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中药青蒿为植物菊科黄花蒿(Artemisia annua L.)的干燥地上部分，味苦、辛，性寒，归肝、胆经，具有清虚热等功效[1]。现代研究表明，青蒿及其所含有关单体成分除了在抗疟疾方面有效外，在抑菌抗炎、免疫调节和缓解热应激等方面也有效果[2]，特别是在抗氧化方面，青蒿亦表现出良好作用[3]。现有研究表明，氧化应激与许多疾病关系密切，过度氧化应激可导致骨质疏松症等疾病[4]。目前，对青蒿所含活性成分青蒿素研究较多，特别是其抗疟、抗氧化等作用受到关注[5]，但青蒿素之外的其他成分在抗氧化方面亦有活性[6-9]，应受到重视。本研究进行青蒿抗氧化活性的谱效关系研究，分析色谱特征峰与DPPH和ABTS自由基清除能力的关联性[10]，探究青蒿所含不同化学成分的抗氧化活性，以阐明青蒿体外抗氧化活性的药效物质基础，为青蒿的质量评价和资源开发等提供依据。
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岛津LC-20AD型高效液相色谱仪，包括四元泵、PAD检测器、自动进样器（日本岛津株式会社）；BT285S型电子分析天平（德国Sartorius 公司）；DL-1000B型超声波清洗仪（上海之信仪器有限公司）；ELx 800型多功能酶标仪（美国 Biotek公司）。
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东莨菪内酯（批号：20220215）、芹菜素（批号：20220216）、木犀草素（批号：20220216）购自上海历鼎生物技术有限公司；异绿原酸A（批号：DSTDY054701）、异绿原酸B（批号：DST210625-037）、异绿原酸C（批号：DSTDY003802）、滨蒿内酯（批号：DSTDB003101）、艾黄素（批号：DST220119-004）、青蒿素（批号：DSTDQ004702）、青蒿酸（批号：DST210919-048）购自成都德思特生物技术有限公司；所有对照品纯度均≥98%。DPPH自由基清除能力试剂盒（批号：20220223）、ABTS自由基清除能力试剂盒（批号：20220224）购自上海励瑞生物科技有限公司。
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11批青蒿药材样品信息见表1，经海军军医大学药学系生药教研室辛海量教授鉴定为Artemisia annua L.的干燥地上部分。
表 1 药材样品来源信息
序号 产地 序号 产地 S1 河北邯郸 S7 安徽亳州 S2 安徽亳州 S8 江西赣州 S3 河南驻马店 S9 四川自贡 S4 安徽亳州 S10 河南南阳 S5 湖北恩施 S11 重庆市 S6 安徽亳州 -
采用 Agilent C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）色谱柱；流动相为0.2%磷酸水溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脱（0～5 min，90%→82.5% A；5～10 min，82.5%→75% A；10～30 min，75%→62% A；30～38 min，62%→58.3% A；38～43 min，58.3% A；43～48 min，58.3%→55% A；48～58 min，55→40% A；58～68 min，40%→20% A；68～72 min，20%→18.5% A；72～80 min，18.5%→5% A；80～90min，5%→90% A）；流速：1 ml /min；柱温：室温；检测波长：220 nm；进样量：10 μl。
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精密称取青蒿素、艾黄素、青蒿酸、猫眼草黄素、芹菜素、木犀草素、异绿原酸C、异绿原酸A、异绿原酸B、滨蒿内酯、东莨菪内酯对照品适量，用甲醇溶解得到浓度分别为300、31、96、78 、16、12、52、134、28、18、86 μg/ml的混合对照品溶液[11]。
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药材粉末过50目筛后，精密称取1.5 g，加入甲醇50 ml，记录重量后超声（600 W，40 kHz，50 ℃）提取50 min，取出放置冷却至室温后加甲醇至之前的重量，混匀，过0. 45 μm微孔滤膜。
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取“2.2.2”项下编号为S10的供试品溶液适量，按“2.1”项所述条件连续运行6次，计算得到RSD（色谱峰保留时间）均小于0.49%，RSD（峰面积）均小于1.93%，表明本研究所用设备精密度良好。
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取“2.2.2”项下编号为S10的供试品溶液适量，分别于室温下放置0、2、4、8、12、16、24 h时按“2.1”项所述条件运行，计算得到RSD（色谱峰保留时间）均小于0.69%，RSD（峰面积）均小于4.67%，说明配制的溶液在1 d内具有稳定性。
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取编号为S10的青蒿样品粉末1.5 g，共6份，精密称定，按“2.2.2”项和“2.1”项下制备供试品溶液并运行，计算得到色谱峰保留时间均小于0.72%，峰面积均小于4.76%，表明该方法重复性良好。
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分别取11批青蒿样品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样检测后，将获得的HPLC数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版），得到11批青蒿样品的指纹图谱，指认出48个共有峰，见图1、图2。
图 1 11批中药青蒿样品的HPLC叠加指纹图谱
图 2 11批中药青蒿样品的HPLC对照图谱
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11批青蒿样品共有48个共有峰，共有峰占总峰比在0.776~0.864之间。选择S10为参照图谱，时间窗宽度设置为0.1 min，采用平均数法，以指纹图谱中峰形较好的色谱峰进行多点校正后生成叠加图谱，即为对照图谱。通过与混合对照品的HPLC分析结果对比，指认出9号峰为东莨菪内酯、14号峰为滨蒿内酯、15号峰为异绿原酸B、16号峰为异绿原酸A、23号峰为异绿原酸C、31号峰为木犀草素、35号峰为芹菜素、38号峰为猫眼草黄素、39号峰为青蒿素、40号峰为艾黄素、48号峰为青蒿酸（图3）。图谱显示，异绿原酸A峰面积大且稳定，分离度良好，故对比其保留时间（峰面积），其他峰的相对保留时间（峰面积）=其他峰的保留时间（峰面积）/异绿原酸A的保留时间（峰面积），见表2、表3。
图 3 混合对照品的HPLC图
表 2 11批中药青蒿样品HPLC图谱共有峰的相对保留时间
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD（%） 峰1 0.071 0.071 0.071 0.071 0.070 0.070 0.070 0.071 0.070 0.072 0.072 1.060 峰2 0.075 0.075 0.075 0.075 0.075 0.074 0.075 0.075 0.074 0.075 0.075 0.540 峰3 0.303 0.308 0.308 0.309 0.309 0.309 0.310 0.311 0.310 0.310 0.309 0.680 峰4 0.396 0.401 0.401 0.401 0.400 0.401 0.401 0.402 0.402 0.403 0.402 0.450 峰5 0.418 0.423 0.423 0.424 0.424 0.423 0.424 0.425 0.424 0.425 0.425 0.460 峰6 0.433 0.437 0.437 0.437 0.436 0.436 0.436 0.437 0.437 0.439 0.438 0.340 峰7 0.468 0.472 0.472 0.472 0.472 0.472 0.472 0.473 0.473 0.473 0.473 0.300 峰8 0.662 0.667 0.667 0.667 0.667 0.666 0.667 0.668 0.667 0.668 0.668 0.250 峰9 0.717 0.723 0.723 0.723 0.723 0.722 0.724 0.724 0.724 0.724 0.724 0.280 峰10 0.731 0.739 0.738 0.738 0.741 0.737 0.738 0.738 0.738 0.738 0.740 0.340 峰11 0.794 0.796 0.796 0.796 0.796 0.795 0.797 0.797 0.796 0.797 0.797 0.120 峰12 0.810 0.815 0.815 0.815 0.809 0.814 0.815 0.815 0.814 0.817 0.817 0.310 峰13 0.823 0.825 0.825 0.825 0.825 0.824 0.826 0.827 0.825 0.826 0.826 0.130 峰14 0.912 0.912 0.912 0.913 0.911 0.912 0.914 0.914 0.913 0.913 0.914 0.110 峰15 0.983 0.982 0.983 0.983 0.982 0.982 0.983 0.985 0.982 0.984 0.983 0.100 峰16 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0 峰17 1.038 1.037 1.037 1.037 1.037 1.037 1.037 1.038 1.037 1.038 1.038 0.050 峰18 1.058 1.056 1.058 1.058 1.060 1.060 1.061 1.062 1.060 1.059 1.059 0.160 峰19 1.078 1.079 1.078 1.078 1.075 1.074 1.078 1.079 1.075 1.078 1.079 0.170 峰20 1.133 1.131 1.131 1.131 1.131 1.129 1.130 1.131 1.129 1.132 1.132 0.110 峰21 1.157 1.154 1.157 1.155 1.155 1.156 1.156 1.157 1.154 1.158 1.156 0.110 峰22 1.190 1.190 1.189 1.189 1.190 1.192 1.188 1.189 1.187 1.189 1.192 0.130 峰23 1.199 1.198 1.198 1.198 1.198 1.198 1.199 1.199 1.197 1.198 1.198 0.050 峰24 1.215 1.214 1.214 1.214 1.213 1.213 1.213 1.215 1.212 1.214 1.214 0.070 峰25 1.246 1.244 1.244 1.244 1.243 1.242 1.243 1.244 1.242 1.244 1.245 0.100 峰26 1.307 1.306 1.306 1.307 1.306 1.305 1.306 1.308 1.306 1.306 1.308 0.070 峰27 1.452 1.453 1.450 1.450 1.450 1.450 1.450 1.453 1.449 1.448 1.449 0.110 峰28 1.464 1.462 1.463 1.463 1.464 1.463 1.464 1.465 1.461 1.461 1.460 0.110 峰29 1.497 1.493 1.495 1.495 1.492 1.492 1.495 1.500 1.492 1.494 1.494 0.160 峰30 1.656 1.655 1.656 1.653 1.648 1.645 1.648 1.649 1.647 1.658 1.659 0.300 峰31 1.665 1.665 1.672 1.663 1.659 1.657 1.657 1.658 1.656 1.667 1.667 0.320 峰32 1.718 1.718 1.717 1.716 1.711 1.709 1.710 1.711 1.708 1.719 1.721 0.270 峰33 1.752 1.752 1.751 1.748 1.743 1.738 1.738 1.740 1.739 1.754 1.756 0.400 峰34 1.770 1.770 1.769 1.767 1.762 1.758 1.758 1.759 1.758 1.772 1.775 0.360 峰35 1.833 1.834 1.833 1.830 1.825 1.821 1.821 1.822 1.820 1.835 1.838 0.360 峰36 1.893 1.894 1.893 1.890 1.884 1.879 1.879 1.880 1.879 1.896 1.900 0.420 峰37 1.942 1.943 1.942 1.939 1.932 1.927 1.927 1.928 1.928 1.945 1.949 0.430 峰38 1.950 1.950 1.949 1.946 1.939 1.934 1.934 1.935 1.935 1.953 1.956 0.430 峰39 2.027 2.027 2.026 2.023 2.015 2.010 2.009 2.011 2.011 2.030 2.034 0.460 峰40 2.036 2.036 2.032 2.031 2.024 2.019 2.018 2.016 2.020 2.039 2.043 0.470 峰41 2.102 2.102 2.101 2.097 2.090 2.084 2.084 2.085 2.085 2.105 2.109 0.450 峰42 2.117 2.116 2.114 2.111 2.103 2.097 2.097 2.097 2.098 2.119 2.122 0.470 峰43 2.156 2.155 2.153 2.149 2.141 2.135 2.134 2.135 2.136 2.157 2.161 0.490 峰44 2.226 2.224 2.223 2.219 2.211 2.204 2.204 2.205 2.205 2.226 2.230 0.470 峰45 2.233 2.232 2.230 2.226 2.218 2.212 2.211 2.213 2.212 2.234 2.238 0.470 峰46 2.267 2.265 2.263 2.259 2.250 2.243 2.243 2.244 2.244 2.265 2.270 0.490 峰47 2.329 2.327 2.325 2.321 2.312 2.306 2.304 2.306 2.306 2.328 2.332 0.480 峰48 2.363 2.362 2.36 2.355 2.346 2.339 2.338 2.340 2.340 2.363 2.367 0.490 共有峰/总峰 0.837 0.815 0.778 0.821 0.811 0.834 0.864 0.776 0.823 0.806 0.838 表 3 11批中药青蒿样品HPLC图谱共有峰的相对峰面积
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD(%) 峰1 0.221 0.718 0.167 0.215 6.001 18.615 0.134 0.037 0.545 0.046 0.033 232.240 峰2 0.539 2.042 0.539 0.505 11.735 36.124 0.337 0.055 1.571 0.192 0.041 223.380 峰3 0.065 0.102 0.060 0.131 0.300 0.356 0.050 0.035 0.070 0.032 0.028 100.170 峰4 0.066 0.061 0.059 0.088 0.121 0.476 0.033 0.015 0.064 0.021 0.026 139.490 峰5 0.134 0.056 0.104 0.130 0.183 0.339 0.145 0.084 0.080 0.054 0.073 64.820 峰6 0.391 0.338 0.288 0.344 0.243 0.408 0.321 0.169 0.271 0.131 0.077 39.430 峰7 0.987 0.201 0.214 0.514 0.385 0.315 0.850 0.405 0.308 0.251 0.482 57.330 峰8 0.375 0.295 0.217 0.584 0.686 0.903 0.376 0.150 0.338 0.143 0.305 59.310 峰9 0.533 0.646 0.316 0.766 2.647 4.610 0.201 0.130 0.674 0.112 0.332 139.510 峰10 0.223 0.058 0.024 0.137 0.259 0.464 0.189 0.008 0.051 0.039 0.023 104.800 峰11 0.225 0.203 0.202 0.236 0.365 0.952 0.079 0.120 0.145 0.112 0.069 101.160 峰12 0.119 0.213 0.234 0.245 0.516 0.872 0.116 0.072 0.117 0.055 0.049 105.050 峰13 0.197 0.181 0.207 0.214 0.376 1.106 0.085 0.107 0.143 0.111 0.061 116.600 峰14 0.055 0.151 0.081 0.096 0.132 0.242 0.064 0.129 0.067 0.047 0.058 57.120 峰15 0.125 0.315 0.186 0.226 0.295 0.477 0.109 0.138 0.179 0.062 0.126 58.660 峰16 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0 峰17 1.130 0.724 0.667 1.118 0.879 0.891 1.175 0.356 0.943 0.466 0.849 31.770 峰18 0.104 0.101 0.185 0.115 0.241 0.060 0.089 0.224 0.053 0.108 0.087 51.150 峰19 0.551 0.465 0.406 0.497 1.441 1.610 0.265 0.566 0.291 0.253 0.229 79.600 峰20 0.050 0.093 0.222 0.077 0.080 0.171 0.041 0.214 0.047 0.079 0.029 69.220 峰21 0.086 0.169 0.206 0.138 0.095 0.248 0.085 0.079 0.120 0.066 0.058 50.140 峰22 0.096 0.098 0.081 0.120 0.130 0.177 0.105 0.050 0.112 0.069 0.078 33.720 峰23 0.251 0.842 0.321 0.530 0.626 0.594 0.206 0.256 0.418 0.121 0.353 52.610 峰24 0.237 0.280 0.147 0.286 0.324 0.264 0.244 0.138 0.289 0.122 0.176 30.790 峰25 0.445 0.565 0.441 0.730 0.725 0.619 0.486 0.121 0.558 0.243 0.306 40.560 峰26 0.175 0.211 0.243 0.279 0.427 0.832 0.121 0.107 0.199 0.093 0.120 83.960 峰27 0.050 0.045 0.030 0.090 0.161 0.245 0.056 0.006 0.071 0.028 0.027 95.860 峰28 0.063 0.243 0.054 0.177 0.170 0.123 0.049 0.036 0.127 0.018 0.080 68.020 峰29 0.107 0.125 0.092 0.177 0.361 0.428 0.091 0.015 0.109 0.053 0.041 90.430 峰30 0.080 0.390 0.063 0.298 1.373 1.312 0.065 0.019 0.113 0.026 0.030 148.400 峰31 0.071 0.216 0.066 0.163 0.244 0.216 0.065 0.023 0.100 0.030 0.158 64.710 峰32 0.027 0.071 0.019 0.054 0.303 0.210 0.030 0.014 0.032 0.017 0.018 131.430 峰33 0.160 0.445 0.234 0.380 1.852 2.801 0.146 0.036 0.261 0.087 0.075 151.790 峰34 0.114 0.280 0.166 0.312 0.777 1.295 0.117 0.019 0.159 0.054 0.055 128.230 峰35 0.336 1.630 0.399 1.267 6.102 5.469 0.423 0.117 0.603 0.123 0.317 141.670 峰36 0.070 0.330 0.042 0.260 1.421 1.875 0.063 0.004 0.116 0.013 0.021 167.530 峰37 0.153 0.999 0.269 0.774 3.799 5.304 0.195 0.088 0.399 0.071 0.106 159.420 峰38 0.304 0.702 0.221 0.534 3.139 3.099 0.303 0.068 0.400 0.101 0.143 140.610 峰39 0.090 0.447 0.148 0.331 1.801 2.513 0.123 0.022 0.194 0.042 0.033 159.710 峰40 0.084 0.285 0.091 0.199 1.102 1.365 0.043 0.076 0.122 0.021 0.016 151.000 峰41 0.190 0.366 0.232 0.172 1.131 2.101 0.068 0.033 0.226 0.055 0.039 152.190 峰42 0.157 0.322 0.185 0.229 1.672 2.273 0.121 0.028 0.231 0.047 0.052 155.930 峰43 0.065 0.137 0.091 0.109 0.535 1.037 0.049 0.017 0.093 0.027 0.027 157.670 峰44 0.059 0.108 0.068 0.049 0.303 0.650 0.019 0.012 0.062 0.017 0.014 156.080 峰45 0.110 0.234 0.138 0.113 0.747 1.344 0.045 0.020 0.135 0.033 0.025 153.940 峰46 0.083 0.114 0.089 0.161 0.705 1.559 0.064 0.024 0.127 0.032 0.049 170.940 峰47 0.108 0.285 0.176 0.201 1.054 2.412 0.039 0.039 0.161 0.037 0.038 175.050 峰48 0.389 0.878 0.171 0.854 4.399 5.353 0.419 0.045 0.356 0.065 0.162 155.940 -
将试剂盒中Trolox溶液按说明书稀释成梯度浓度，加入反应液、不同浓度的Trolox溶液，并设置空白对照。反应结束后，在相应波长下测出测定孔吸光度Ac、空白孔吸光度Ak，自由基清除率（%）=（1−（Ac−Ak）÷Ak）×100%，以浓度（Y）对DPPH自由基清除率（X）进行线性回归，获得标准回归曲线方程，见表4，以标准回归曲线方程计算得出自由基清除能力。
表 4 自由基标准回归曲线方程
自由基 标准回归曲线方程 r DPPH Y=0.021 8X+0.005 7 0.999 9 ABTS Y=0.447 6X+0.012 4 0.997 3 -
取11批供试品溶液（编号：S1～11，按“2.2.2”项下方法制备）各1 ml，加无水甲醇9 ml稀释10倍；对照孔加入供试品100 μl、无水甲醇150 μl，测定孔加入供试品100 μl、DPPH工作液150 μl，空白孔加入供试品100 μl、DPPH工作液150 μl后混匀，避光室温下静置0.5 h，于540 nm波长处测得对照孔吸光度Ad，测定孔吸光度Ac，空白孔吸光度Ak，DPPH自由基清除率（%）=（1−（Ac-Ad）÷Ak）×100%，供试品DPPH自由基清除能力（mmol/L Trolox）=带入标准回归曲线方程所得Trolox的浓度×10，结果见表5。11批青蒿样品中，样品8（编号：S8）清除DPPH自由基的能力最强。
表 5 青蒿抗氧化活性检测（mmol/L Trolox）
编号 DPPH清除能力 ABTS清除能力 S1 2.725 6.243 S2 1.336 2.025 S3 2.765 4.521 S4 3.110 7.190 S5 1.617 2.848 S6 0.970 0.853 S7 5.057 8.641 S8 6.477 10.453 S9 2.025 2.575 S10 4.731 8.313 S11 5.321 9.848 -
取11批供试品溶液（编号：S1～11，按“2.2.2”项下方法制备）各1 ml，加无水甲醇9 ml稀释10倍；对照孔加入供试品100 μl、无水甲醇150 μl，测定孔加入供试品100 μl、ABTS工作液150 μl，空白孔加入无水乙醇100 μl、ABTS工作液150 μl，混匀置于室温反应6 min，于405 nm波长处测得对照孔吸光度Ad，测定孔吸光度Ac，空白孔吸光度Ak，DPPH自由基清除率（%）=（1−（Ac−Ad）÷Ak）×100%，供试品ABTS自由基清除能力（mmol/L Trolox）=代入标准回归曲线方程所得Trolox的浓度×10，结果见表5。11批青蒿样品中，样品8（编号：S8）清除ABTS自由基的能力最强。
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将表5青蒿抗氧化活性结果和表3的相对峰面积数据导入SIMCA 14.1软件构建PLSR模型。结果显示，峰3~峰8、峰10~峰27、峰29、峰32~峰34、峰38、峰40、峰42~峰43、峰46与DPPH自由基清除率呈正相关；峰3~峰29、峰31~峰35、峰38、峰40、峰42~峰44、峰46、峰48与ABTS自由基清除率呈正相关，结果见图4。
图 4 各共有峰相关系数
变量投影（VIP）用于评估每个自变量对因变量的重要性，VIP>1表明自变量对因变量的贡献有显著性。筛选出对自由基清除能力呈正相关，且VIP>1的峰。结果显示，青蒿药材样品已明确成分中对DPPH自由基清除能力的贡献大小依次为异绿原酸A（16号峰）>异绿原酸B（15号峰）>滨蒿内酯（14号峰）>异绿原酸C（23号峰）；青蒿药材样品已明确成分中对ABTS自由基清除能力的贡献大小依次为异绿原酸A（16号峰）>异绿原酸B（15号峰）>异绿原酸C（23号峰）>滨蒿内酯（14号峰），提示相应成分与青蒿抗氧化能力呈正相关，结果见图5。
图 5 各共有峰的VIP值
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利用HPLC法测定青蒿药材样品的图谱，能准确、稳定地检测青蒿中的多种有效成分。实验前期研究发现，在乙腈-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%磷酸水等流动相中，甲醇-0.1%磷酸水为流动相的分离效果最优，但青蒿素和艾黄素的分离度不佳；随后将水相改为0.2%磷酸水后，分离度得到了提高。研究前期考察了多个波长下各成分的显峰情况，发现在高波长下青蒿素不显峰，故最后选择220 nm为指纹图谱波长，但低波长时显峰较多，在一定程度上影响了几种已知成分的VIP值。
本研究以11批不同地区青蒿为研究对象，采用HPLC法研究其各共有峰与体外抗氧化能力之间的关系，探究青蒿体外抗氧化作用的药效物质基础。结果显示，异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C和滨蒿内酯与自由基清除率呈正相关，提示这些成分是青蒿体外抗氧化的药效物质基础。青蒿素是青蒿中的重要成分，有文献研究发现其具有抗氧化的作用[12]，也有文献研究发现其可以激活氧化应激[13]，而本研究发现青蒿素的抗氧化作用并不明显。推测原因可能在于本研究所用的是基于清除自由基的抗氧化测试方法，青蒿素可能是通过清除自由基之外的途径起到抗氧化作用[14]，仍有待今后深入研究。
Study on spectrum-effect relationship based on antioxidant activity of Artemisiae Annuae Herba
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摘要:
目的 通过考察11批青蒿的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱与体外抗氧化活性的谱效关系，筛选出青蒿体外抗氧化作用的药效物质基础成分。 方法 色谱柱为Aglient C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）色谱柱，流动相为0.2%磷酸水-甲醇，流速为1 ml /min；柱温为室温；检测波长为220 nm；进样量为10 μl。以异绿原酸A为参照，采用《中药指纹图谱相似度评价系统》（2012版）确定并记录11批青蒿样品的共有峰。检测不同青蒿样品对DPPH自由基和ABTS自由基的清除效率，作为其抗氧化评价，利用SIMCA14.1软件构建PLSR模型并分析谱效关系。 结果 11批青蒿样品中共检测出48个共有峰，鉴定11个成分，分别为东莨菪内酯、滨蒿内酯、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、木犀草素、芹菜素、猫眼草黄素、青蒿素、艾黄素和青蒿酸。检测11批青蒿样品的DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力，谱效关系显示，异绿原酸A、B、C和滨蒿内酯峰面积与青蒿的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力正相关，且变量投影值大于1，表明这些成分在青蒿的体外抗氧化方面有显著贡献。 结论 本研究考察了青蒿中不同物质的体外抗氧化能力，证明异绿原酸A、B、C和滨蒿内酯为青蒿的体外抗氧化活性的药效物质基础。 Abstract:Objective To screen the pharmacodynamic material basic components of Artemisiae Annuae Herba and study its antioxidant activity in vitro by investigating the spectrum-effect relationship between the HPLC fingerprints of 11 batches of Artemisiae Annuae Herba (dried aerial part of Artemisia annua L.). Methods The determination was performed on Aglient C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with mobile phase consisted of 0.2% phosphoric acid solution-Methanol (gradient elution) at the flow rate of 1.0 ml/min. The column temperature was indoor temperature, and detection wavelength was 220 nm, with sample size of 10 μl. Using isochlorogenic acid A as reference, HPLC fingerprints of 11 batches of samples were determined. The common peaks of 11 batches of samples were identified and recorded through TCM chromatographic fingerprint similarity evaluation system （2012 edition）. Using scavenging rate of DPPH and ABTS free radical as pharmacodynamic indicators of antioxidant effects, SIMCA 14.1 analysis software was used for PLSR to establish the spectra-effect relationship. Results There were 48 common peaks on 11 batches of sample, 11 components were identified as scopoletin, scoparone, isochlorogenic acid B, A, C, luteolin, apigenin, chrysosplenetin, artemisinin, artemisetin and artemisinic acid. The scavenging activity of 11 batches of samples to DPPH and ABTS free radicals was detected. The spectrum-effect relationship showed that isochlorogenic acid A, B, C and scoparone were positively associated with its antioxidant capacity, and variable projection value was greater than 1. It was suggested that these components were the material basis of antioxidant effect in Artemisiae Annuae Herba. Conclusion This study investigates the antioxidant capacity of different substances in Artemisiae Annuae Herba in vitro, and proves that isochlorogenic acid A,B, C and scoparone play a major role for the antioxidant capacity. -
按蚊伊丽莎白菌是一种需氧、无动力、氧化酶阳性、吲哚阳性、非发酵革兰阴性杆菌，属于黄杆菌科伊丽莎白菌属[1] 。其主要存在于医院环境中，如ICU病房、儿科病房、外科病房、骨科病房的增氧机、水槽排水管、过滤器和导管[2]。术后患者或患有基础疾病的老年人是其易感群体[3,4]。本文报道1例因脑出血入住ICU患者铜绿假单胞菌合并按蚊伊丽莎白菌肺部重症感染的治疗过程，探讨了脑出血患者肺部出现铜绿假单胞菌合并按蚊伊丽莎白菌感染的危险因素及抗菌药物治疗方案，为临床治疗提供参考。
1. 病例资料
患者，男，51岁，体重50 kg，BMI为17.3。2023年4月19日，患者因脑出血收入外院ICU治疗，期间先后使用抗菌药美罗培南、万古霉素、氟康唑等治疗。2023年4月25日，患者气促、氧合低，予气管插管呼吸及辅助呼吸、抗心衰与抗感染（哌拉西林他唑巴坦钠）等对症治疗，予拔除气管插管后病情再次恶化。2023年5月12日，患者白细胞1.0×109/L，考虑其为重症肺炎、脓毒血症、粒细胞减少。2023年5月13日，患者为求进一步治疗入院。入院诊断为：①重症肺炎；②脓毒症；③粒细胞减少；④脑出血后遗症期；⑤肾心综合征（心功能Ⅳ期）；⑥慢性肾脏病；⑦多发脑梗塞；⑧急性心功能不全；⑨肾性贫血；⑩高血压3级。
2. 住院期间主要抗感染治疗经过
入院第1天，给予患者美罗培南与替加环素联合使用的经验性抗感染治疗。入院第3天，患者出现发热，最高体温为39.5 ℃。入院第5天，患者肺泡灌洗液的mNGS结果回报为：铜绿假单胞菌[序列数6216，D类碳青霉烯酶（OXA-50）]、按蚊伊丽莎白菌（序列数699），改用目标用药头孢他啶阿维巴坦联合替考拉宁治疗。入院第13天，患者降钙素原（PCT）下降明显。入院第18天，患者整体病情相对稳定，PCT持续下降，但白细胞仍居高不下且仍有间断高热，停用替考拉宁，更换为替加环素继续治疗。入院第21天，患者体温恢复正常，且复查CT显示肺部感染明显好转，因此患者转出ICU回到专科病房继续进行专科治疗，具体方案和感染指标如表1所示。
表 1 入院后抗感染方案和感染指标入院天数 抗感染方案 感染指标 第1天 美罗培南2 g ivgtt q8 h+
替加环素50 mg ivgtt q12 h体温38.4 ℃，白细胞（WBC）0.98×109/L、PCT12.73 ng/ml、
C反应蛋白（CRP）168.06 mg/L第3天 未更改方案 最高体温39.5 ℃，送肺泡灌洗液mNGS
WBC1.69×109/L、PCT45.263 ng/ml第5天 头孢他啶阿维巴坦2.5 g ivgtt q8 h+
替考拉宁0.4 g ivgtt q12 hWBC11.09×109/L、中性粒细胞比率（N）83.6%、PCT34.38 ng/ml、
CRP126.4 mg/L；5月15日肺泡灌洗液mNGS回报：铜绿假单胞菌
（序列数6 216，OXA-50）；按蚊伊丽莎白菌（序列数699）第7天 未更改方案 WBC 16.61×109/L、N 83.5%、PCT 16.21 ng/ml、CRP 68.95 mg/L 第11天 头孢他啶阿维巴坦1.25 g ivgtt q12 h+
替考拉宁0.4 g ivgtt q12 hWBC 14.34×109/L、PCT 2.89 ng/ml、CRP 58.32 mg/L 第13天 未更改方案 WBC 16.87×109/L、N 88.2%、PCT 2.49 ng/ml、CRP 110.85 mg/L 第18天 停用替考拉宁更换替加环素（首剂150 mg）75 mg，q12 h+
头孢他啶阿维巴坦1.25 g ivgtt q12 hWBC16.48×109/L、N 79.6%、PCT 1.75 ng/ml、CRP 97.58 mg/L
WBC波动于（15~20）×109/L之间，仍有间断高热，最高体温为38.6 ℃第21天 未更改方案 WBC 15.45×109/L、N71%、PCT 1.84 ng/ml、CRP 37.37 mg/L，
体温36.8 ℃。复查胸部CT显示肺部感染明显好转
患者转出ICU，继续专科治疗3. 药物治疗方案分析与选择
3.1 按蚊伊丽莎白菌的流行趋势和感染高危因素
3.1.1 按蚊伊丽莎白菌的流行趋势
越来越多的研究表明，按蚊伊丽莎白菌（非脑膜炎败血伊丽莎白菌）是该菌属的主要病原体，其约占该菌属分离致病菌的59%~99%[2]。近期的一项研究表明，上海某医院分离得到的52株伊丽莎白菌，其中，按蚊伊丽莎白菌占67.3%，而脑膜炎败血伊丽莎白菌只占26.9%。由此可见，按蚊伊丽莎白菌的存在远被低估[5]。近年来，国外也陆续暴发过伊丽莎白菌感染。2012年，新加坡暴发5例按蚊伊丽莎白菌感染，其中3例患者死于败血症[3]。2014−2016年，美国发生2次大型伊丽莎白菌感染，其多为社区获得性感染且患者病死率分别为30.8%和70%[6]。
3.1.2 按蚊伊丽莎白菌感染的高危因素
当NGS结果出现并不常见的按蚊伊丽莎白菌时需引起重视，要明确是否有感染高危因素。已有研究显示，按蚊伊丽莎白菌感染的高危因素主要有[5]：①医院环境因素：ICU滞留时间、广谱抗菌药应用、侵入性操作（ECMO置管、中心静脉插管、动脉置管、气管插管、鼻饲管、尿管、引流管等）、应用免疫抑制剂、交叉感染（呼吸器械及受污染）；②宿主自身因素：新生儿、高龄、基础疾病、免疫功能受损、营养不良。对于该患者，其兼有宿主因素（粒细胞减少、营养不良）和医院环境因素（ICU滞留时间长），推测按蚊伊丽莎白菌感染的可能性较大，因此，临床药师建议立即启动抗按蚊伊丽莎白菌治疗。
3.2 按蚊伊丽莎白菌的抗感染治疗方案
3.2.1 文献研究
通过对既往文献研究梳理可知，按蚊伊丽莎白菌对米诺环素的敏感性高，甚至可达100% [5,7-9]，但按蚊伊丽莎白菌对替加环素的敏感率报道不一，为5.1%～26.4%[10]。Cheng等研究发现，按蚊伊丽莎白菌对替加环素的敏感率低于米诺环素[9]。RATNER H（1984）的研究推荐使用万古霉素治疗按蚊伊丽莎白菌感染[11]，但近期研究发现，按蚊伊丽莎白菌对万古霉素的敏感率存在较大差异，基于肉汤微量稀释法的药敏结果显示其抗菌活性低（细菌敏感率<10%），然而基于纸片扩散法的药敏结果却显示其敏感率达100%。因此，万古霉素对伊丽莎白菌属的体内外抗菌活性值得进一步探究。此外，按蚊伊丽莎白菌对一般用于治疗革兰阴性菌感染常用的抗菌药物具有很高的耐药率[12]，对莫西沙星的敏感性存在较大差异[4]，对多黏菌素天然耐药，Lin等研究推荐使用米诺环素联合左氧氟沙星治疗按蚊伊丽莎白菌感染[13]。
综上所述，按蚊伊丽莎白菌具有多重耐药的特性，主要表现为：对头孢类、碳青霉烯类耐药率高；对多黏菌素天然耐药；对含酶抑制剂、利福平有敏感性；对磺胺类、喹诺酮类、替加环素敏感性报道不一；对米诺环素敏感性最高；对万古霉素的敏感性仍需研究，目前暂无替考拉宁的敏感性研究。联合用药推荐米诺环素和左氧氟沙星。通过既有的研究可知，替加环素对按蚊伊丽莎白菌具有敏感性，但低于公认效果最好的米诺环素。由于米诺环素无注射剂型，因此对于ICU患者，选择具有注射剂型的替加环素也是可取的。
3.2.2 临床病例分析
（1）替加环素的治疗剂量分析。临床药师根据现有较高循证依据的方案，推荐使用米诺环素治疗按蚊伊丽莎白菌感染，但是医生认为口服米诺环素强度不够，故选择万古霉素抗按蚊伊丽莎白菌。因患者肌酐为532 μmol/L，医生遂改为使用替考拉宁，按照0.4 g ivgtt q12 h予以患者治疗。入院第13天，患者PCT持续下降，但白细胞仍居高不下且仍有间断高热，医生认为是更改了头孢他啶阿维巴坦导致了目前僵持状态，拟增加头孢他啶阿维巴坦用量。药师建议根据患者目前肾功能状态，肌酐清除率已小于15 ml/min，再增加剂量并不能增强抗菌效果，反而会加大对肾功能损害。根据目前无替考拉宁对按蚊伊丽莎白菌敏感率的研究，药师建议选择有注射剂型但研究敏感性报道不一的替加环素。
对于患者入院第1天使用替加环素治疗但按蚊伊丽莎白菌感染并未得到控制的原因，临床药师认为主要基于以下两点：一是美罗培南耐药问题，铜绿假单胞菌对美罗培南耐药，可能导致合并有多重耐药铜绿假单胞菌的按蚊伊丽莎白菌感染治疗未得到控制；二是第1天替加环素的用法用量为50 mg ivgtt q12 h，其未达到负荷剂量且维持剂量不足，可能导致治疗未有成效。
Barbour等[10]研究显示，严重、复杂的医院获得性肺部感染患者在替加环素常规剂量治疗下，其肺上皮细胞衬液（ELF）的浓度降低，从而使药物ELF/血浆药物浓度的比率降低，药物对肺组织的穿透力降低，进而造成其治疗失败。若要提高药物ELF的浓度，进而提高ELF/血浆药物浓度的比率，则需要提高替加环素的给药剂量。再者，重症患者的PK/PD特征发生变化，需加大剂量以达到足够的负荷剂量。
抗菌药物的负荷剂量：LD （loading dose）=分布容积×血药浓度，重症患者的分布容积和血药浓度均受到影响。脓毒血症患者中，亲水性药物的分布容积将随着微血管渗透性的变化和随之而来的体内水分的变化而改变，将导致实际分布容积值比预估值更大，因此需要更大的LD。
初始大剂量应用抗菌药物对治疗重症患者有利，使用大剂量替加环素符合PK/PD达标要求，可增加临床疗效。因此药师建议，替加环素给药方案为：首剂150 mg，维持剂量75 mg，q12 h。最终，医生采纳药师的建议选择注射用替加环素，头孢他啶阿维巴坦继续按照1.25 g q12 h给予患者治疗。治疗4 d后，患者体温、感染指标下降，临床症状较前好转。
（2）头孢他啶阿维巴坦的药学监护分析。药师通常对肾功能不全患者使用头孢他啶阿维巴坦进行药学监护。头孢他啶阿维巴坦说明书中推荐的用法用量为：当肌酐清除率为6～15 ml/min，0.94 g q24 h，该患者的具体临床用法用量详见表2。
表 2 头孢他啶阿维巴坦的用法用量与肌酐清除率开始使用头孢他啶阿维巴坦的时间 入院第5天 入院第11天 入院第12天 入院第17天 肌酐（cB/μmol·L−1） 490 589 365 309 头孢他啶阿维巴坦的用法用量 2.5 g
ivgtt q8 h1.25 g
ivgtt q12 h1.25 g
ivgtt q12 h1.25 g
ivgtt q12 h通过查阅相关文献，在Soukup等的病例报告中，高强度连续性静脉-静脉血液透析滤过（CVVHDF）（超滤率2 750 ml/h）、深部感染（VAP）和边缘易感铜绿假单胞菌（MIC 8 mg/L）支持使用全剂量头孢他啶阿维巴坦。在这些情况下，残留肾功能的最终存在也证明需要更高剂量的给药方案是合理的[14]，因此药师建议该患者初始肾功能重度不全时仍采用全剂量。对于该患者，初始状态时肌酐清除率只有11.17 ml/min，行连续性肾脏替代治疗（CRRT），初始用法用量为2.5 g q8 h。
后期药师根据患者的肾功能调整头孢他啶阿维巴坦给药剂量。头孢他啶阿维巴坦是时间依赖型抗菌药物，有效性取决于血药浓度在最低抑菌浓度（MIC）之上所占时间的比例。临床数据表明，更加积极的药代/药效学目标可以改善重症患者预后，如100%fT>（ 4～5）×MIC。RECLAIM-1和RECLAIM-2的Ⅲ期试验[15]发现，针对肾脏功能损伤的患者，采用减少单次给药剂量、不延长给药间隔的调整方案有助于达成时间依赖型抗生素（fT>MIC）的最佳PK/PD目标。目前研究支持对于持续急性肾损伤（AKI）患者，应尽可能保证抗菌药物每日治疗剂量，采取减少单次给药剂量而不是延长给药间隔的方案有助于达成最佳PK/PD目标，延长输注时间可能在改善AKI患者抗感染疗效方面发挥重要作用。因此对于该患者，在使用6 d头孢他啶阿维巴坦后血肌酐升至589 μmol/L，肌酐清除率降至9.13 ml/min，结合临床效果，PCT从34.38 ng/ml降至1.75 ng/ml，临床药师建议调整头孢他啶阿维巴坦剂量为1.25 g q12 h，并延长输注时间为3 h[16]。
4. 总结
当临床分离出不常见的按蚊伊丽莎白菌株时，临床药师作为医疗团队的一员，应积极查阅指南、文献等，根据按蚊伊丽莎白菌的流行趋势和感染高危因素，及时向医生提供有循证依据且级别高的给予口服米诺环素的治疗方案。但在本案例中，因为剂型因素，医生并未予采纳。在病情陷入僵持阶段时，临床药师从替加环素的药动学及重症患者的特殊性，综合分析了首次使用替加环素治疗失败的原因，用循证依据说服医生再次使用替加环素并取得了很好的治疗结果。临床药师在积极引导参与决策方案的同时，结合临床疗效加强抗感染治疗的药学监护，有针对性地提出建议与改进措施，并根据患者肝肾功能及疗效给予个体化给药方案，尽量减少对患者肾脏的损害，以保证治疗的有效性和安全性。
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表 1 药材样品来源信息
序号 产地 序号 产地 S1 河北邯郸 S7 安徽亳州 S2 安徽亳州 S8 江西赣州 S3 河南驻马店 S9 四川自贡 S4 安徽亳州 S10 河南南阳 S5 湖北恩施 S11 重庆市 S6 安徽亳州 
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表 2 11批中药青蒿样品HPLC图谱共有峰的相对保留时间
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD（%） 峰1 0.071 0.071 0.071 0.071 0.070 0.070 0.070 0.071 0.070 0.072 0.072 1.060 峰2 0.075 0.075 0.075 0.075 0.075 0.074 0.075 0.075 0.074 0.075 0.075 0.540 峰3 0.303 0.308 0.308 0.309 0.309 0.309 0.310 0.311 0.310 0.310 0.309 0.680 峰4 0.396 0.401 0.401 0.401 0.400 0.401 0.401 0.402 0.402 0.403 0.402 0.450 峰5 0.418 0.423 0.423 0.424 0.424 0.423 0.424 0.425 0.424 0.425 0.425 0.460 峰6 0.433 0.437 0.437 0.437 0.436 0.436 0.436 0.437 0.437 0.439 0.438 0.340 峰7 0.468 0.472 0.472 0.472 0.472 0.472 0.472 0.473 0.473 0.473 0.473 0.300 峰8 0.662 0.667 0.667 0.667 0.667 0.666 0.667 0.668 0.667 0.668 0.668 0.250 峰9 0.717 0.723 0.723 0.723 0.723 0.722 0.724 0.724 0.724 0.724 0.724 0.280 峰10 0.731 0.739 0.738 0.738 0.741 0.737 0.738 0.738 0.738 0.738 0.740 0.340 峰11 0.794 0.796 0.796 0.796 0.796 0.795 0.797 0.797 0.796 0.797 0.797 0.120 峰12 0.810 0.815 0.815 0.815 0.809 0.814 0.815 0.815 0.814 0.817 0.817 0.310 峰13 0.823 0.825 0.825 0.825 0.825 0.824 0.826 0.827 0.825 0.826 0.826 0.130 峰14 0.912 0.912 0.912 0.913 0.911 0.912 0.914 0.914 0.913 0.913 0.914 0.110 峰15 0.983 0.982 0.983 0.983 0.982 0.982 0.983 0.985 0.982 0.984 0.983 0.100 峰16 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0 峰17 1.038 1.037 1.037 1.037 1.037 1.037 1.037 1.038 1.037 1.038 1.038 0.050 峰18 1.058 1.056 1.058 1.058 1.060 1.060 1.061 1.062 1.060 1.059 1.059 0.160 峰19 1.078 1.079 1.078 1.078 1.075 1.074 1.078 1.079 1.075 1.078 1.079 0.170 峰20 1.133 1.131 1.131 1.131 1.131 1.129 1.130 1.131 1.129 1.132 1.132 0.110 峰21 1.157 1.154 1.157 1.155 1.155 1.156 1.156 1.157 1.154 1.158 1.156 0.110 峰22 1.190 1.190 1.189 1.189 1.190 1.192 1.188 1.189 1.187 1.189 1.192 0.130 峰23 1.199 1.198 1.198 1.198 1.198 1.198 1.199 1.199 1.197 1.198 1.198 0.050 峰24 1.215 1.214 1.214 1.214 1.213 1.213 1.213 1.215 1.212 1.214 1.214 0.070 峰25 1.246 1.244 1.244 1.244 1.243 1.242 1.243 1.244 1.242 1.244 1.245 0.100 峰26 1.307 1.306 1.306 1.307 1.306 1.305 1.306 1.308 1.306 1.306 1.308 0.070 峰27 1.452 1.453 1.450 1.450 1.450 1.450 1.450 1.453 1.449 1.448 1.449 0.110 峰28 1.464 1.462 1.463 1.463 1.464 1.463 1.464 1.465 1.461 1.461 1.460 0.110 峰29 1.497 1.493 1.495 1.495 1.492 1.492 1.495 1.500 1.492 1.494 1.494 0.160 峰30 1.656 1.655 1.656 1.653 1.648 1.645 1.648 1.649 1.647 1.658 1.659 0.300 峰31 1.665 1.665 1.672 1.663 1.659 1.657 1.657 1.658 1.656 1.667 1.667 0.320 峰32 1.718 1.718 1.717 1.716 1.711 1.709 1.710 1.711 1.708 1.719 1.721 0.270 峰33 1.752 1.752 1.751 1.748 1.743 1.738 1.738 1.740 1.739 1.754 1.756 0.400 峰34 1.770 1.770 1.769 1.767 1.762 1.758 1.758 1.759 1.758 1.772 1.775 0.360 峰35 1.833 1.834 1.833 1.830 1.825 1.821 1.821 1.822 1.820 1.835 1.838 0.360 峰36 1.893 1.894 1.893 1.890 1.884 1.879 1.879 1.880 1.879 1.896 1.900 0.420 峰37 1.942 1.943 1.942 1.939 1.932 1.927 1.927 1.928 1.928 1.945 1.949 0.430 峰38 1.950 1.950 1.949 1.946 1.939 1.934 1.934 1.935 1.935 1.953 1.956 0.430 峰39 2.027 2.027 2.026 2.023 2.015 2.010 2.009 2.011 2.011 2.030 2.034 0.460 峰40 2.036 2.036 2.032 2.031 2.024 2.019 2.018 2.016 2.020 2.039 2.043 0.470 峰41 2.102 2.102 2.101 2.097 2.090 2.084 2.084 2.085 2.085 2.105 2.109 0.450 峰42 2.117 2.116 2.114 2.111 2.103 2.097 2.097 2.097 2.098 2.119 2.122 0.470 峰43 2.156 2.155 2.153 2.149 2.141 2.135 2.134 2.135 2.136 2.157 2.161 0.490 峰44 2.226 2.224 2.223 2.219 2.211 2.204 2.204 2.205 2.205 2.226 2.230 0.470 峰45 2.233 2.232 2.230 2.226 2.218 2.212 2.211 2.213 2.212 2.234 2.238 0.470 峰46 2.267 2.265 2.263 2.259 2.250 2.243 2.243 2.244 2.244 2.265 2.270 0.490 峰47 2.329 2.327 2.325 2.321 2.312 2.306 2.304 2.306 2.306 2.328 2.332 0.480 峰48 2.363 2.362 2.36 2.355 2.346 2.339 2.338 2.340 2.340 2.363 2.367 0.490 共有峰/总峰 0.837 0.815 0.778 0.821 0.811 0.834 0.864 0.776 0.823 0.806 0.838
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表 3 11批中药青蒿样品HPLC图谱共有峰的相对峰面积
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD(%) 峰1 0.221 0.718 0.167 0.215 6.001 18.615 0.134 0.037 0.545 0.046 0.033 232.240 峰2 0.539 2.042 0.539 0.505 11.735 36.124 0.337 0.055 1.571 0.192 0.041 223.380 峰3 0.065 0.102 0.060 0.131 0.300 0.356 0.050 0.035 0.070 0.032 0.028 100.170 峰4 0.066 0.061 0.059 0.088 0.121 0.476 0.033 0.015 0.064 0.021 0.026 139.490 峰5 0.134 0.056 0.104 0.130 0.183 0.339 0.145 0.084 0.080 0.054 0.073 64.820 峰6 0.391 0.338 0.288 0.344 0.243 0.408 0.321 0.169 0.271 0.131 0.077 39.430 峰7 0.987 0.201 0.214 0.514 0.385 0.315 0.850 0.405 0.308 0.251 0.482 57.330 峰8 0.375 0.295 0.217 0.584 0.686 0.903 0.376 0.150 0.338 0.143 0.305 59.310 峰9 0.533 0.646 0.316 0.766 2.647 4.610 0.201 0.130 0.674 0.112 0.332 139.510 峰10 0.223 0.058 0.024 0.137 0.259 0.464 0.189 0.008 0.051 0.039 0.023 104.800 峰11 0.225 0.203 0.202 0.236 0.365 0.952 0.079 0.120 0.145 0.112 0.069 101.160 峰12 0.119 0.213 0.234 0.245 0.516 0.872 0.116 0.072 0.117 0.055 0.049 105.050 峰13 0.197 0.181 0.207 0.214 0.376 1.106 0.085 0.107 0.143 0.111 0.061 116.600 峰14 0.055 0.151 0.081 0.096 0.132 0.242 0.064 0.129 0.067 0.047 0.058 57.120 峰15 0.125 0.315 0.186 0.226 0.295 0.477 0.109 0.138 0.179 0.062 0.126 58.660 峰16 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0 峰17 1.130 0.724 0.667 1.118 0.879 0.891 1.175 0.356 0.943 0.466 0.849 31.770 峰18 0.104 0.101 0.185 0.115 0.241 0.060 0.089 0.224 0.053 0.108 0.087 51.150 峰19 0.551 0.465 0.406 0.497 1.441 1.610 0.265 0.566 0.291 0.253 0.229 79.600 峰20 0.050 0.093 0.222 0.077 0.080 0.171 0.041 0.214 0.047 0.079 0.029 69.220 峰21 0.086 0.169 0.206 0.138 0.095 0.248 0.085 0.079 0.120 0.066 0.058 50.140 峰22 0.096 0.098 0.081 0.120 0.130 0.177 0.105 0.050 0.112 0.069 0.078 33.720 峰23 0.251 0.842 0.321 0.530 0.626 0.594 0.206 0.256 0.418 0.121 0.353 52.610 峰24 0.237 0.280 0.147 0.286 0.324 0.264 0.244 0.138 0.289 0.122 0.176 30.790 峰25 0.445 0.565 0.441 0.730 0.725 0.619 0.486 0.121 0.558 0.243 0.306 40.560 峰26 0.175 0.211 0.243 0.279 0.427 0.832 0.121 0.107 0.199 0.093 0.120 83.960 峰27 0.050 0.045 0.030 0.090 0.161 0.245 0.056 0.006 0.071 0.028 0.027 95.860 峰28 0.063 0.243 0.054 0.177 0.170 0.123 0.049 0.036 0.127 0.018 0.080 68.020 峰29 0.107 0.125 0.092 0.177 0.361 0.428 0.091 0.015 0.109 0.053 0.041 90.430 峰30 0.080 0.390 0.063 0.298 1.373 1.312 0.065 0.019 0.113 0.026 0.030 148.400 峰31 0.071 0.216 0.066 0.163 0.244 0.216 0.065 0.023 0.100 0.030 0.158 64.710 峰32 0.027 0.071 0.019 0.054 0.303 0.210 0.030 0.014 0.032 0.017 0.018 131.430 峰33 0.160 0.445 0.234 0.380 1.852 2.801 0.146 0.036 0.261 0.087 0.075 151.790 峰34 0.114 0.280 0.166 0.312 0.777 1.295 0.117 0.019 0.159 0.054 0.055 128.230 峰35 0.336 1.630 0.399 1.267 6.102 5.469 0.423 0.117 0.603 0.123 0.317 141.670 峰36 0.070 0.330 0.042 0.260 1.421 1.875 0.063 0.004 0.116 0.013 0.021 167.530 峰37 0.153 0.999 0.269 0.774 3.799 5.304 0.195 0.088 0.399 0.071 0.106 159.420 峰38 0.304 0.702 0.221 0.534 3.139 3.099 0.303 0.068 0.400 0.101 0.143 140.610 峰39 0.090 0.447 0.148 0.331 1.801 2.513 0.123 0.022 0.194 0.042 0.033 159.710 峰40 0.084 0.285 0.091 0.199 1.102 1.365 0.043 0.076 0.122 0.021 0.016 151.000 峰41 0.190 0.366 0.232 0.172 1.131 2.101 0.068 0.033 0.226 0.055 0.039 152.190 峰42 0.157 0.322 0.185 0.229 1.672 2.273 0.121 0.028 0.231 0.047 0.052 155.930 峰43 0.065 0.137 0.091 0.109 0.535 1.037 0.049 0.017 0.093 0.027 0.027 157.670 峰44 0.059 0.108 0.068 0.049 0.303 0.650 0.019 0.012 0.062 0.017 0.014 156.080 峰45 0.110 0.234 0.138 0.113 0.747 1.344 0.045 0.020 0.135 0.033 0.025 153.940 峰46 0.083 0.114 0.089 0.161 0.705 1.559 0.064 0.024 0.127 0.032 0.049 170.940 峰47 0.108 0.285 0.176 0.201 1.054 2.412 0.039 0.039 0.161 0.037 0.038 175.050 峰48 0.389 0.878 0.171 0.854 4.399 5.353 0.419 0.045 0.356 0.065 0.162 155.940
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表 4 自由基标准回归曲线方程
自由基 标准回归曲线方程 r DPPH Y=0.021 8X+0.005 7 0.999 9 ABTS Y=0.447 6X+0.012 4 0.997 3
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表 5 青蒿抗氧化活性检测（mmol/L Trolox）
编号 DPPH清除能力 ABTS清除能力 S1 2.725 6.243 S2 1.336 2.025 S3 2.765 4.521 S4 3.110 7.190 S5 1.617 2.848 S6 0.970 0.853 S7 5.057 8.641 S8 6.477 10.453 S9 2.025 2.575 S10 4.731 8.313 S11 5.321 9.848
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