入对照品贮备液适量,使已知样品中加入的相当对照品量分别含芦丁140.00 μg、金丝桃苷0.90 μg、异槲皮苷10.00 μg、槲皮素7.00 μg、木犀草素1.90 μg的各对照品贮备液,按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液,照“2.2”项下操作,进样,测定峰面积积分值,计算加样回收率。结果显示,芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和木犀草素的平均加样回收率分别为:102.06%、101.60%、100.63%、102.81%、101.80%(n=9),RSD分别为1.56%、1.93%、0.67%、2.07%、1.84%(n=9)。

    2.3.6   样品含量测定

    取10 个批号的感冒安颗粒,分别按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液,照“2.2”项下操作,进样,测定峰面积积分值,计算含量,结果见表2

    表  2  不同批号感冒安颗粒含量测定结果($\bar x $±s, n=3)
    批号芦丁金丝桃苷异槲皮苷槲皮素木犀草素
    含量(μg/g)RSD(%)含量(μg/g)RSD(%)含量(μg/g)RSD(%)含量(μg/g)RSD(%)含量(μg/g)RSD(%)
    110418479.83±1.990.410.855±0.0040.4920.54±0.251.2314.83±0.050.313.46±0.061.70
    110704198.98±3.011.520.596±0.0061.0511.79±0.201.6815.31±0.130.864.51±0.010.19
    11102532.23±0.260.830.993±0.0121.2613.31±0.000.026.53±0.040.555.15±0.081.58
    11112169.18±1.031.510.499±0.0061.2613.36±0.211.568.04±0.141.695.65±0.071.19
    11113067.53±0.270.400.533±0.0081.5713.36±0.211.547.48±0.121.625.42±0.061.15
    111221275.38±3.611.310.291±0.0020.7311.44±0.020.2115.74±0.020.146.51±0.020.24
    120131264.55±0.510.191.825±0.0120.6820.29±0.040.1713.66±0.021.523.78±0.010.26
    120201239.19±1.550.650.593±0.0101.7618.95±0.060.3318.41±0.211.163.86±0.030.81
    120207109.20±2.141.970.503±0.0040.8318.00±0.211.166.72±0.081.224.21±0.020.37
    120214108.93±0.590.540.461±0.0020.4517.67±0.100.016.32±0.081.194.73±0.010.11
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    为了获得良好的MS结果,优化了检测的离子模式、碎裂电压、碰撞能量等参数,以获得高灵敏度的分子离子和碎片离子。结果显示,ESI采用负离子模式可使待测的黄酮成分有更高的灵敏度。对照品混合液经产物离子扫描显示,芦丁的主要碎片为m/z:300.1、271.0;金丝桃苷和异槲皮苷的主要碎片为m/z:300.1、270.8;槲皮素的主要碎片为m/z:178.6、151.0、120.9、106.9;木犀草素的主要碎片为m/z:150.9、132.9、106.8。依据定量碎片离子选择原则,从远离母离子、裂解方式稳定、碎片离子有足够的丰度等方面进行考察,最终选择的碎裂电压、碰撞能量和定量离子如表3所示。由于金丝桃苷和异槲皮苷是结构异构体,它们有相同分子离子峰[M-H] m/z 463,MS/MS图谱中有相同的产物离子峰m/z 300,这两个化合物通过比较两者在HPLC中的保留时间进行定位。

    表  3  5种黄酮化合物的质谱检测参数
    黄酮化合物母离子产物离子碰撞电压
    U/ V)
    碰撞能量
    U/ eV)
    芦丁609.1300.119038
    金丝桃苷463.0300.117025
    异槲皮苷463.0300.117025
    槲皮素301.0151.013019
    木犀草素285.0132.915037
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    采用已优化的测定条件,感冒安颗粒中5 种黄酮类成分通过与各自标准对照品的保留时间和MS谱图的比较得以鉴别和确认,结果见图1。由于金丝桃苷、异槲皮苷和芦丁均是以槲皮素为苷元,结合不同的糖而形成,金丝桃苷与异槲皮苷还具有相同的分子量,它们的保留时间非常相近。采用HPLC-UV或二极管阵列检测的方法专属性不强,待测成分间相互干扰,很难保证测定结果的准确性。而本研究采用MS/MS-MRM模式测定,实现了准确定量的目的。

    图  1  感冒安颗粒提取液5 种黄酮成分的MRM色谱图
    A. 芦丁的MRM色谱图;B.金丝桃苷、异槲皮素的MRM色谱图;C.槲皮素的MRM色谱图;D.木犀草素的MRM色谱图;1.芦丁;2. 金丝桃苷;3.异槲皮苷;4.槲皮素;5.木犀草素

    本研究采用经优化的超声提取法提取感冒安颗粒中黄酮成分,用所建立的LC-MS/MS方法测定了10 个批号样品,结果显示,每批样品中均为芦丁含量最高,金丝桃苷含量最低;批间样品同种黄酮成分含量存在差异。为了保证感冒安颗粒质量的稳定性,临床疗效的一致性,对其中的主要黄酮成分可以考虑设定最低限度要求。感冒安颗粒是经传统水提醇沉工艺制得的稠膏制粒而成,我们以往的研究表明,制剂中含有大量的酸性成分[16],工艺提取过程中的高温、偏低的pH值可能导致金丝桃苷、异槲皮苷、芦丁等苷类黄酮化合物发生水解反应。本研究将3种黄酮苷对照品及生产工艺获得的稠膏经2 % HCl溶液在80 ℃水浴加热处理30 min,进行HPLC-MS/MS分析,处理后的稠膏样品中金丝桃苷和芦丁含量降低,异槲皮苷和槲皮素含量增加;在3种黄酮苷对照品水解液中,均有槲皮素产生;除此之外,芦丁对照品溶液水解还出现了异槲皮苷。由此可以推测,感冒安颗粒的制备工艺可能导致黄酮类成分的水解和转化。

    本研究采用HPLC-MS/MS同时测定了感冒安颗粒中5 种黄酮类成分的含量,所建立方法的专属性、灵敏度、精密度和准确性均已得到确证,达到了同时测定多种结构相似的黄酮类成分的目的,为其质量标准的建立提供了方法学依据。我们的研究已经证明感冒安颗粒中含有多种酚酸类成分[17],本研究又测定了其中的黄酮类成分。这些成分可能共同作用于流感病毒在宿主内复制的多环节,或者改善流感病毒对机体的炎性损伤,降低炎性细胞因子表达,改善氧化应激损伤,提高机体的免疫力等,充分发挥其多途径和多靶点作用优势,为其预防和治疗流感病毒所致呼吸道感染性疾病奠定物质基础。

  • 图  1  尼卡地平、尼莫地平和尼群地平的手性对映体拆分电泳图[13]

    A.尼卡地平;B.尼莫地平;C.尼群地平;PTS:1,3,6,8-芘四磺酸四钠盐

    表  1  DHP类药物的HPLC手性分析方法

    药品 方法 固定相 流动相 保留时间(t/min) 分离度 参考文献
    马来酸
    氨氯地平
    CMPA Kromasil-Cl8 含20 mmol/L SBE-β-CD的10 mmol/L
    磷酸盐缓冲液-乙腈(75∶25)
    28.45,30.38 2.08 [10]
    西尼地平 CSP ChiralcelOD-H
    手性柱
    正己烷-正丁醇(92.5∶7.5) 1.88 [11]
    马尼地平 CSP ChiralcelOD-H
    手性柱
    正已烷-异丙醇
    (95∶5)
    1.58 [11]
    苯磺酸
    氨氯地平
    CMPA Agilent Eclipse XDB-C18 含20 mmol/L SBE-β-CD的10 mmol/L
    磷酸二氢钾溶液-甲醇(60∶40)
    15.050,18.032 2.1 [12]
    尼莫地平
    尼群地平
    CSP Co-MOF-74-L-Tyr手性柱 正已烷-异丙醇
    (98∶2)
    2.45
    2.63
    [13]
    注:“—”表示未提及;CMPA:手性流动相添加剂法;CSP:手性固定相法。
    下载: 导出CSV
  • [1] 淡美俊, 郝鹏, 赵怡, 等. 手性药物液相色谱分析的概念、技术与发展[J]. 中国科技术语, 2016, 18(3):62-64. doi:  10.3969/j.issn.1673-8578.2016.03.015
    [2] 章伟光, 张仕林, 郭栋, 等. 关注手性药物: 从“反应停事件”说起[J]. 大学化学, 2019, 34(9):1-12. doi:  10.3866/PKU.DXHX201904021
    [3] 徐雄, 宁卫红, 瞿志荣, 等. HPLC手性流动相添加剂及其用于药物对映体拆分中的影响因素[J]. 生物化工, 2018, 4(5):150-155. doi:  10.3969/j.issn.2096-0387.2018.05.044
    [4] KANG W, LEE DJ, LIU KH, et al. Analysis of benidipine enantiomers in human plasma by liquid chromatography-mass spectrometry using a macrocyclic antibiotic (Vancomycin) chiral stationary phase column[J]. J Chromatogr B, 2005, 814(1):75-81. doi:  10.1016/j.jchromb.2004.10.006
    [5] YU J, TANG J, YUAN X W, et al. Evaluation of the chiral recognition properties and the column performances of three chiral stationary phases based on cellulose for the enantioseparation of six dihydropyridines by high-performance liquid chromatography[J]. Chirality, 2017, 29(3-4):147-154. doi:  10.1002/chir.22690
    [6] SUN J Y, GÖZDE GÜNDÜZ M, ZHANG J Y, et al. Direct enantiomeric resolution of seventeen racemic 1, 4-dihydropyridine-based hexahydroquinoline derivatives by HPLC[J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(10):2513. doi:  10.3390/ijms20102513
    [7] DENG H, WU X, ZHANG L, et al. Synthesis and application of chitosan thiourea derivatives as chiral stationary phases in HPLC[J]. Carbohydr Polym, 2022, 296:119888. doi:  10.1016/j.carbpol.2022.119888
    [8] 宫丽, 贺浪冲, 任文艳, 等. 尼群地平对映体在Chiralcel OJ柱上的拆分特性研究[J]. 中国药业, 2006, 15(3):23-24. doi:  10.3969/j.issn.1006-4931.2006.03.019
    [9] 蔡诚, 王园朝, 邓飞. 尼卡地平、尼莫地平和尼群地平毛细管电泳手性拆分研究[J]. 杭州师范大学学报(自然科学版), 2012, 11(2):122-125.
    [10] 周采菊, 刘瑛. HPLC手性流动相添加剂法拆分马来酸氨氯地平[J]. 中国现代应用药学, 2009, 26(9):757-759.
    [11] 李成平, 曾怀超, 鲁琳, 等. 二氢吡啶钙拮抗剂马尼地平和西尼地平对映体的手性拆分研究[J]. 药物分析杂志, 2010, 30(4):661-663.
    [12] 刘志辉. 手性流动相添加剂法测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及其右旋杂质[J]. 中国药师, 2015, 18(9):1516-1518. doi:  10.3969/j.issn.1008-049X.2015.09.025
    [13] MA X, GUO Y, ZHANG L, et al. Crystal morphology tuning and green post-synthetic modification of metal organic framework for HPLC enantioseparation[J]. Talanta, 2022, 239:123143. doi:  10.1016/j.talanta.2021.123143
    [14] VAN EECKHAUT A, DETAEVERNIER M R, MICHOTTE Y. Separation of neutral dihydropyridines and their enantiomers using electrokinetic chromatography[J]. J Pharm Biomed Anal, 2004, 36(4):799-805. doi:  10.1016/j.jpba.2004.08.024
    [15] 聂桂珍, 李来生, 程彪平, 等. 磺丁基醚-β-环糊精修饰毛细管电色谱拆分地平类药物对映体[J]. 高等学校化学学报, 2014, 35(7):1414-1422. doi:  10.7503/cjcu20140099
    [16] MA M X, ZHANG J, ZHANG X C, et al. Zeolitic imidazolate framework-67-modified open-tubular column with cyclodextrin for enantioseparation in capillary electrochromatography[J]. ELECTROPHORESIS, 2022, 43(13-14):1415-1422. doi:  10.1002/elps.202100299
    [17] REN S, ZHANG Q, XUE S, et al. Use of gamithromycin as a chiral selector in capillary electrophoresis[J]. J Chromatogr A, 2020, 1624:461099. doi:  10.1016/j.chroma.2020.461099
    [18] 王娅莉, 王乐, 赵铭. 手性药物的药动学[J]. 河北化工, 2005, 28(4):11-13.
    [19] WANG L, LIU W, ZHANG Z, et al. Validated LC-MS/MS method for the determination of amlodipine enantiomers in rat plasma and its application to a stereoselective pharmacokinetic study[J]. J Pharm Biomed Anal, 2018, 158:74-81. doi:  10.1016/j.jpba.2018.05.037
    [20] SUCHANOVA B, SISPERA L, WSOL V. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry in chiral study of amlodipine biotransformation in rat hepatocytes[J]. Anal Chimica Acta, 2006, 573-574:273-283. doi:  10.1016/j.aca.2006.05.065
    [21] 房晶, 信长颖, 李金银, 等. 氨氯地平对映体在健康男性人体的立体选择性药动学研究[J]. 中国临床药理学杂志, 2016, 32(9):810-812,830.
    [22] MADDI S, YAMSANI M R, SEELING A, et al. Stereoselective plasma protein binding of amlodipine[J]. Chirality, 2010, 22(2):262-266. doi:  10.1002/chir.20738
    [23] 贺浪冲, 王嗣岑. 非手性与手性色谱法研究尼莫地平及其对映体在大鼠体内的药动学及组织分布(英文)[J]. 药学学报, 2003, 38(8):603-608. doi:  10.3321/j.issn:0513-4870.2003.08.011
    [24] ISSE F A, LE T, MAHMOUD S H. Enantioselective assay of nimodipine in human plasma using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Biomed Chromatogr, 2021, 35(2):e4971. doi:  10.1002/bmc.4971
    [25] LIU M, DENG M, ZHANG D, et al. A chiral LC-MS/MS method for the stereospecific determination of efonidipine in human plasma[J]. J Pharm Biomed Anal, 2016, 122:35-41. doi:  10.1016/j.jpba.2016.01.039
    [26] 马美玲, 刘玉海, 陈东, 等. 马尼地平对映异构体的手性拆分及其盐酸盐的药效学研究[J]. 中国药学杂志, 2018, 53(11):888-893.
    [27] ADIREDDY V, BIMIREDDY B P K, PONNERI V. Enantioselective determination of R-(–)-manidipine and S-(+)-manidipine in human plasma by a sensitive and selective chiral LC-MS/MS assay[J]. Biomed Chromatogr, 2017, 31(12):e4027. doi:  10.1002/bmc.4027
  • [1] 续畅, 周心娜, 漆璐, 王瑜, 王兴河.  基于文献计量学对我国临床试验用药品管理研究现状的数据挖掘 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-6. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404050
    [2] 何静, 安晔, 张朝绅.  复方黑参滴丸与复方黑参丸药效学实验比较研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(1): 17-21. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404009
    [3] 冯一帆, 严啸东, 张文彬, 李炳锋, 郭美丽.  菸花苷长期给药对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-7. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407038
    [4] 吴海韵, 杨甜, 张弛, 梁文仪, 苏娟.  气相色谱-离子迁移谱技术在中药研究中的应用进展 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-6. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202409007
    [5] 晁亮, 王辉, 沈淑琦, 游飘雪, 冀凯宏, 洪战英.  基于UHPLC-Q/TOF-MS代谢组学策略的葛根-知母药对防治阿尔茨海默病的药效与作用机制研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(1): 30-40. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202409035
    [6] 姚小静, 计佩影, 陆峰, 施国荣, 傅翔.  表面增强拉曼光谱法快速测定尿液中曲马多的研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(4): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202401072
    [7] 肖农, 陆诗依, 唐文雅, 居敏俐, 徐刚锋, 杨明华.  中成药微生物计数法前处理的影响因素和优化方法 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202403014
    [8] 曹奇, 张嘉宝, 王培.  基于无监督自动降维分析与手动圈门联用的骨骼肌髓系细胞多色流式分析方法 . 药学实践与服务, 2025, 43(3): 118-122. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404077
    [9] 崔亚玲, 吴琼, 马良煜, 胡北, 姚东, 许子华.  肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中肌醇烟酸酯皮肤药动学研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(1): 6-9, 21. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404006
    [10] 陈方剑, 赵娟娟, 叶侃倜, 孙煜昕, 刘继勇, 杨骏.  血通胶囊提取工艺优化及质量控制研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 82-86, 91. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202409003
    [11] 王鹏, 陈顺, 赵逸, 高守红, 王志鹏.  卡培他滨致小鼠手足综合征模型的建立及评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(9): 385-388, 398. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308045
    [12] 孙丹倪, 黄勇, 张嘉宝, 王培.  代谢相关脂肪性肝病的无创诊断与药物治疗 . 药学实践与服务, 2024, 42(10): 411-418. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202403049
    [13] 戴菲菲, 傅翔, 陈琼年, 俞苏纯.  上海某二级医院革兰阴性菌流行特征的回顾性分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(12): 528-532. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305005
    [14] 宋雨桐, 夏德润, 顾珩, 唐少文, 易洪刚, 沃红梅.  帕博利珠单抗与铂类化疗方案在晚期非小细胞肺癌一线治疗中的药物经济学评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(8): 334-340. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202303023
    [15] 夏哲炜, 曾垣烨, 朱海菲, 李育, 陈啸飞.  核磁共振磷谱法测定磷酸氢钙咀嚼片中药物含量 . 药学实践与服务, 2024, 42(9): 399-401, 406. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404063
    [16] 杨嘉宁, 赵一颖, 肖伟.  七味脂肝方对非酒精性脂肪性肝炎动物模型的药效学评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(9): 389-398. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404096
    [17] 凯丽比努尔·奥布力艾散, 李倩, 谢志, 贾文彦, 尹东锋.  星点设计-效应面法优化仑伐替尼混合胶束的制备工艺 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 495-502. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202403019
    [18] 何亚伦, 祁智, 常杰.  消胀通便膏在晚期肝癌患者阿片类药物相关性便秘中的应用研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(12): 520-523. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202309009
    [19] 赖立勇, 夏天爽, 徐圣焱, 蒋益萍, 岳小强, 辛海量.  中药青蒿抗氧化活性的谱效关系研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(5): 203-210, 216. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202211012
    [20] 陈炳辰, 佟达丰, 万苗, 闫飞虎, 姚建忠.  UPLC-MS/MS法测定小鼠血浆中紫杉醇脂肪酸酯前药及其药代动力学研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(8): 341-345. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404082
  • 加载中
图(1) / 表(1)
计量
  • 文章访问数:  10743
  • HTML全文浏览量:  2143
  • PDF下载量:  50
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2023-08-28
  • 修回日期:  2023-12-07
  • 网络出版日期:  2024-08-22
  • 刊出日期:  2024-08-25

二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
    基金项目:  海军军医大学本科生创新实践能力孵化基地项目(FH2021105)
    作者简介:

    张艺昕,药学本科生,Email:1561667952@qq.com

    通讯作者: 洪战英,博士生导师,研究方向:生物体内药物分析,Email:hongzhy001@163.com
  • 中图分类号: R917

摘要: 手性药物与安全有效用药的关系密切,大多数二氢吡啶类药物具有手性碳原子,以消旋体入药,进入体内后产生立体选择性处置特征,可能影响用药的安全有效。该研究围绕该类药物手性拆分及药动学特点,综述了近年来该类药物的手性高效液相色谱法(HPLC)和手性毛细管电泳法(CE)方法选择规律及体内分析应用;列举并比较了该类药物间的立体选择性药动学研究情况,发现该类药物部分具有明显的立体选择性差异,体内药效和毒性也随之不同。

English Abstract

张艺昕, 关欣怡, 王博宁, 闻俊, 洪战英. 二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
引用本文: 张艺昕, 关欣怡, 王博宁, 闻俊, 洪战英. 二氢吡啶类钙离子拮抗药物手性分析及其立体选择性药动学研究进展[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
ZHANG Yixin, GUAN Xinyi, WANG Boning, WEN Jun, HONG Zhanying. Advances in chiral analysis and stereoselective pharmacokinetics of dihydropyridine calcium antagonists[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
Citation: ZHANG Yixin, GUAN Xinyi, WANG Boning, WEN Jun, HONG Zhanying. Advances in chiral analysis and stereoselective pharmacokinetics of dihydropyridine calcium antagonists[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(8): 319-324. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308062
  • 手性药物是指药物分子具有手性中心,形成对映异构体,这些对映异构体在生物体内的药理活性、药物代谢及毒性等方面存在显著的差异[1]。有文献[2]对各国药典进行了研究统计,发现欧洲药典对所有手性药物都须明确左旋、右旋手性化合物的有效性;日本药典对大多数手性药物有明确手性构型要求;中国药典未明确要求特定构型的手性药物占比较多,这说明我国手性药物分析和检测仍需完善。二氢吡啶类(DHP)药物是一类常见的钙通道阻滞药,多用于治疗心脑血管疾病。《中华人民共和国药典》(2020年版)收载的DHP类药物中,除硝苯地平外,其他药物母核的C-4位为手性中心;但这些药物中仅左旋氨氯地平被药典收载,药典对其他DHP类药物构型并未作出明确要求。临床上DHP类药物大多以消旋体形式给药,其对映体的药理活性则差别很大。因此对DHP类药物的手性分析及体内过程的探讨,有助于该类药物进一步确认构型要求,降低用药安全隐患。

    • 目前,手性药物的分析方法主要为高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳法(CE),这些方法因其分析手性药物具有快速、分离效果好、检测灵敏度高、可选模式多等特点,应用较广,同时也为生物样品中手性药物的分析提供了技术支撑。

    • HPLC进行手性拆分的方法主要分为3种,包括手性固定相法(CSP)、手性流动相添加剂法(CMPA)和手性衍生化试剂法(CDR)。CSP是通过物理吸附或者化学键合的方法把手性化合物键合到固定相载体上,具有简单、快速、高效的特点。CMPA是在流动相中添加某种手性试剂,该手性试剂与对映体溶质之间通过氢键、离子键、配位键或者空穴的包含作用等相互作用,形成非对映异构体,然后根据非对映异构体自身的稳定性及其在固定相和流动相之间的分配系数不同,从而实现对映体的拆分[3]。该方法的成本低,无需昂贵的手性柱,且分离效果好。CDR是利用手性衍生化试剂与样品反应形成非对映异构体,然后在非手性柱上进行分离。该方法柱效高、价格便宜,但耗时且操作复杂,对手性试剂的纯度、反应过程中的稳定性等要求较高,目前国内外暂无用于拆分DHP类药物的文献报道。

      Kang等[4]采用万古霉素手性固定相分离人血浆中的贝尼地平对映体。流动相为甲醇-乙酸-三乙胺(100∶0.01∶0.000 1),柱温45 ℃,流速1 ml/min。血浆中贝尼地平在碱性条件下用乙醚液液萃取后进样分析,(–)-α-和(+)-α-贝尼地平异构体分别在2.4 min和3.4 min洗脱,浓度在0.05~10.00 ng/ml范围内线性关系良好,检测限均为0.05 ng/ml。

      Yu等[5]首次采用多糖衍生物手性固定相Chiralcel OD-RH、Chiralpak IB和Chiralpak IC柱对尼莫地平、西尼地平、尼卡地平、尼索地平、非洛地平和乐卡地平等6种DHP类药物进行对映体分离比较。其中,键合型手性柱溶剂相容性强、色谱分离效率高、重现性好、手性识别能力更广泛,分离效果好于涂布型手性柱。在Chiralpak IC柱上,流动相为正己烷-异丙醇(90∶10)时,尼莫地平、西尼地平、尼卡地平和尼索地平分离度分别为10.25、6.49、2.20和1.71;只有非洛地平和乐卡尼地平未分离,效果远好于Chiralpak IB柱,说明Chiralpak IC柱中氯代苯基产生的偶极作用增大了手性拆分的几率,适合用于DHP类药物的拆分。

      Sun等[6]在前人研究的基础上使用Chiralpak IC柱在标准正相洗脱模式、非标准洗脱模式和反相洗脱模式下对17种DHP结构类似物进行了对映体分离,并考察了醇改性剂、添加剂及温度的影响,发现标准正相洗脱模式对DHP对映体分离的整体效果较好,反相洗脱模式可以作为互补,分离正向模式下不能分离的化合物,证明了Chiralpak IC柱在DHP对映体分离中的广泛溶剂通用性,将不同洗脱模式组合可以针对多种类似物达到更好的分离效果。另外结合对映体分离结果和热力学研究发现,氢键、π-π相互作用、偶极-偶极相互作用、改性剂的浓度、极性在对映体分离中起了重要作用,而碱性添加剂的微小变化对对映体分离没有影响。

      Deng等[7]制备了一系列壳聚糖2-硫脲衍生物作为手性固定相,通过比较不同对映体的分离结果,发现其对DHP类钙离子拮抗剂表现出独特的手性识别特性。为进一步探究其机制,将壳聚糖衍生物(Thio-1c, 1e)与尼索地平、尼莫地平、西尼地平外消旋体进行了分子对接,发现壳聚糖硫脲衍生物的2-[3-(甲硫基)丙基硫脲]取代基是分离DHP类钙离子拮抗剂的关键因素。

      宫丽等[8]在纤维素键合OJ手性柱上对尼群地平的两个对映异构体进行了拆分,选用不同比例的正己烷-无水乙醇作为流动相,通过溶质计量置换保留模型考察了置换剂无水乙醇强度对拆分的影响,并通过改变流动相中三乙胺浓度及柱温,考察对保留与拆分的影响。溶质计量置换保留模型公式为Logk’=LogI-ZLog[D],式中k’为容量因子,LogIZ为常数,分别表征对映体分子对固定相亲合势和与固定相接触面积,[D]为流动相中置换剂的浓度,公式含义为溶质的容量因子的对数与流动相中置换剂的浓度对数之间有线性关系。通过改变流动相中无水乙醇浓度可以计算出LogIZ值,进而便可以通过公式考察手性固定相的拆分能力、流动相体系中置换剂对拆分的影响方式和程度等,确定色谱条件。发现以正己烷-无水乙醇(90∶10)时,在0~0.25 mol/L范围内,拆分效率及各对映体的保留值均随三乙胺浓度的增高而降低;保持柱温在20℃~30℃可以改善和提高拆分效果。

      除了以上的CSP外,CMPA也有应用,表1总结了DHP类药物的手性HPLC分析方法。

      表 1  DHP类药物的HPLC手性分析方法

      药品 方法 固定相 流动相 保留时间(t/min) 分离度 参考文献
      马来酸
      氨氯地平
      CMPA Kromasil-Cl8 含20 mmol/L SBE-β-CD的10 mmol/L
      磷酸盐缓冲液-乙腈(75∶25)
      28.45,30.38 2.08 [10]
      西尼地平 CSP ChiralcelOD-H
      手性柱
      正己烷-正丁醇(92.5∶7.5) 1.88 [11]
      马尼地平 CSP ChiralcelOD-H
      手性柱
      正已烷-异丙醇
      (95∶5)
      1.58 [11]
      苯磺酸
      氨氯地平
      CMPA Agilent Eclipse XDB-C18 含20 mmol/L SBE-β-CD的10 mmol/L
      磷酸二氢钾溶液-甲醇(60∶40)
      15.050,18.032 2.1 [12]
      尼莫地平
      尼群地平
      CSP Co-MOF-74-L-Tyr手性柱 正已烷-异丙醇
      (98∶2)
      2.45
      2.63
      [13]
      注:“—”表示未提及;CMPA:手性流动相添加剂法;CSP:手性固定相法。
    • CE是近几十年迅速发展并广泛使用的一种微分离技术,以高压电场为驱动力,毛细管为分离通道,根据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离。通常在缓冲液中添加手性识别试剂之后,以毛细管区带电泳(CZE)、胶束电动毛细管电泳(MEKC)和毛细管电色谱(CEC)为主要的几种分离模式来进行分析,实现快速、高效、低耗的手性药物分析。

      蔡诚等[9]采用毛细管区带电泳模式,以高磺化环糊精(HS-CD)为手性识别试剂,考察了手性试剂的类型、浓度及缓冲溶液pH值等对分离度的影响,确定了拆分尼卡地平、尼莫地平和尼群地平对映体的最佳条件为:运行缓冲溶液为50 mmol/ml三乙胺磷酸盐溶液(pH 2.5);温度:25 ℃;电压:15 kV。其中盐酸尼卡地平对映体在HS-γ-CD手性选择剂存在下获得基线分离,尼莫地平和尼群地平对映体分别在HS-β-CD和HS-α-CD手性选择剂存在下获得部分分离(图1)。对其分离机理进行了初步探讨,发现低pH值条件下叔胺类药物与高磺化环糊精之间存在一定的静电引力作用,对手性对映体的拆分起着决定性的作用。

      图  1  尼卡地平、尼莫地平和尼群地平的手性对映体拆分电泳图[13]

      Van Eeckhaut等[14]采用电动色谱法研究了尼莫地平、尼索地平和尼群地平的分离和同时对映体分离。以胆盐作为手性表面活性剂时可实现这些DHP衍生物的非手性分离,其中尼莫地平和尼索地平对映体能够分开但无法实现基线分离;十二烷基硫酸钠与中性环糊精混合的十二烷基胶束则无法实现对映体分离;而用羧甲基-β-环糊精在pH值为5.0的条件下则可实现尼索地平和尼莫地平的基线对映体分离。条件优化过程显示,缓冲液类型对尼索地平的手性分离影响较大;有机溶剂会降低尼莫地平对映体分离度,而甲醇或乙醇则增加了尼索地平对映体拆分;温度对尼索地平的对映体分辨率影响几乎无影响,而在较低温度下尼莫地平对映体分辨率提高,推测这可能与二者在醇中的溶解度有关,溶解度增加会导致手性识别能力降低。

      聂桂珍等[15]采用甲基丙烯酸缩水甘油酯原位聚合物基质,将磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)修饰到毛细管内壁,制备了开管电色谱柱,开管电色谱柱无须烧塞,操作与电泳同样便利。通过固定相和流动相中SBE-β-CD的协同作用,优化手性添加剂浓度、pH值、施加电压、温度及有机调节剂含量等条件,实现了10种DHP类药物对映体较好的拆分。优化的流动相组成为20 mmol/L NaH2PO4(pH 4.0),含4.0 mmol/LSBE-β-CD,乙腈的体积分数为10%~25%,施加电压15~25 kV,温度为15 ℃,电动进样2 kV×5 s,检测波长为236 nm。基于色谱分离数据探讨得知,氢键、静电、位阻和包结等多种作用对上述手性分离均有贡献。

      Ma等[16]以组氨酸、2-甲基咪唑和Co2+为原料,功能化NH2-β-环糊精(NH2-β-CD)制备了一种新型的用于手性分离的开管毛细管柱。表征表明,与NH2-β-CD@capillary相比,NH2-β-CD@His-ZIF-67@毛细管包膜柱对手性分子的分辨能力显著提高。NH2-β-CD@His-ZIF-67@毛细管柱实现了氨氯地平的基线分离,分离度1.70。

      Ren等[17]以第二代大环内酯类抗生素伽米霉素(Gam)作为CE中对映体分离的新型手性选择剂,系统地研究了影响对映体分离的因素,包括背景电解质(BGE)的组成、Gam的浓度、有机溶剂的种类和比例、外加电压等。在分析物中,氨氯地平对映体的分离度(Rs)高达15.65,据称这是该药在CE研究中报道的Rs最高值(除了使用分子印迹聚合物技术)。

    • 药动学主要研究机体对药物处置的动态变化,包括药物在机体内的吸收、分布、代谢及排泄过程。药物的代谢与人的年龄、性别、个体差异和遗传因素等有关。在人体的手性环境中,手性药物对映体与生物大分子间相互识别、相互作用的立体选择性导致了他们在吸收、分布、代谢和排泄过程中存在差异,引起一系列药动学参数的不同[18],包括生物利用度(F)、血药浓度-时间曲线下面积(AUC0~∞)、达峰浓度(cmax)、表观分布容积(Vd)、消除半衰期(t1/2)、血浆蛋白结合率等。

      药动学参数差异与其药效学密不可分。手性药动学的研究可以帮助了解药物在体内立体选择性的过程,更好地评价药物的疗效或毒性,便于开发出单一对映体的药物。目前对DHP类药物手性药动学研究比较明确的是氨氯地平,且临床已经出现了采用单一左旋氨氯地平给药来提高高血压的治疗效果,而其他该类药物如非洛地平、西尼地平等,手性药动学研究仍需加强。

      立体选择性药动学研究需要体内手性药物分析方法作为支撑。不同的生物样品如血浆、血清、尿液、组织,以及不同的前处理方法,可能存在影响对映体分离检测的干扰;另外由于给药剂量等原因,DHP类药物的血药浓度往往较低,前处理方法的纯化富集能力和对映体色谱分析时的灵敏度需要重点关注。目前对于生物样品,主要的前处理方法为液-液萃取(LLE)、蛋白沉淀法(PPT)和固相萃取法(SPE)等。其中PPT无法实现对分析物的纯化和富集,检测灵敏度也欠佳,而LLE分离富集效果好,目前应用最多。

    • 氨氯地平作为长效钙通道阻滞药,临床上广泛用于治疗高血压和心绞痛。其中左旋氨氯地平(S-AML)有扩张血管的作用,具备长效、高效且不良反应少的优点;而右旋氨氯地平(R-AML)不仅几乎无效,还易引起面部潮红、肢端水肿、头痛、头昏等不良反应。

      Wang等[19]采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中氨氯地平对映异构体。前处理采用LLE,50 μl血浆样品加入400 μl乙酸乙酯涡旋提取,以卡马西平为内标,使用CHIRALCEL OZ-RH柱,乙腈-水(10 mmol/L乙酸铵∶0.5%氨溶液=95∶5)进行分离,血浆中对映体的最低定量限为0.937 5 ng/ml。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃R-AML、S-AML和rac-AML(氨氯地平外消旋体),测定相应的血药浓度,并计算对映体间主要动力学参数。大鼠给药rac-AML后,R-AML的cmax和AUC0~∞分别为(53.08±10.42) μg/ml和(751.58±166.20) h·μg/ml,均显著低于S-AML的cmax和AUC0~∞,即(75.29±9.27) μg/ml和(1 083.42±248.54) h·μg/ml,而tmaxt1/2并无统计学差异,表明大鼠体内氨氯地平具有立体选择性处置差异;有研究表明[20]R-AML在大鼠肝细胞中的代谢程度较S-AML大,说明氨氯地平的代谢具有立体选择性,这也是体内S-AML血药浓度更高的原因。将单一对映体给药和消旋体给药对比发现,两者S-AML药动学参数和血浆药物浓度没有统计学上的显著差异,但是给药消旋体后R-AML各项参数却有明显降低,这说明氨氯地平的立体选择性代谢可能存在竞争性,消旋体给药后R-AML的代谢会抑制S-AML。

      房晶等[21]研究健康男性人体中氨氯地平对映体的立体选择性药动学,1 ml血浆采用Oasis HLB 96孔固相萃取板进行前处理,以氯氮䓬为内标,在CHIRAL-AGP柱上用10 mmol/L乙酸铵缓冲液-异丙醇(98∶2)进行手性对映体分离,最低定量限达0.10 ng/ml。健康男性口服给药5 mg后,不同时间点S-AML和R-AML的血浆浓度比值为1.29~1.60(P<0.05),S-AML的cmax为(3.19±0.50) ng/ml,较R-AML的(1.99±0.27) ng/ml明显升高(P<0.05),S-AML和R-AML的AUC0~∞分别为(195.48±39.20) h·ng/ml和(140.45±18.00) h·ng/ml,t1/2分别为(38.10±4.75)h和(32.54±6.58)h,差异均具有统计学意义(P<0.05),说明S-AML是健康男性体内的优势对映体。除了氨氯地平在代谢上的立体选择性外,与血浆蛋白的结合率也可能是其手性差异的原因,S-AML相较于R-AML,与人血清白蛋白的结合更强,从而在血浆中浓度更高[22]

    • 贺浪冲等[23]通过联用非手性与手性色谱法,研究尼莫地平及其对映体在大鼠体内药动学及组织分布的立体选择性特征。0.2 ml血浆或0.5 ml组织匀浆样品经过碱化后用正己烷-乙酸乙酯(50∶50)LLE,取上清液挥干后用甲醇0.25 ml复溶,进样100 μl进入ODS柱测定尼莫地平总浓度,同时收集该组分再进行LLE,进一步消除干扰后注入Chiralcel OJ柱,以正己烷-无水乙醇(85∶15)为流动相测定尼莫地平对映体比例。非手性与手性色谱的离线联用测定结果显示,血浆及组织匀浆液中尼莫地平对映体线性关系、最低检测限、精密度和准确度均满足分析要求,每种对映异构体的定量下限确定为5 ng/ml。大鼠体内S-(–)-尼莫地平清除较慢,在血液循环中的浓度水平较高;主要效应器官心脏、大脑、小脑中,S-(–)-尼莫地平的浓度高于R-(+)-尼莫地平,在主要消除器官肾脏、脾脏和肝脏中R-(+)-尼莫地平浓度高于中S-(–)-尼莫地平的浓度,说明尼莫地平对映体在大鼠体内药动学及组织分布存在着立体选择性差异。

      Isse等[24]使用LC-MS/MS,测定人体血浆中尼莫地平对映异构体含量。前处理的所有操作均在避光条件下进行,以避免分析物的光降解。将300 µl血浆与50 µl硝苯地平(50 ng/ml)混合后,向样品中加入200 µl氢氧化钠(1 mol/L)并涡旋混合,随后向样品中添加4 ml己烷和乙醚(1∶1)并涡旋混合,在室温下以2 000 r/min离心10 min。将有机层转移到洁净的试管中,并通过真空浓缩器进行干燥。残留物用125 µl流动相(甲醇∶水=75∶25)复溶,将40 µl体积的复溶样品注入LC-MS/MS。使用(S, S)-Whelk O1柱,流动相(甲醇∶水=75∶25)进行分离。实验结果显示,该方法灵敏度高、选择性强,可在1.5~75 ng/ml浓度范围内,准确测定尼莫地平对映异构体含量。由于人体肝脏对S-(–)-尼莫地平的代谢能力更强,因此口服给药后,人体血浆中R-(+)-尼莫地平浓度更高。

    • 依福地平是新一代DHP类药物,旨在抑制T型和L型Ca2+通道,临床上作为外消旋体给药,其R(–)构型被证明在降压中具有较好的肾保护作用。Liu等[25]研究开发并验证了一种可靠的LC-MS/MS方法用于测定人血浆中依福地平对映异构体,并成功用以表征依福地平的立体选择性药动学。0.5 ml血浆样品通过碱化后用正己烷-二氯甲烷-异丙醇(20∶10∶1)LLE,取上清液挥干后用50%水∶乙腈150 μl 复溶,进样20 μl进入CHIRALPAK ID色谱柱上优化手性分离。每种对映异构体的定量下限确定为0.100 ng/ml。该方法成功应用于口服40 mg盐酸依福地平片后健康受试者体内立体选择性药动学研究。依福地平对映体药动学参数cmax、MRT0~t和MRT0~∞的S(+)/R(–)比值分别为1.15、0.92和0.86,表明依福地平对映体在人体内药动学不存在明显立体选择性差异,开发R(–)构型单一对映体药物将使得具有高血压性肾损伤病人获益。

      马尼地平属于新型的DPH类长效钙通道拮抗剂,兼有L型和T型钙双通道阻滞作用,临床上作为外消旋体给药,其R构型无降压作用[26]。Adireddy等[27]采用了一种灵敏、选择性的LC-MS/MS分析方法,测定人体血浆中马尼地平的对映体选择性并应用于健康人体的药动学研究。取500 μl血浆样品,采用固相萃取,以100 ng/ml的R-(–)-马尼地平d4和S-(+)-马尼地平d4混合稀释液为内标,甲醇、水进行预处理,碳酸氢铵缓冲液和水洗涤,乙腈洗脱后氮气吹蒸,流动相溶解后取10 μl进样。由2 mmol/L碳酸氢铵和乙腈(15∶85,v/v)组成的等度流动相,在Chiralpack IC-3 C18柱上对R-(–)-马尼地平和S-(+)-马尼地平进行色谱分离,最低定量限达0.05 ng/ml。健康受试者在禁食条件下口服20 mg后,各药动学参数与该药物的公开评估报告基本一致,表明该分析方法的灵敏度足以达到要求。

    • 手性药物的对映体虽然具有相似的理化性质,但在体内手性环境中具有高度的立体选择性,手性药物的临床疗效是药物体内过程和生物活性立体选择性的综合结果。

      目前除氨氯地平已采用单一对映体给药外,其他DHP类药物还是以消旋体给药,其研究主要集中在手性分析及拆分机理上,仅极个别的药物如尼卡地平、尼莫地平等进行了手性药动学研究,发现部分对映体在生物体内药动学及组织分布存在着立体选择性差异;部分药物如非洛地平、西尼地平等的类似研究还需进一步加强。这主要是因为DHP类药物手性分析条件较为复杂,不仅是手性固定相和手性添加剂的选择,添加剂的浓度、pH值、温度及有机调节剂含量等条件的改变都会对拆分结果产生较大影响。特别是应用到体内分析时,需要考虑原有的拆分方法是否能够满足高灵敏的检测,样品处理是否能够消除内源性干扰对手性分离系统的影响,分析周期是否符合大批量样品测定,因此亟待开发出适合生物样品中DHP类药物手性分析的HPLC或CE方法,为揭示药物或候选化合物可能的立体选择性代谢途径,最大限度地发挥药效和降低毒副作用,以及进一步的结构改造及临床用药提供更为合理的建议。

参考文献 (27)

目录

/

返回文章
返回