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盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学研究

高宇 凌琳 邢信昊 赵亮 王欣荣 王彦

温瑞睿, 许龙, 朱文静, 杨建伟. 浅谈国外药师主导开展戒烟服务的作用与挑战[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(12): 537-541, 548. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202408054
引用本文: 高宇, 凌琳, 邢信昊, 赵亮, 王欣荣, 王彦. 盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学研究[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(5): 415-421. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091
WEN Ruirui, XU Long, ZHU Wenjing, YANG Jianwei. A brief discussion on the development and challenges of smoking cessation services led by pharmacist abroad[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(12): 537-541, 548. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202408054
Citation: GAO Yu, LING Lin, XING Xinhao, ZHAO Liang, WANG Xinrong, WANG Yan. The pharmacokinetic study on compound diphenhydramine hydrochloride and caffeine in rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(5): 415-421. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091

盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学研究

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091
基金项目: 国家科技重大专项(2018ZX09J18110-002-002)
详细信息
    作者简介:

    高 宇,本科,副主任技师,研究方向:检测与诊断,Email:gaoyu0613@126.com

    通讯作者: 王 彦,博士,教授,博士生导师,研究方向:药理学,Email:wangyansmmu@126.com
  • 中图分类号: R284.1

The pharmacokinetic study on compound diphenhydramine hydrochloride and caffeine in rats

  • 摘要:   目的  建立UPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中盐酸苯海拉明与咖啡因的浓度,用于药动学研究。  方法  色谱柱为ACE 3 C18-PFP(3.0 mm×150 mm,3 μm),流动相系统采用0.1%甲酸水溶液-乙腈(62∶38,V/V),等度洗脱;质谱采用AJS-ESI离子源,正离子模式,多重反应监测(MRM),盐酸苯海拉明256.2.0→167.0(m/z),盐酸苯海拉明-D6(IS)262.0→167.0(m/z),咖啡因 195.0→138.0(m/z),内标咖啡因-D9(IS)204.0→116.2(m/z)。  结果   大鼠血浆中盐酸苯海拉明在1~1×103 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 6),定量下限1 ng/ml;咖啡因在15~1.5×105 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 9),定量下限15 ng/ml。盐酸苯海拉明和咖啡因低、中、高3个浓度水平的日内和日间精密度和准确度均良好(RSD<10%,RE<±10%)。药动学研究结果显示,灌胃给予盐酸苯海拉明10~30 mg/kg和咖啡因24~72 mg/kg后,药动学参数呈线性代谢动力学特征;同时两种成分在大鼠体内代谢存在性别差异,雌性大鼠灌胃给药后,体内盐酸苯海拉明及咖啡因的达峰浓度(cmax)及药时曲线下面积(AUC)均大于雄性。  结论  该方法准确、快速且灵敏度高,能准确检测大鼠血浆样品中的盐酸苯海拉明和咖啡因的浓度用于药动学研究,大鼠体内药动学研究结果为该复方的临床应用提供了可靠的数据支持。
  • 烟草流行是世界有史以来面临的最大公共卫生威胁之一,全球每年有800多万人由于烟草而死亡[1],吸烟不仅是各种非传染性疾病常见的主要风险因素,尤其是慢性呼吸道疾病、心血管疾病、癌症和糖尿病,同时会影响周围人的健康,而且对个人和国家的经济及社会形象产生负面影响[2]。据估计,每年全球消耗治疗烟草相关疾病的费用约1.4万亿美元[1]

    戒烟是降低非传染性疾病风险的最重要有效的干预措施之一。随着公共卫生工作的防范与发展,60%的烟草使用者希望戒烟[3],但只有约35%能够获得全面的戒烟服务,患者的戒烟意愿突显了在医疗系统内扩大戒烟可及服务及优先开展戒烟治疗的重要性[4-5]

    由于尼古丁的成瘾性,依靠吸烟者以自我管理的方式戒烟实施困难。事实证明,医疗保健专业人员提供的戒烟干预措施比自助式戒烟更有效[6]。药师的工作职责是为公众调配处方、提供用药指导与建议、解答用药咨询等,被认为是为公众提供戒烟服务的最佳专业人员,不仅能够指导其正确使用戒烟替代药品及提供相关建议,同时也可以给予戒烟行为上的专业支持[6-7]

    药师及其药房团队提供的戒烟服务有助于帮助吸烟者戒烟 [8]。葡萄牙进行的一项研究发现,接受药师服务的患者相较于对照组会参加更多社区药房主导的用药咨询(χ2=59.994,P<0.001)、更多电话会议(χ2=17.845,P<0.0013),因此戒烟成功率更高[9]。新加坡一家三级转诊皮肤病中心进行的一项单中心回顾性研究评估了由药师领导的结构化戒烟诊所的疗效,表明药师及其药房团队主导的患者咨询服务能有效为戒烟者提供行为支持[10]

    1.2.1   世界卫生组织的号召与行动

    1998年,世界卫生组织(WHO)首次认识到药师在帮助个人戒烟和防止潜在使用者方面的关键作用[11]。2003年为应对全球烟草流行,WHO成员国通过了《世界卫生组织烟草控制框架公约》(WHO FCTC)[12-13],要求缔约方采取有效措施促进戒烟。WHO FCTC是促进公众健康的一个里程碑,自2005年生效以来,WHO FCTC已有183个缔约方,涵盖90%以上的世界人口[14]

    为了扩大实施WHO FCTC中关于减少烟草需求的条款,WHO在2007年还启动了一项具有成本效益的实用行动MPOWER系列措施[15]。MPOWER措施中的策略与WHO FCTC相一致,已证明在挽救生命和降低医疗卫生费用方面卓有成效[1]。然而随着WHO FCTC的成功实施,一些中低收入国家也面临着来自烟草产业对其干扰的重大障碍[16-17]。药师可以在克服这些问题及现有制度和行业体系结构进行重大变革中发挥一定作用,为促进烟草控制和戒烟工作做出应有的贡献[18]。2019年WHO发布的全球烟草流行报告中,强调了药师为吸烟者戒烟提供帮助,并高度鼓励成员国就此采取行动[19]

    目前,151个国家至少实施了WHO FCTC及MPOWER措施中的一项,150个国家的烟草使用率正在下降。2000年,全世界大约1/3的成年人吸烟,然而,到2022年这一数字已大幅下降约1/5,这反映出各国在减少全球烟草消费方面取得了相当大的进展[20]

    1.2.2   国际药学会的响应与行动

    2003年,国际药学会(FIP)发布了关于药师在促进无烟未来中的作用的政策声明。2007年出版的《遏制烟草流行病:药学的全球作用》和2015年出版的《建立无烟社区:药师实用指南》均强调了药师在戒烟服务方面的重要贡献。

    2023年,FIP出版《支持戒烟和治疗烟草依赖:药师手册》强调药师在为寻求戒烟患者提供系统服务方面的关键作用,是药师支持个人戒烟过程中可参考的综合性实用资源。其涵盖了最新的循证实践、技术和策略,以帮助患者戒烟并减少复吸。该手册详细介绍了以药师为主导的支持戒烟所需的专业知识和实践技能,以及药师可干预的因素(包括非传染性疾病风险因素,如运动不足、不健康饮食习惯和过量饮酒等)及相关措施。随着近年来替代品电子烟使用的增多趋势,出于对电子烟安全性的担忧,同年FIP又发布了《关于电子烟使用对公众健康和经济的影响以及药房工作人员对消除电子烟贡献的声明》[21]

    2024年,WHO和FIP就药师在戒烟中的作用发表了一份新的联合声明,重申了药师在帮助吸烟者戒烟中发挥的关键作用。该声明中,WHO和FIP敦促各个国家烟草控制组织和国家药学协会制定并实施戒烟计划,同时在该计划和各国卫生系统服务的背景下,让药师参与到与烟草的斗争工作中[22]

    有研究表明患者更愿意社区药师参与戒烟服务[23],同时社区药师也有能力开展戒烟服务[24]。美国一家三级护理医院进行的一项研究表明,药师无论是在患者入院还是出院时,都可以对患者开展戒烟宣教与指导,在了解患者疾病与用药史、药物核对和出院咨询工作流程中与患者讨论吸烟问题,通过患者住院期间开展戒烟治疗并不断完善方案,达到有效戒烟的目的[25]

    英国在新型冠状病毒流行期间进行的一项研究表明,药师可以通过远程咨询为戒烟患者开具处方,提供有效的戒烟服务。目前,英国国家医疗服务体系(NHS)正在支持现有药师(包括社区药房药师)获得处方资格,根据患者需要开具戒烟药物从而促进戒烟服务开展。计划到2026年,在英国完成药学学位的毕业生将在监管机构注册为独立处方权药师, 进而扩大了可以提供戒烟服务药师的范围[26]

    美国药师有权根据合作处方协议或通过州范围的协议拥有自主处方权或授权开具处方。处方医生将开启、修改和停止药物治疗以及开具实验室检查的权利委托给药师。药师在完成继续教育课程后,可以根据国家法律法规授予的权限开具某些药物[27]

    药师的戒烟培训应包括基于行为支持的社区药师培训课程,通过戒烟服务个体化随访识别障碍并提供积极的强化措施,可以有效提高患者戒烟率,进而提高其生活质量[28]。El Hajj等[29]在卡塔尔进行的一项随机对照试验评估了戒烟培训计划对药师技能和能力的影响,共有86名社区药师(干预组54名,对照组32名)完成了6个目标结构化临床检查病例。研究结果表明,强化戒烟培训显著提高了社区药师提供戒烟服务的技能和能力。

    在一项评估埃塞俄比亚药师和药学学生对吸烟/戒烟的知识和态度的横断面调查中,与未接受过戒烟培训的人相比,接受过培训人员的平均知识和态度得分明显更高[30]。Greenhalgh等[31]通过定性和混合方法进行的描述性综合和真实世界调查表明,精心设计的戒烟培训课程将药师从生物医学和产品导向的角度,转变为以公共卫生和患者为中心的角度方面发挥至关重要的作用。

    促进戒烟的跨专业合作可以提高患者的戒烟率。一项探索医疗卫生保健专业人员与社区药师之间跨专业合作的研究表明,将社区药师为患者提供戒烟服务纳入患者护理项目是很有价值的,社区药房开展戒烟支持服务可以填补现有医院戒烟与家庭戒烟之间的空白。跨专业合作不仅为患者和医疗保健专业人员之间的有效沟通提供了途径,同时通过医疗保健专业人员汇总的患者电子健康记录,可以提高患者用药治疗的安全性[32]

    根据Greenhalgh等[31]的说法,增加药师和其他医疗从业者之间的跨专业互动是社区药房提供有效戒烟服务的先决条件。药师专业的能力增强了临床医生对药师的信任,因此,明确且精准的转诊途径,特别是当地全科医生将戒烟患者转诊给药师,对于跨专业开展戒烟服务是必要的。

    Bouchet-Benezech等[33]在法国进行的一项研究表明,与其他医疗保健专业人员的合作是发挥药师在戒烟服务中作用的关键之一。药师为戒烟者提供的尼古丁替代治疗处方没有得到社会医疗保险体系的支持,因此建议药师与具有尼古丁替代治疗处方权的其他医疗保健专业人员合作。

    吸烟是非传染性疾病的主要可变风险因素之一。药师主导的戒烟干预措施可以显著影响吸烟者的戒烟率,并在改善其健康状况方面发挥关键作用[34]

    Peletidi等[35]的调查研究表明,以社区药师主导的戒烟服务可以降低与吸烟相关慢病的发病率和病死率。Bouchet-Benezech等[33]为评估法国社区药房药师提供戒烟服务的可行性而进行的一项研究显示,在第6个月,23.3%的参与者参加了随访,其中75%的参与随访者自第一次随访以来一直保持戒烟状态,超过一半的参与者持续了90 d,从第二次随访开始,所有参与者的身心健康综合得分与基线相比都有所提高。

    药师作为一线医疗保健提供者,在戒烟工作中发挥着关键作用,可以在更大范围内对个体和公共健康产生重大影响。社区药房的戒烟服务应该被纳入国家公共卫生保健政策,这对于促进社区服务的健康有积极的促进作用[36]

    Peletidi等[35]在英国进行的一项系统综述强调了将药房主导的戒烟服务与对照组进行比较的研究,提供了强有力的证据证明药房主导的服务具有很高的成本效益。药房主导的服务要求每位戒烟者在为期4周的方案中支付772英镑的补充成本,而对照组基于集体小组的服务需要1 612英镑的戒烟补充成本。同时接受药房主导的戒烟服务,每周一对一的支持结合尼古丁替代疗法的治疗,与对照组接受集体戒烟治疗药物相比具有更高的有效戒烟率。此外,药房主导的服务每生命质量调整年的增量成本为2 600英镑,而对照组为4 800英镑。

    社区药师是提供戒烟服务的一种可获得的、未充分利用的但具有成本效益的资源[24,28,35]。一项随机试验旨在比较两个药师主导的戒烟计划(强化版与简化版)之间的戒烟率以及这些计划与基于文献的对照组之间的成本效益,揭示了强化版药师主导的戒烟计划是3种策略中最具成本效益的干预措施。强化版比简化版多花费了14 000美元(每100名参与者),但14人戒烟成功,取得10.8个生命年的获益额;强化版比对照组多花费35 300美元(每100名参与者),但29名戒烟者取得22.4个生命年的获益,每增加一名戒烟者多花费1 217美元,戒烟的增量成本效果比为1 576美元 [32]

    2000年,一项在英格兰进行的研究从提供者和NHS的角度比较了普通牙科诊所、普通医疗诊所(GMP)、社会药房和NHS戒烟服务(NHS SSS)中戒烟服务的成本效益,研究结果表明“成本效益高”的服务是在社区药房开展戒烟服务[37]

    由此可见,药师主导的戒烟服务不仅有效且极具成本效益,医疗卫生管理者及政策制定者可以基于此就最佳资源分配做出合理决策[24]

    然而,有证据表明,药师在承担戒烟服务提供者这一角色存在障碍,这影响了将全面戒烟服务纳入实践的可行性。障碍包括缺乏充分的培训、缺乏适当的转诊结构、社区药房环境中的时间限制、公众对药剂师提供戒烟服务缺乏认识、药房缺乏私人咨询区以及缺乏提供服务的报销[33]

    在许多国家,药师缺乏戒烟知识和技能以及缺乏培训被认为是药师在提供戒烟服务方面发挥作用的常见障碍[6,30,32,35,38-39]。Erku等[30]在埃塞俄比亚进行的一项由410名参与者(213名药学学生和197名药师)的横断面调查,提出药师在戒烟服务方面存在临床知识不足和实践技能差距。澳大利亚进行的另一项研究分析了250名大四药学专业学生、51名药师和20名戒烟教育工作者在当前基于证据的药房戒烟干预实践中的表现,得出了药学学生及药师与戒烟教育工作者之间存在较大的临床或药物治疗服务方面的差距[34]。药师由于缺乏戒烟相关教育与培训导致在戒烟服务中缺乏自信,从而阻碍了与患者的有效沟通,降低了提供的戒烟服务的质量[35,39]。在约旦,大多数药师认为,由于培训不到位导致对戒烟治疗的了解不足,致使药师无法提供足够的戒烟干预措施[40]

    缺乏戒烟计划或劳务报酬也是许多有意愿药师提供戒烟服务的一个障碍[31-33,39-40]。美国的一篇研究论文探讨了药师在护理过渡期间(住院到出院回家期间)如何衔接戒烟服务,得出支付报酬对维持任何医疗服务(包括药师提供的戒烟服务)至关重要。由于药师不被视为戒烟服务的提供者,因此美国大多数州的药师没有资格通过医疗补助获得提供戒烟服务的劳务报酬,通过商业保险获得报销的也很少见。缺乏鼓励药师向烟草使用者提供戒烟干预措施的计划和政策,药师没有戒烟药物处方权也大大阻碍了戒烟服务的开展[35]。研究表明,授予药师戒烟服务提供者身份或药师拥有戒烟药物处方权,并在医保政策中明确劳务报酬的支付标准,可能是解决该问题的最佳方式[40]

    社会药店缺乏相对私人空间为患者进行戒烟咨询服务也是障碍之一[6,33]。药店是否设有专门的可以为患者提供面对面戒烟服务咨询的区域,为患者咨询营造一个轻松舒适的环境,对于提高患者戒烟依从性是非常重要的影响因素[33]。药师实施戒烟服务与履行其他职责在时间上的矛盾也是限制戒烟服务工作开展的障碍之一[34-35]。根据Peletidi等[35]的系统调查结果显示,缺乏时间是所有参与戒烟服务者,包括患者在内的共性问题。日本对11家社区药房进行的一项随机研究显示,由于时间和精力有限,许多药房没有将戒烟服务纳入其日常运营范围[32]

    在法国、约旦和尼日利亚等一些国家,对戒烟服务的需求不足被视为药师开展戒烟服务的障碍[9,33,40]。由于缺乏戒烟服务,泰国的戒烟率很低,因此需要在药店开展戒烟服务,为药师提供机会[36]。为了解决这一问题,Bouchet等[33]评估了法国社区药房实施药师提供的戒烟方案的可行性,并建议向社区药房顾客有效推广戒烟服务,以解决需求不足的问题。

    社会药房在烟草控制政策中的参与度较低[9],原因是医疗机构与社会药房缺乏统一的转诊系统来保障提供安全、有效的戒烟服务[23,28]。社会药房药师在无法全面、详细获得患者医疗护理、处方记录的前提下,也就意味着无法了解到患者准确的疾病史与用药史,提供戒烟药物及相关指导可能会增加用药错误的可能性[26]。其他阻碍戒烟服务工作开展的因素还包括性别、年龄、民族、文化等不同所带来的戒烟者个性化差异及沟通交流障碍[23]

    全面了解药师主导的戒烟服务及其在不同地区和医疗保健环境中的影响,对于世界各国药师参与戒烟服务至关重要。基于药师缺乏戒烟知识、技能和培训有关的问题,政策制定者和教育工作者需要做更多的工作,以确保戒烟服务对患者的最大益处。有必要针对不同地区和国家的具体需求采取全面的能力建设措施,包括制定标准化的培训计划,采用线下结合远程学习方式助力药师实践技能发展,促进全球药师专业的持续深入发展。

    医药卫生政策制定应适时考虑将药师主导的戒烟服务纳入国家和地区医疗卫生服务指南,并开展宣传工作,提高人们对药师在戒烟方面发挥作用的认识。立法明确和药师薪酬补偿将有利于公众获得经许可的戒烟服务的机会,扩大药师在提供戒烟服务中的作用也有利于增强公众戒烟信心,同时在不同的医疗保健环境中实施和扩大这些服务争取足够的资源与支持。未来应促进药师、医师、护师、公共卫生专业人员及其他参与烟草控制工作的利益相关者之间更紧密的合作,激发出药师主导戒烟干预措施的全部潜力,提高戒烟的有效性和可持续性。

    随着医药卫生体制的改革及药师进一步以患者为中心的角色转变,药师的可及性被视为开展戒烟服务的最重要驱动因素之一。药师和社会药房团队能够通过结合药理学和行为学方法持续提供成本效益高的个体化戒烟服务,提高戒烟率,最终达到减轻烟草和尼古丁依赖以及烟草相关疾病的负担,促进医疗卫生系统的发展、改善全球卫生状况。

  • 图  1  血浆中盐酸苯海拉明、咖啡因及内标典型色谱图

    A.空白血浆;B.模拟样本(盐酸苯海拉明浓度为100 ng/ml,咖啡因浓度为5×103 ng/ml);C.定量下限模拟样本(盐酸苯海拉明浓度为1 ng/ml,咖啡因浓度为15 ng/ml);D.大鼠血浆样本;1.盐酸苯海拉明;2.盐酸苯海拉明-D6;3.咖啡因;4.咖啡因-D9。

    图  2  盐酸苯海拉明-咖啡因复方给药后大鼠体内血药浓度

    A.灌胃组盐酸苯海拉明浓度;B.灌胃组咖啡因浓度;C.静脉注射组盐酸苯海拉明浓度;D.静脉注射组咖啡因浓度。

    图  3  灌胃组雌雄性大鼠体内盐酸苯海拉明-咖啡因药动学参数的差异比较

    A1.盐酸苯海拉明t1/2; A2.咖啡因t1/2; B1.盐酸苯海拉明tmax; B2.咖啡因tmax;C1.盐酸苯海拉明cmax;C2.咖啡因cmax; D1.盐酸苯海拉明AUC0-12;D2.咖啡因AUC0-12; E1.盐酸苯海拉明AUC0-∞;E2.咖啡因AUC0-∞。*P<0.05,与雌平均值组比较

    表  1  盐酸苯海拉明、咖啡因精密度和准确度、基质效应和提取回收率试验结果

    待测物浓度(ng/ml)批内(n=6)批间(n=18)基质效应(%)提取回收率(%)
    RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)
    盐酸苯海拉明2.55.232.426.13−0.60114.89±2.0993.22±7.10
    2504.12−2.092.07−0.06110.75±0.4492.82±5.69
    8001.407.002.814.38118.45±0.5192.38±2.60
    咖啡因303.94−4.291.56−5.38114.28±13.3856.59±5.79
    5×1048.20−1.654.613.09106.33±1.3653.86±2.00
    1.2×1052.206.381.934.19123.71±1.2558.34±3.27
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    表  2  盐酸苯海拉明-咖啡因复方稳定性考察结果

    待测物浓度(ng/ml)室温(n=6)冻融(n=18)进样器(n=6)长期(n=6)储备液
    RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RE(%)
    盐酸苯海拉明2.56.257.29−0.676.32−0.915.97−5.286.5−1.49
    2504.815.53−5.165.61−7.265.72−2.438.61
    8002.154.960.015.08−0.072.33−0.465.2
    咖啡因30−13.214.62−6.894.84−4.899.11−6.845.673.44
    5×1042.165.92−1.133.58−5.841.790.777.69
    1.2×1052.094.310.312.96−5.192.368.862.84 
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    表  3  盐酸苯海拉明-咖啡因复方主要药动学参数($\bar x $±s

    参数盐酸苯海拉明(mg/kg)咖啡因(mg/kg)
    灌胃组静脉注射组灌胃组静脉注射组
    10203022448724.8
    t1/2t/h)1.90±
    1.34
    1.26±
    0.33
    1.24±
    0.14
    1.15±
    0.15
    0.85±
    0.32
    0.64±
    0.09
    1.52±
    1.25
    0.75±
    0.43
    tmaxt/h)0.46±
    0.10
    0.46±
    0.29
    0.25±
    0.00
    0.05±
    0.00
    0.28±
    0.11
    0.42±
    0.20
    0.74±
    0.52
    0.05±
    0.00
    cmax(ng/ml)43.78±
    22.19
    174.76±
    127.42
    543.63±
    248.82
    533.01±
    74.07
    34 375.44±
    2 405.96
    64 746.08±
    6 738.13
    93 972.11±
    6 797.22
    7 565.88±
    485.30
    AUC0-12[ng/(ml·h)]72.97±
    22.21
    237.34±
    182.66
    621.04±
    327.27
    404.27±
    46.51
    123 237.08±
    42 277.09
    316 905.23±
    86 946.7
    589 071.02±
    224 376.28
    11 231.01±
    5 769.43
    AUC0-∞[ng/(ml·h)]78.73±
    22.99
    241.29±
    184.05
    623.82±
    327.8
    407.5±
    45.11
    124 138.53±
    42 773.2
    317 012.42±
    86 889.4
    618 141.98±
    257 230.54
    11 282.98±
    5 787.79
    AUC0-12/AUC0-∞0.93±
    0.05
    0.98±
    0.01
    0.99±
    0.00
    0.99±
    0.01
    0.99±
    0.01
    1.00±
    0.00
    0.97±
    0.05
    1.00±
    0.00
    AUMC0-∞[ng/(ml·h2)]238.18±
    188.85
    384.96±
    267.4
    884.65±
    513.25
    420.08±
    68.37
    331 730.74±
    189 248.54
    1 032 819.34±
    461 031.26
    2 870 085.86±
    1 895 195.98
    16 391.02±
    17 909.93
    MRT0-∞t/h)2.99±
    2.24
    1.64±
    0.33
    1.39±
    0.13
    1.03±
    0.08
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    0.75
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    4.11±
    1.54
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-06-16
  • 修回日期:  2021-08-31
  • 网络出版日期:  2021-09-28
  • 刊出日期:  2021-09-25

盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学研究

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091
    基金项目:  国家科技重大专项(2018ZX09J18110-002-002)
    作者简介:

    高 宇,本科,副主任技师,研究方向:检测与诊断,Email:gaoyu0613@126.com

    通讯作者: 王 彦,博士,教授,博士生导师,研究方向:药理学,Email:wangyansmmu@126.com
  • 中图分类号: R284.1

摘要:   目的  建立UPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中盐酸苯海拉明与咖啡因的浓度,用于药动学研究。  方法  色谱柱为ACE 3 C18-PFP(3.0 mm×150 mm,3 μm),流动相系统采用0.1%甲酸水溶液-乙腈(62∶38,V/V),等度洗脱;质谱采用AJS-ESI离子源,正离子模式,多重反应监测(MRM),盐酸苯海拉明256.2.0→167.0(m/z),盐酸苯海拉明-D6(IS)262.0→167.0(m/z),咖啡因 195.0→138.0(m/z),内标咖啡因-D9(IS)204.0→116.2(m/z)。  结果   大鼠血浆中盐酸苯海拉明在1~1×103 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 6),定量下限1 ng/ml;咖啡因在15~1.5×105 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 9),定量下限15 ng/ml。盐酸苯海拉明和咖啡因低、中、高3个浓度水平的日内和日间精密度和准确度均良好(RSD<10%,RE<±10%)。药动学研究结果显示,灌胃给予盐酸苯海拉明10~30 mg/kg和咖啡因24~72 mg/kg后,药动学参数呈线性代谢动力学特征;同时两种成分在大鼠体内代谢存在性别差异,雌性大鼠灌胃给药后,体内盐酸苯海拉明及咖啡因的达峰浓度(cmax)及药时曲线下面积(AUC)均大于雄性。  结论  该方法准确、快速且灵敏度高,能准确检测大鼠血浆样品中的盐酸苯海拉明和咖啡因的浓度用于药动学研究,大鼠体内药动学研究结果为该复方的临床应用提供了可靠的数据支持。

English Abstract

温瑞睿, 许龙, 朱文静, 杨建伟. 浅谈国外药师主导开展戒烟服务的作用与挑战[J]. 药学实践与服务, 2024, 42(12): 537-541, 548. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202408054
引用本文: 高宇, 凌琳, 邢信昊, 赵亮, 王欣荣, 王彦. 盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学研究[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(5): 415-421. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091
WEN Ruirui, XU Long, ZHU Wenjing, YANG Jianwei. A brief discussion on the development and challenges of smoking cessation services led by pharmacist abroad[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(12): 537-541, 548. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202408054
Citation: GAO Yu, LING Lin, XING Xinhao, ZHAO Liang, WANG Xinrong, WANG Yan. The pharmacokinetic study on compound diphenhydramine hydrochloride and caffeine in rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(5): 415-421. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202106091
  • 晕动病又称晕动症、运动病,主要包括晕车、晕船、晕机(又称空晕病)[1-2]。晕动症在海军部队较为常见,主要发生于对航海环境尚未习服的官兵,遇到海况较差和乘坐较小船只时,晕动症的发生率会显著升高[3-4]。目前临床上用于治疗晕动病的药物非常有限,常用药物主要包括抗胆碱能药物(如东莨菪碱)和抗组胺药物(如苯海拉明、茶苯海明)。但是两者都有明显的中枢神经抑制作用,会造成服药者出现困倦、嗜睡等副作用[1, 5]。咖啡因是有效的中枢兴奋药,课题组将盐酸苯海拉明与咖啡因组成复方,在发挥盐酸苯海拉明抗晕动病作用的同时,利用咖啡因降低其中枢抑制导致的不良反应。前期课题组开展了盐酸苯海拉明咖啡因防治晕动病的药效学研究,沿用了盐酸苯海拉明用于晕动病防治的常用剂量,即25 mg/人次(70 kg),探索咖啡因的合用剂量,发现盐酸苯海拉明与咖啡因以1:2.4的比例组成复方效果最佳,既可以保持抗晕动病的效果,又可以克服盐酸苯海拉明单用导致的嗜睡不良反应。

    既往的报道多用HPLC法、毛细管电泳法测定制剂中盐酸苯海拉明的含量;对生物样品中盐酸苯海拉明、咖啡因的测定方法也有研究报道,样品处理过程大都采用液-液萃取或固相萃取的方法,操作较为烦琐。本研究建立了UPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中盐酸苯海拉明与咖啡因的浓度,进一步考察了盐酸苯海拉明咖啡因复方在大鼠体内的药动学特点,为该复方制剂的临床应用提供参考依据。

    • Agilent 1290 UPLC 超高效液相色谱(安捷伦,美国);Agilent 6470 Triple Quad 三重四极杆质谱(安捷伦,美国),配备AJS-ESI 喷射流电喷雾离子源、MassHunter 分析工作站;Fresco 21 低温离心机(赛默飞,美国);SECURA125-1CN 型十万分之一电子天平(赛多利斯,德国);Arium® mini 超纯水机(赛多利斯,德国)。

    • 对照品盐酸苯海拉明(中国食品药品检定研究院,批号100066-200807,纯度99.9%);内标盐酸苯海拉明-D6(加拿大TRC,批号8-CNN-25-2,纯度98%);对照品咖啡因(中国食品药品检定研究院,批号171215-200608,纯度>98%);内标咖啡因-D9(美国MTAR,批号90342,纯度97%);甲酸为色谱纯(麦克林,中国);甲醇、乙腈为质谱纯(霍尼韦尔,美国);水为超纯水。

    • SPF级SD 大鼠,6~8周龄[上海市计划生育科学研究所实验动物经营部,实验动物生产许可证号:SCXK(沪)2018-0006。合格证编号:20180006019969]。

    • 色谱柱为ACE 3 C18-PFP(3.0 mm×150 mm,3 μm);流动相系统采用0.1%甲酸水溶液-乙腈(62∶38,V/V),等度洗脱,流速0.4 ml/min;柱温35 ℃;进样量5 μl,分析时间5 min。

    • 采用AJS-ESI离子源,正离子模式,离子源参数设置:干燥气温度350℃;干燥气流速11 L/min;雾化器压力40 psi;鞘气温度350 ℃;鞘气流速11 L/min;毛细管电压4 000 V。多重反应监测(MRM)的参数设置:盐酸苯海拉明256.2→167.0(m/z),碎片电压75 V,碰撞能量10 eV;盐酸苯海拉明-D6(IS)262.0→167.0(m/z),碎片电压75 V,碰撞能量10 eV。盐酸苯海拉明和氘代内标的保留时间均为3.73 min。咖啡因 195.0→138.0(m/z),碎片电压80 V,碰撞能量20 eV;内标咖啡因-D9(IS)204.0→116.2(m/z),碎片电压80 V,碰撞能量40 eV。咖啡因和氘代内标的保留时间均为2.35 min。

    • (1)盐酸苯海拉明标准溶液

      取盐酸苯海拉明对照品适量,精密称定,置10 ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,配成浓度为1.0 mg/ml的对照品储备液;取上述对照品储备液适量,用甲醇按比例逐级稀释,配成浓度分别为20~20 000 ng/ml的系列对照品溶液,置4 ℃冰箱保存,备用。

      (2)盐酸苯海拉明-D6内标标准溶液

      取盐酸苯海拉明-D6对照品适量,精密称定,置10 ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,配成浓度为1.0 mg/ml的对照品储备液;取上述储备液用甲醇稀释为50 ng/ml的内标溶液,置于4 ℃冰箱保存,备用。

      (3)咖啡因标准溶液

      取咖啡因对照品适量,精密称定,置10 ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,配成浓度为1.0 mg/ml的对照品储备液;取上述对照品储备液适量,用甲醇按比例逐级稀释,配成浓度范围分别为300~3×106 ng/ml的系列对照品溶液,置于4 ℃冰箱保存,备用。

      (4)咖啡因D-9内标标准溶液

      取咖啡因-D9对照品适量,精密称定,置10 ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,配成浓度为1.0 mg/ml的对照品储备液;取上述储备液用甲醇稀释为2×103 ng/ml的内标溶液,置于4 ℃冰箱保存,备用。

    • 取50 µl血浆样品,依次加入50 µl的盐酸苯海拉明-D6内标溶液(50 ng/ml)、200 µl的100%乙腈,涡旋1 min,于5 ℃下以12 000 r/min高速离心5 min,取上清液100 μl进样,用于测定盐酸苯海拉明的含量。

      取50 µl血浆样品,依次加入100 µl的咖啡因-D9内标溶液(2 000 ng/ml)、700 µl的100%乙腈,涡旋1 min,于5 ℃下以12 000 r/min高速离心5 min,取上清液100 μl进样,用于测定咖啡因的含量。

    • 取空白大鼠血浆样品、空白大鼠血浆加盐酸苯海拉明与咖啡因的模拟血浆样品(盐酸苯海拉明浓度为100 ng/ml,咖啡因浓度为5×103 ng/ml)、定量下限模拟血浆样品(盐酸苯海拉明浓度为1 ng/ml,咖啡因浓度为15 ng/ml),以及大鼠给药后血浆样品,分别按“2.1.4”项下血浆样品前处理方法操作,进样,获得样品的色谱图。结果空白血浆中的内源性成分不干扰待测物和内标出峰,选择性良好,见图1

      图  1  血浆中盐酸苯海拉明、咖啡因及内标典型色谱图

    • 取空白大鼠血浆,精密加入不同浓度的对照品溶液,制得浓度为1、5、10、50、100、200、500、1×103 ng/ml的盐酸苯海拉明标准曲线模拟样品和浓度为15、50、200、1×103、5×103、2×104、1×105、1.5×105 ng/ml的咖啡因标准曲线模拟样品。以血浆中待测物浓度 (X)为横坐标,待测物与内标的峰面积比值 (Y)为纵坐标,用1/X权重进行回归计算,求得盐酸苯海拉明回归方程:Y=0.022662X−0.006273,r=0.999 6,线性范围为1~1×103 ng/ml;咖啡因回归方程:Y=0.004275X−0.017169,r=0.999 9,线性范围为15~1.5×105 ng/ml。盐酸苯海拉明与咖啡因标准曲线的线性关系良好,权重因子在整个方法验证中保持一致。

    • 分别制备低、中、高3个浓度水平的质控样品,其中盐酸苯海拉明浓度为2.5、250、800 ng/ml,咖啡因浓度为30、5×104、1.2×105 ng/ml,每个浓度平行操作5份,连续分析3 d,计算批内、批间的精密度(RSD)及准确度(RE),结果见表1

      表 1  盐酸苯海拉明、咖啡因精密度和准确度、基质效应和提取回收率试验结果

      待测物浓度(ng/ml)批内(n=6)批间(n=18)基质效应(%)提取回收率(%)
      RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)
      盐酸苯海拉明2.55.232.426.13−0.60114.89±2.0993.22±7.10
      2504.12−2.092.07−0.06110.75±0.4492.82±5.69
      8001.407.002.814.38118.45±0.5192.38±2.60
      咖啡因303.94−4.291.56−5.38114.28±13.3856.59±5.79
      5×1048.20−1.654.613.09106.33±1.3653.86±2.00
      1.2×1052.206.381.934.19123.71±1.2558.34±3.27
    • 以6个不同来源的空白大鼠血浆作为基质,分别制备低、中、高3个浓度水平的质控样品,其中盐酸苯海拉明浓度为2.5、250、800 ng/ml,咖啡因浓度为30、5×104、1.2×105 ng/ml,按“2.1.4”项下进行处理并进样分析,记录盐酸苯海拉明和咖啡因峰面积A和A1;将6个不同来源的空白大鼠血浆提取后,加入待测物和内标溶液,使其最终浓度分别与低、中、高浓度质控样品的进样浓度一致,进样分析,记录峰面积B和B1;同时配制待测物和内标的纯溶液,浓度分别与低、中、高浓度质控样品的进样浓度一致,进样分析,记录峰面积C和C1。以A/B 的值计算提取回收率,B/C 的值计算基质效应,结果见表1

    • 首先通过新鲜配制盐酸苯海拉明、咖啡因和内标的储备液1.0 mg/ml,考察对照品储备液于4 ℃下放置30 d的稳定性;再以空白大鼠血浆作为基质,分别制备低、中、高3个浓度的质控样品,其中盐酸苯海拉明浓度为2.5、250、800 ng/ml,咖啡因浓度为30、5×104、1.2×105 ng/ml,考察血浆样品室温放置稳定性(3 h)、自动进样器稳定性(4 ℃放置24 h),冻融稳定性(反复冻融3次)、长期稳定性(−80 ℃放置30 d),结果见表2

      表 2  盐酸苯海拉明-咖啡因复方稳定性考察结果

      待测物浓度(ng/ml)室温(n=6)冻融(n=18)进样器(n=6)长期(n=6)储备液
      RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RSD(%)RE(%)RE(%)
      盐酸苯海拉明2.56.257.29−0.676.32−0.915.97−5.286.5−1.49
      2504.815.53−5.165.61−7.265.72−2.438.61
      8002.154.960.015.08−0.072.33−0.465.2
      咖啡因30−13.214.62−6.894.84−4.899.11−6.845.673.44
      5×1042.165.92−1.133.58−5.841.790.777.69
      1.2×1052.094.310.312.96−5.192.368.862.84 
    • SD大鼠24只,随机分成4组,每组6只,雌雄各半。实验前禁食12 h不禁水,给药前称重并记录。灌胃组给予盐酸苯海拉明10 mg/kg、咖啡因24 mg/kg(低剂量组);盐酸苯海拉明20 mg/kg、咖啡因48 mg/kg(中剂量组);盐酸苯海拉明30 mg/kg、咖啡因72 mg/kg(高剂量组),收集给药前及给药后0.08、0.17、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8和12 h的血样各0.15 ml;静脉注射组给予盐酸苯海拉明2 mg/kg、咖啡因4.8 mg/kg,收集给药前及给药后0.05、0.13、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、8和12 h的血样各0.15 ml。所有血样均放置30 min后,于3 000 r/min 离心5 min,分离得血浆,于−80 ℃保存待测。

    • 对动物实验中采集的大鼠血浆样本,按“2.1.4”项下进行处理并进样分析,将测得的血浆样品中盐酸苯海拉明和咖啡因的浓度与相应的采血点时间绘制药时曲线,见图2

      图  2  盐酸苯海拉明-咖啡因复方给药后大鼠体内血药浓度

    • 将对应采血时间测得的药物浓度采用非房室模型,计算主要药动学参数,见表3。结果显示,盐酸苯海拉明在10~30 mg/kg和咖啡因24~72 mg/kg 3种不同剂量大鼠灌胃给药后体内呈线性药动学特征,盐酸苯海拉明及咖啡因给药剂量相关系数分别为0.974 3及0.995 3。

      表 3  盐酸苯海拉明-咖啡因复方主要药动学参数($\bar x $±s

      参数盐酸苯海拉明(mg/kg)咖啡因(mg/kg)
      灌胃组静脉注射组灌胃组静脉注射组
      10203022448724.8
      t1/2t/h)1.90±
      1.34
      1.26±
      0.33
      1.24±
      0.14
      1.15±
      0.15
      0.85±
      0.32
      0.64±
      0.09
      1.52±
      1.25
      0.75±
      0.43
      tmaxt/h)0.46±
      0.10
      0.46±
      0.29
      0.25±
      0.00
      0.05±
      0.00
      0.28±
      0.11
      0.42±
      0.20
      0.74±
      0.52
      0.05±
      0.00
      cmax(ng/ml)43.78±
      22.19
      174.76±
      127.42
      543.63±
      248.82
      533.01±
      74.07
      34 375.44±
      2 405.96
      64 746.08±
      6 738.13
      93 972.11±
      6 797.22
      7 565.88±
      485.30
      AUC0-12[ng/(ml·h)]72.97±
      22.21
      237.34±
      182.66
      621.04±
      327.27
      404.27±
      46.51
      123 237.08±
      42 277.09
      316 905.23±
      86 946.7
      589 071.02±
      224 376.28
      11 231.01±
      5 769.43
      AUC0-∞[ng/(ml·h)]78.73±
      22.99
      241.29±
      184.05
      623.82±
      327.8
      407.5±
      45.11
      124 138.53±
      42 773.2
      317 012.42±
      86 889.4
      618 141.98±
      257 230.54
      11 282.98±
      5 787.79
      AUC0-12/AUC0-∞0.93±
      0.05
      0.98±
      0.01
      0.99±
      0.00
      0.99±
      0.01
      0.99±
      0.01
      1.00±
      0.00
      0.97±
      0.05
      1.00±
      0.00
      AUMC0-∞[ng/(ml·h2)]238.18±
      188.85
      384.96±
      267.4
      884.65±
      513.25
      420.08±
      68.37
      331 730.74±
      189 248.54
      1 032 819.34±
      461 031.26
      2 870 085.86±
      1 895 195.98
      16 391.02±
      17 909.93
      MRT0-∞t/h)2.99±
      2.24
      1.64±
      0.33
      1.39±
      0.13
      1.03±
      0.08
      2.46±
      0.75
      3.12±
      0.62
      4.11±
      1.54
      1.2±
      0.61

      同时观察到雌性和雄性大鼠在药动学参数上差异较大,通过t检验计算两组数据的P值,以P<0.05为差异有统计学意义,见图3。高剂量给药时,咖啡因在雄性大鼠体内的半衰期(t1/2)及达峰时间(tmax)明显小于雌性;3个剂量给药组中雌性大鼠体内盐酸苯海拉明及咖啡因的达峰浓度(cmax)及药时曲线下面积(AUC)均大于雄性。

      图  3  灌胃组雌雄性大鼠体内盐酸苯海拉明-咖啡因药动学参数的差异比较

    • 盐酸苯海拉明是经典的抗晕动病药物,咖啡因是常用的中枢兴奋药,然而对其开展的药动学研究较少,文献报道多为HPLC法、毛细管电泳法测定制剂中的含量[6-8];亦有生物样品中盐酸苯海拉明、咖啡因的测定方法报道,但样品处理过程大都需要采用液-液萃取或固相萃取的方法[9-14],较为烦琐。本文采用UPLC-MS/MS法定量血浆样品中的盐酸苯海拉明、咖啡因,采用乙腈作为蛋白沉淀剂,方法简便易操作。复方中盐酸苯海拉明咖啡因的处方组成为盐酸苯海拉明25 mg和咖啡因60 mg,两药在大鼠体内的血药浓度相差较大,盐酸苯海拉明的血药浓度很低,咖啡因的血药浓度相对很高,两药同时检测的难度很大。经过比较样品前处理的方法,最终确定将二者分开处理,按不同比例进行蛋白沉淀,最终使盐酸苯海拉明达到1 ng/ml较低的检测下限,而咖啡因达到15~1.5×105 ng/ml较大的线性范围,该方法能准确定量大鼠血浆样本中盐酸苯海拉明和咖啡因的浓度,是一次成功的方法学探索。

      药动学研究显示,盐酸苯海拉明和咖啡因的达峰时间均在0.5 h左右、半衰期均在1 h左右,快速起效,盐酸苯海拉明的抗晕动作用和咖啡因的中枢兴奋作用可能同时发挥,可满足抗晕动病的同时克服嗜睡不良反应的需求。两药的药动学参数在雌雄大鼠间具有明显差异,可能与激素对代谢的影响有关。人们在日常生活中也会遇到服用盐酸苯海拉明的同时饮用茶或者咖啡的情况,茶或者咖啡因这样的中枢兴奋饮料中含有咖啡因,本研究考察了咖啡因与盐酸苯海拉明同服的药动学特点,对日常生活中药物的合理应用也有借鉴意义。

参考文献 (14)

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