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肝苏颗粒是由苗药赶黄草（Penthorum chinense Pursh）加工制成的单方制剂，1998年被列为基本药物，在临床上主要用于治疗酒精性肝损伤、慢性乙型肝炎等疾病[1],目前收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十三册》（下称《部颁标准》）[2]。近年来对肝苏颗粒的研究主要集中于药理与临床研究，药理研究表明肝苏颗粒对CCl4致化学性、胆管阻塞性和免疫性大鼠肝纤维化模型均有治疗作用，可明显抑制肝脏脂质过氧化损伤，改善肝功能和减轻肝脏纤维化[2-4]；临床上，明确了采用肝苏颗粒联合西药共同作用，在治疗慢性乙型肝炎、保肝降酶、退黄上均具有高于单用西药的治疗效果[5-8]，但对其制剂质量控制的研究较少，鉴于《部颁标准》发布时间久远，随着研究进展及分析技术与设备的进步，应制定更为科学、完善的标准，以保证制剂稳定、临床用药安全。
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Agilent 1260高效液相色谱仪、DAD紫外检测器、Chemstation色谱工作站（美国Agilent 公司）；XS105DU 电子天平、XS104电子天平（梅特勒公司）；HSW-24 四孔水浴锅、SY-360H超声仪（上海诚献仪器设备有限公司）；DHG-9053A鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DL-I-15台式封闭电炉（天津恒瑞科教仪器有限公司）；ATS 4全自动点样仪（瑞士CAMAG公司）。
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乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为本课题组分离纯化而得，采用高效液相色谱法以峰面积归一化法测定其纯度均大于98％；15批含糖型肝苏颗粒均由四川古蔺肝苏药业有限公司提供，（批号：190401、190402、190403、190404、190405、190406、190407、190408、190409、190410、190411、190412、190111、190119、190123，分别编号为GSKL1～GSKL15，规格：9g/袋）；乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯，水为杭州娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
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取肝苏颗粒适量，研细（过3号筛），取1.0 g，精密称定，精密加入10 ml 80%甲醇，称定重量，超声提取15 min（功率350 W，频率53 kHz），取出放至室温，用80%甲醇补足失重，摇匀，过0.45 µm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷标准品适量，精密称定，置于容量瓶，加入80%甲醇定容至刻度线，制成每1 ml含乔松苷1 mg的标准品溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5 µl、对照品溶液2 µl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%三氯化铝乙醇溶液，晾干，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光（365 nm）下检视。根据图1显示，供试品色谱与对照品色谱中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在相同位置显示相同颜色斑点。
图 1 肝苏颗粒TLC色谱图
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色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B）；梯度洗脱：0～10 min，28%→30% A；10～17.5 min，30%→ 34.5% A；17.5～20 min，34.5%→90% A；检测波长：280 nm（紫外检测时间20 min）；柱温：30 ℃；流速：1.0ml/min；进样量：10 μl。
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取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成质量浓度分别为0.24 mg/ml的对照品储备液。
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取肝苏颗粒适量，研细（过3号筛），取粉末1.0 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入25 ml 80%甲醇溶液，称定重量，超声处理15 min，取出放至室温，用80%甲醇补足失重，摇匀，取样过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液即得。
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取提取溶剂80%甲醇与对照品储备液、样品溶液，按上述色谱条件进样10 µl，记录色谱图，结果见图2。根据结果，乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷分离效果良好，分离度大于1.5，理论塔板数不低于7700。
图 2 肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的 HPLC 色图谱
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量取对照品储备液（240µg/ml）适量，依次用80%甲醇稀释成240、120、60、24、4.8、2.4µg/ml，以进样质量为横坐标 (X) ，峰面积为纵坐标 (Y) 进行回归，得乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线为：Y=2323.5748X+2.0537，r= 0.9999，表明乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在2.4~240 µg/ml范围内线性关系良好。
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精密吸取对照品溶液（240µg/ml）10µl，在上述液相色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积RSD为0.13%，表明仪器精密度良好。
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取肝苏颗粒(GSKL-10)，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液6份，测定峰面积，结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰的平均峰面积为1789.29，RSD为2.12%，表明该方法重复性良好。
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取肝苏颗粒（GSKL-10），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.2.1”项下色谱条件，分别于0、4、8、12、24 h进样，结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积为1788.29，RSD为0.67%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
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分别称取肝苏颗粒（GSKL-10）6份已知含量的样品约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，按照接近 1∶1 的量计算所需添加的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液，加入到样品中，按“2.2.3”项下方法平行制成6份供试品溶液，进样 10 μl，记录峰面积，结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率为100.76%，RSD 为 0.66%，说明该方法准确度较好，计算结果见表1。
表 1 乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率试验结果(n=6）
样品
编号样品中含量
（mg）加入量
（mg）测得总量
（mg）回收率
（%）平均回收率
（%）RSD
（%）GSKL-10 0.96 0.95 1.9306 102.17 100.76 0.66 0.95 1.9102 100.02 0.95 1.9146 100.48 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9156 100.59 -
分别取每批肝苏颗粒适量，研细（过3号筛），取粉末1.0 g，精密称定，按“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液，每批样品平行制备2份，每份进样3次，进样量10 μl，记录峰面积，计算乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量，结果见表2。
表 2 15批肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定结果（
$ \overline x $ ±SD）样品编号 含量（mg/袋） GSKL-1 17.87±0.13 GSKL-2 19.02±0.07 GSKL-3 19.19±0.40 GSKL-4 18.67±0.14 GSKL-5 18.37±0.07 GSKL-6 18.84±0.08 GSKL-7 18.00±0.01 GSKL-8 15.99±0.02 GSKL-9 17.17±0.01 GSKL-10 17.31±0.03 GSKL-11 17.50±0.02 GSKL-12 20.93±0.16 GSKL-13 20.12±0.16 GSKL-14 15.30±0.06 GSKL-15 17.46±0.08 -
肝苏颗粒目前没有被中国药典收录，仅收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十三册》附录中，其中将槲皮素作为薄层鉴别项下的主要成分，但是槲皮素的含量较低，且专属性较差。按照部颁标准的方法制备供试品溶液，方法较为繁琐且样品浓稠不易展开。本研究结合前期关于肝苏颗粒活性成分的报道[9-12]，选择了乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为特征成分进行薄层鉴别。在本实验中，综合考察了供试品的点样体积（2 µl、5 µl）对薄层展开的影响，发现样品点样量5 µl、对照品点样量2 µl并点成条带状，视检结果最佳。为了进一步考察薄层鉴别的适用性，本研究还对实验室温度（4 ℃、22 ℃）、湿度（30%、70%）以及不同品牌硅胶板（MachereyNagel牌、黄海牌、银龙牌）进行了考察，发现本实验建立的肝苏颗粒薄层鉴别方法耐用性较好，可以更好的实现肝苏颗粒质量标准提升。
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文献研究发现，乔松素-7-O-β-D-葡萄糖在肝苏颗粒中的含量较高，且具有较高的专属性，因此，在本研究中将其作为肝苏颗粒的含量测定的指标性成分。同时，在确定含量测定成分的基础上，为了充分获得肝苏颗粒中的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量，本研究对供试品溶液的提取方法（超声、回流）、提取溶剂（水、不同体积分数的甲醇）、提取料液比（1∶25、1∶50、1∶100）及提取时间（0.25、0.5、0.75 h）等进行了考察，最终确定采用80％甲醇（1∶25）超声提取0.25 h作为肝苏颗粒供试品溶液的制备方法。
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本研究采用二极管阵列检测器对待测成分进行了全波长光谱扫描，结果显示，待测成分在280 nm波长处均有较强吸收，基线较平稳，分离度较好，且测定不受杂质的干扰，故最终选择280 nm作为检测波长。本研究考察了2种流动相体系（乙腈-水、甲醇-水）对色谱峰峰形的影响，发现乙腈-水系统能够实现乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的分离度，但是出现了较为严重的拖尾现象。通过对乔松素-7-O-β-D-葡萄糖结构的分析发现，其中含有较多的酚羟基，因此在水相中添加酸（0.5%甲酸）会大大改善乔松素-7-O-β-D-葡萄糖拖尾的现象，故选择乙腈-0.5％甲酸溶液作为流动相。当然，在本研究中还对肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量测定的耐用性进行了考察，通过外标一点法分别对不同仪器不同色谱柱[Atlantis®T3 (4.6 mm×250 mm，5µm)、DikmaDiamonsilC18 (4.6 mm×250 mm，5µm)]、不同柱温（20、25、30 ℃）、不同流速（0.8、1.0、1.2ml/min）进行考察，发现均能够满足乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量测定，说明本研究建立的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖含量测定方法具有很强的普适性。
综上，本文建立的肝苏颗粒薄层鉴别及乔松素-7-O-β-D-葡萄糖含量测定的方法，解决了现行标准中供试品制备繁琐、指标性成分含量低且专属性差的难点，具有精密度高、重复性好和稳定有效的特点。综合考虑测定结果及肝苏颗粒制备过程中该成分的转移率，拟定本品每袋含乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷（C21H22O9）计，不得少于12.0 mg，可用于肝苏颗粒药品质量的控制。
Study on quality standard improvement for Gansu granules
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摘要:
目的 建立肝苏颗粒质量标准，有效控制药品质量。 方法 以乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为指标性成分，改进肝苏颗粒的薄层鉴别方法；采用Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）色谱柱，以乙腈-0.5%甲酸水溶液为流动相，以280nm检测波长，建立乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC含量测定方法。 结果 采用所建立的TLC方法鉴别肝苏颗粒时，特征斑点分离度良好、清晰；定量分析结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度在2.4~240 µg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系（r= 0.9999），平均加样回收率为100.76%，RSD为0.66%，准确度良好。 结论 本实验所建立的TLC鉴别方法和 HPLC含量测定方法专属性强、重现性好，可以作为肝苏颗粒质量控制的提高标准。 -
关键词:
- 肝苏颗粒 /
- 质量标准 /
- 薄层色谱法 /
- 乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷 /
- 高效液相色谱法
Abstract:Objective To establish the quality standard of Gansu granules (GGs) and effectively control the quality of GGs. Methods TLC identification method of Gansu granules was improved by using pinocembrin-7-O-β-D-glucoside as the indicator. In HPLC analysis, Agilent ZorbaxSB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μ m) was used as a chromatographic column, and acetonitrile-0.5% formic acid solution was used as the mobile phase. The detection wavelength of 280 nm was used to analyze the content of pinocembrin-7-O-β-D-glucoside in GGs. Results The separation of characteristic spots was good and clear when the established TLC method was used to identify Gansu granules. Quantitative analysis showed that the concentration of pinocembrin-7-O-β-D-glucoside has a good linear relationship with the peak area in the range of 2.4-240 µg/ml (r= 0.9999). The average sample recovery rate of pinocembrin-7-O-β-D-glucoside is 100.76% with RSD value of 0.66%. The accuracy was good. Conclusion The TLC identification method and HPLC content determination method established in this experiment have strong specificity and good reproducibility, and can be used as an improved standard for the quality control of Gansu granules. -
Key words:
- Gansu granules /
- quality standards /
- TLC /
- pinocembrin-7-O-β-D-glucoside /
- HPLC
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骨质疏松性椎体压缩骨折（OVCF）属于脊柱骨折，多发于中老年人，为临床最为常见的骨质疏松性骨折之一，严重影响患者脊柱功能、日常活动能力等，且发病率、致残、致死率均较高。现阶段，临床多以经皮椎体成形术（PVP）对OVCF患者进行治疗，临床疗效确切，可迅速缓解骨折引起的疼痛，促进椎体形态和功能恢复，但其对患者骨质疏松程度及骨质疏松引起的疼痛改善效果欠佳，故临床倡导PVP术后予以适当的干预以改善手术效果[1]。西医临床常用药物为碳酸钙D3，但有研究[2]指出其对部分患者的干预效果较差，临床多与中医药物干预、锻炼等相结合对PVP术后OVCF患者进行治疗。中医学认为，OVCF属“骨痿”范畴，主要病机为肾精不足、气滞血瘀所致骨质枯槁，肝肾阴虚证为其主要证型之一，应治以滋补肝肾，填精壮骨[3]。中药膏方含阿胶、枸杞子、鸡血藤、党参等，根据临床中药机制可见其有补肾填精、益气健脾、通络止痛等功效，但其对PVP术后OVCF患者的疗效及机制尚未完全明确[4]。故设立本研究，以120例于我院行PVP治疗的OVCF患者为研究对象进行前瞻性随机对照研究，旨在进一步观察中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF患者的疗效，为其临床应用提供参考。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
前瞻性选取120例2016年1月至2017年9月于我院行PVP治疗的OVCF患者为研究对象，患者均知情同意，按随机数字表法将其分为观察组（60例），对照组（60例）。本研究经我院医学研究伦理研究委员会审核通过。观察组：男35例，女25例；年龄50~80岁，平均（66.27±2.15）岁；体质量指数（BMI）19~25 kg/m2，平均（22.35±0.41）kg/m2；骨质疏松病程1~5年，平均（2.51±0.22）年；骨折病程1~3周，平均（1.55±0.12）周；骨压缩程度[5]：轻度16例，中度30例，重度14例。对照组：男33例，女27例；年龄51~78岁，平均（66.18±2.20）岁；BMI 19~25 kg/m2，平均（22.41±0.42）kg/m2；骨质疏松病程1~5年，平均（2.48±0.20）年；骨折病程1~3周，平均（1.52±0.13）周；骨压缩程度：轻度15例，中度29例，重度16例。两组性别、年龄、BMI、骨质疏松病程、骨折病程、压缩程度等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 纳入标准
①中医诊断符合《中医药防治原发性骨质疏松症专家共识（2015）》[6]中肝肾阴虚证相关辩证标准，西医诊断符合《骨质疏松性骨折诊疗指南》[7]中OVCF相关诊断标准，并经临床检查确诊者；②均为胸腰椎骨折，且是首次因OVCF就诊者；③无PVP相关禁忌，手术成功，且术后生命体征平稳者；④近3个月内未行特殊的抗骨质疏松治疗，同期未接受其他治疗者；⑤无脊髓损伤或神经根症状者等。
1.3 排除标准
①椎体爆裂性骨折、陈旧性胸腰椎压缩性骨折或肿瘤、感染等所致病理骨折者；②脊柱结核、骨肿瘤者；③继发性骨质疏松者；④精神障碍、认知能力或沟通能力障碍者；⑤伴严重器官障碍、急性腰扭伤、骨瘤骨转移、强直型脊柱炎、四肢新鲜骨折、软组织损伤者等。
1.4 方法
对照组予以碳酸钙D3咀嚼片[重庆海默尼制药有限公司，国药准字H20205039，碳酸钙1.25 g（相当于钙0.50 g）、维生素D3 200 IU]口服，每次1片，每日2次。同时指导患者每天摄入适量豆类、瘦肉、牛奶、鱼类等优质蛋白（1.20~1.40 g/kg），进行适当的日光浴及行走锻炼（30 min以上）。
观察组在对照组基础上予以中药膏方（将阿胶、枸杞子、鸡血藤、党参各200 g，鹿角胶、茯苓、桑寄生、熟地黄、牛膝、丹参、威灵仙各150 g，龟板胶、白术、骨碎补、神曲各100 g，炙甘草60 g制成膏剂后即得）口服，开水调服，每次10 g，每日2次。同时指导患者进行八段锦锻炼，所用方法为改良八段锦第八式：躯体直立，两足平行分开（与肩同宽），两手臂自然下垂，手指稍并拢，掌指向前，两膝关节屈曲135°~170°；两眼平视前方，微张口，平稳呼吸，全身放松2 min，紧接着保持原来体位尽可能屈膝下蹲，然后在双上臂伸直情况下慢慢上举到水平，慢慢随之站起（保持躯体直立下），至身体直立时顺势将两脚跟向上提起（期间慢慢匀速吸气到最满并憋气），停顿10~15 s；两脚跟下落着地，双手臂随之顺势下落，回到膝关节屈曲位（期间慢慢匀速呼气）；每次7个循环，每日3次。两组均治疗6个月，并随访3年。
1.5 观察指标
1.5.1 疗效
根据《中药新药临床研究指导原则》[8]可将两组治疗6个月后的疗效分为临床治愈（腰部功能完全恢复，临床症状、体征完全消失，X射线可见压缩椎体恢复正常状态），显效（腰部功能没有完全恢复，临床症状、体征基本消失，X射线可见压缩椎体恢复正常状态），有效（腰部功能没有完全恢复，临床症状、体征减轻，X射线可见大量骨痂形成，但未完全愈合），无效（腰部功能有改善，临床症状、体征有减轻，但X射线可见几乎无骨痂形成）。临床治愈率=临床治愈例数/总例数；显效率=显效例数/总例数；有效率=有效例数/总例数；无效率=无效例数/总例数。总有效率=（临床治愈+显效+有效）例数/总例数。
1.5.2 不同时点腰背疼痛情况
以疼痛视觉模拟评分法（VAS，0~10分）[9]评估两组治疗1、3、6个月的腰背疼痛情况，得分越高提示患者腰背疼痛程度越严重。
1.5.3 骨密度（BMD）、椎体后凸角度（Cobb角）及椎体前壁高度（AVBH）变化情况
以BMD测定仪（QDR 4500C，美国Hologic公司）检测两组治疗前、治疗6个月后的腰椎、股骨颈BMD；以X射线检查两组治疗前、治疗6个月后的Cobb角、AVBH。
1.5.4 骨代谢指标
抽取两组治疗前、治疗6个月后的晨起空腹静脉血3 ml，离心机3 000 r/min离心15 min，分离血清，以全自动电化学发光分析仪（罗氏Cobas e601，北京东方迈润医疗器械有限公司）检测血清I型原胶原降解产物（β-Cross I）、N端中段骨钙素（N-MID Ost）、甲状旁腺素（PTH）水平。
1.5.5 PVP术后推体再骨折发生率
记录两组随访时间及随访1年内、1~3年内PVP术后推体再骨折发生率，同1例患者发生多次再骨折仅算1例。
1.6 统计学方法
数据采用SPSS 21.0（IBM公司，美国）统计学软件进行分析，计量资料采用（
$\bar x $ ±s）表示，组内比较使用配对t检验，治疗前、治疗6个月后的比较使用独立样本t检验，多组间比较采用F检验；计数资料采用[n(%)]表示，使用χ2检验进行比较。2. 结果
2.1 两组患者临床疗效比较
治疗6个月后，观察组临床治愈率为73.33%，高于对照组的53.33%（P<0.05）；而两组显效率、有效率、无效率、总有效率比较差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
表 1 两组患者临床疗效比较[n(%)]组别 例数 临床治愈率 显效率 有效率 无效率 总有效率 观察组 60 44(73.33) 13(21.67) 3(5.00) 0(0.00) 60(100.00) 对照组 60 32(53.33) 20(33.33) 8(13.33) 0(0.00) 60(100.00) χ2 5.167 2.048 2.502 P <0.05 >0.05 >0.05 2.2 两组患者不同时点腰背疼痛情况比较
治疗前，两组患者VAS评分比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗3、6个月后两组VAS评分均降低，且观察组低于对照组（P<0.05）；与治疗3个月后比较，治疗6个月后，两组VAS评分均降低（P<0.05，表2）。
表 2 两组患者不同时点腰背疼痛情况比较（$\bar x $ ±s，分）组别 例数 治疗前 治疗3个月后 治疗6个月后 观察组 60 7.55±0.37 2.47±0.33* 1.14±0.23** 对照组 60 7.52±0.35 3.51±0.51* 2.36±0.42** t 0.456 13.262 19.735 P >0.05 <0.05 <0.05 *P<0.05，与治疗前比较；**P<0.05，与治疗3个月后比较 2.3 两组患者BMD、Cobb角及AVBH变化情况比较
治疗前，两组患者BMD、Cobb角及AVBH比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗6个月后两组腰椎、股骨颈BMD及AVBH均升高，且观察组高于对照组（P<0.05）；而两组Cobb角均降低，且观察组低于对照组（P<0.05，表3）。
表 3 两组患者BMD、Cobb角及AVBH变化情况比较（$\bar x $ ±s）时间 组别 例数 腰椎BMD(g/cm3) 股骨颈BMD(g/cm3) Cobb角(°) AVBH(%) 治疗前 观察组 60 0.70±0.07 0.68±0.06 23.09±2.51 53.93±7.26 对照组 60 0.69±0.08 0.67±0.07 23.11±2.49 54.04±7.44 t 0.729 0.840 0.044 0.082 治疗6个月后 观察组 60 0.93±0.08* 0.93±0.07* 6.47±1.98* 96.56±9.41* 对照组 60 0.84±0.11* 0.85±0.08* 8.91±2.26* 85.73±8.04* t 5.125 5.829 6.290 6.778 *P<0.05，与治疗前比较 2.4 两组患者骨代谢指标比较
治疗前，两组患者血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗6个月后，两组血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平均降低，且观察组低于对照组（P<0.05，表4）。
表 4 两组患者骨代谢指标比较（$\bar x $ ±s）时间 组别 例数 β-Cross I(ng/ml) N-MID Ost(ng/ml) PTH(pg/ml) 治疗前 观察组 60 0.79±0.13 42.10±9.53 62.28±9.42 对照组 60 0.78±0.14 41.98±9.52 62.25±9.39 t 0.405 0.069 0.017 治疗6个月后 观察组 60 0.67±0.10* 36.15±5.46* 52.47±4.02* 对照组 60 0.73±0.12* 38.93±6.14* 57.45±5.72* t 2.975 2.621 5.518 *P<0.05，与治疗前比较 2.5 两组患者PVP术后推体再骨折发生率比较
两组患者随访时间、随访1年内、1~3年内PVP术后推体再骨折发生率比较，均无统计学意义（P>0.05）；随访3年内，观察组PVP术后推体再骨折发生率为3.33%，低于对照组的20.00%（P<0.05，表5）。
表 5 两组患者PVP术后推体再骨折发生率比较组别 例数 随访1年内发生率
[n(%)]随访1~3年内 合计
[n(%)]随访时间
($\bar x $±s, 年)发生率
[n(%)]观察组 60 2(3.33) 1.94±0.43 0(0.00) 2(3.33) 对照组 60 7(11.67) 1.86±0.72 5(8.33) 12(20.00) t/χ2 3.003 0.739 3.339 8.086 P >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 3. 讨论
骨质疏松为临床常见的慢性骨代谢异常疾病，可见骨钙含量减少、骨量下降，极易出现骨折，OVCF为其临床常见类型。OVCF发病后可致患者出现椎体高度下降、疼痛、功能障碍等，未得到及时有效的治疗，可致残、致死，且其再发骨折风险高[10]。现阶段，微创PVP治疗为大多保守治疗无效的OVCF患者的主要选择，可恢复椎体力学强度、稳定骨折，但骨转换率及骨量流失未能纠正，且手术造成的内外骨膜血管损伤及制动可能会加重骨质疏松而影响患者预后[11]。故PVP术后予以适当的干预治疗至关重要，临床常用药物为碳酸钙D3，其可促进骨质形成而缓解骨质疏松程度，但其多偏重于抑制骨吸收，减轻骨质流失。近年来，越来越多的研究[12-13]发现，中医药治疗PVP术后OVCF有一定成效，其既能抑制流失，又能促进成骨形成，在抗骨质疏松、促进骨折愈合、防治再骨折发生等方面优势明显，现已备受临床医生青睐，但关于何种药物更佳尚无统一定论。
中医认为OVCF属“骨枯”、“骨萎”、“痹证”等范畴，肾中精气是骨生长发育的根本，脾胃为后天之本，气血生化之源，故其发病机制主要为肾精亏虚、脾精不足所致骨骼失养；外伤导致筋脉损伤、气血运行不畅，加之患者湿热寒邪侵袭、肾脾虚亏，容易加重气滞血瘀症状，使得骨骼和筋骨失去濡养，导致骨关节萎缩、活动不利等而诱发OVCF，故治疗应补肾壮骨、活血行气、舒经通络、消肿止痛[14]。中药膏方中的阿胶、枸杞子、鹿角胶、龟板胶可补血益气、填精益髓，其中，龟鹿二仙胶中鹿角胶、龟板胶为主方，与党参、枸杞子配伍可增强益气养阴、补肾填精益髓之功；鸡血藤可活血补血、舒筋活络、疏风止痛；党参可补中益气、生血行血；茯苓可利水消肿、益气健脾；桑寄生、熟地黄、骨碎补、牛膝可补肾壮骨；丹参、威灵仙、神曲可健脾和胃、消食调中，进而减轻膏方的厚腻；炙甘草可补脾和胃，益气复脉，同时调和诸药；全方可发挥补肾填精、益气健脾、通络止痛之功效[15-16]。同时八段锦作为一种由八节不同动作组成的一套医疗、康复体操，其通过人体垂直方向的应力刺激成骨、下蹲平衡锻炼、膀胱经的经气疏通等可对OVCF患者产生舒筋活络的良好功效，进而有助于促进患者腰部功能恢复，提高患者临床疗效。本研究显示，治疗6个月后，观察组临床治愈率高于对照组，且治疗3、6个月后VAS评分低于对照组，进一步说明中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可有效缓解患者腰背疼痛，疗效显著。
OVCF的发生发展与骨代谢及转换密切相关，其中，β-Cross I为骨吸收的重要指标，N-MID Ost为骨形成、骨转换的重要指标，可直接反映成骨细胞的活性与数量变化，PTH则可加速骨代谢活跃，促进骨吸收，血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平升高提示患者骨转换成程度严重，可促进病情进展，不利于PVP术后腰部功能的恢复[17]。本研究显示，治疗6个月后，观察组腰椎、股骨颈BMD及AVBH高于对照组，Cobb角、血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH低于对照组，且随访3年内PVP术后推体再骨折发生率低于对照组，提示中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可调节患者机体骨代谢，提高腰椎、股骨颈BMD及AVBH，降低Cobb角，促进腰部功能的恢复，降低PVP术后推体再骨折发生率。PVP术后OVCF患者骨折愈合的本质为骨重建，该过程涉及局部微环境的构建、成骨细胞的活化、大量血管的生成等，而现代药理学研究[18-20]指出，中药膏方中的骨碎补含双氢黄酮苷、黄酮等成分，可提高BMD，刺激成骨细胞增殖分化，防止骨吸收、促进骨形成，发挥抗骨质疏松、促进骨折愈合等作用，进而促进腰部功能的恢复；牛膝含牛膝竹节参皂苷，可发挥较好的抗炎、止痛、改善微循环作用，有助于促进局部微环境的构建而促进患者骨折愈合，进而降低再骨折发生率。同时联合八段锦进行治疗，可有效疏通OVCF患者经络，促进机体气血运行通畅，进而可增强中药膏方促进患者腰部功能恢复的作用，降低患者PVP术后推体再骨折发生率。而对照组由于仅进行常规对症治疗，而未对患者采取中药膏方联合八段锦等治疗，故患者复发的风险明显增加。
综上，中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可降低其血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平，调节机体骨代谢，有助于提高腰椎、股骨颈BMD及AVBH，降低Cobb角，促进腰部功能的恢复，进而缓解患者腰背疼痛，降低PVP术后推体再骨折发生率，疗效显著。
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表 1 乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率试验结果(n=6）
样品
编号样品中含量
（mg）加入量
（mg）测得总量
（mg）回收率
（%）平均回收率
（%）RSD
（%）GSKL-10 0.96 0.95 1.9306 102.17 100.76 0.66 0.95 1.9102 100.02 0.95 1.9146 100.48 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9156 100.59 
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表 2 15批肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定结果（
$ \overline x $ ±SD）样品编号 含量（mg/袋） GSKL-1 17.87±0.13 GSKL-2 19.02±0.07 GSKL-3 19.19±0.40 GSKL-4 18.67±0.14 GSKL-5 18.37±0.07 GSKL-6 18.84±0.08 GSKL-7 18.00±0.01 GSKL-8 15.99±0.02 GSKL-9 17.17±0.01 GSKL-10 17.31±0.03 GSKL-11 17.50±0.02 GSKL-12 20.93±0.16 GSKL-13 20.12±0.16 GSKL-14 15.30±0.06 GSKL-15 17.46±0.08
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[1] 郑洋, 王佳慧, 赵铁建. 肝苏颗粒治疗慢性乙型肝炎疗效的Meta分析[J]. 中国现代医学杂志, 2018, 28(31):47-52. [2] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十三册[M]. 北京, 人民卫生出版社, 1997: 87. [3] 谢君. 肝苏颗粒对肝纤维化影响的实验研究[D]. 成都: 成都中医药大学, 2017. [4] 谢君, 谢晓芳, 李梦婷, 等. 肝苏颗粒对胆总管阻塞性肝纤维化大鼠肝功能和病理损伤的影响[J]. 中药与临床, 2018, 9(2):48-51. [5] 谢君, 谢晓芳, 代良萍, 等. 肝苏颗粒对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝功能和病理损伤的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2017, 23(8):117-123. [6] 高占华. 肝苏颗粒的保肝降酶及退黄作用临床效果分析[J]. 承德医学院学报, 2019, 36(1):42-44. [7] 胡淑华, 冯佩璐, 江雪, 等. 肝苏颗粒联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎的疗效观察[J]. 现代药物与临床, 2018, 33(6):1506-1509. [8] 李毅, 赵川, 杨凤. 肝苏颗粒联合拉米夫定和阿德福韦酯治疗乙型肝炎肝硬化的疗效观察[J]. 现代药物与临床, 2016, 31(8):1209-1212. [9] WANG A Q, LI M X, HUANG H M, et al. A review of Penthorum chinense Pursh for hepatoprotection: traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicology and clinical trials[J]. J Ethnopharmacol,2020,251:112569. doi: 10.1016/j.jep.2020.112569 [10] WANG A Q, LIN L G, WANG Y T. Traditional Chinese herbal medicine Penthorum chinense Pursh: aphytochemical and pharmacological review[J]. Am J Chin Med,2015,43(4):601-620. doi: 10.1142/S0192415X15500378 [11] ZHOU F Y, WANG A Q, LI D, et al. Pinocembrin from Penthorum chinense Pursh suppresses hepatic stellate cells activation through a unified SIRT3-TGF-β-Smad signaling pathway[J]. Toxicol Appl Pharmacol,2018,341:38-50. doi: 10.1016/j.taap.2018.01.009 [12] SUN Z L, ZHANG Y Z, ZHANG F, et al. Quality assessment of Penthorum chinense Pursh through multicomponent qualification and fingerprint, chemometric, and antihepatocarcinoma analyses[J]. Food Funct,2018,9(7):3807-3814. doi: 10.1039/C8FO00754C -
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