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糖尿病是一种由遗传和环境因素共同引起的糖代谢紊乱综合征，根据文献报告，全世界大约有4.35亿人被诊断患有糖尿病，预计到2040年这一数字将超过6.42亿[1]。糖尿病在我国患病率逐渐增高，居世界首位，严重影响人民生活健康，且与炎症密切相关。目前以肠组织为靶器官的研究相对较少，尤其是肠道免疫系统和肠道微生物的研究[2-4]。中药材黄精，是中国传统的大宗药材[5]，在民间又是一种使用面非常广的药食同源植物，《中国药典》2015年版记载为滇黄精P. kingianum Coll. et Hemsl.、黄精P. sibiricum Red.或多花黄精P. cyrtonema Hua的干燥根茎[6]；黄精在抗氧化和抗衰老、降血糖、调节免疫力、调血脂、抑制老年痴呆和改善记忆力、抗肿瘤、扩张血管、抗菌和抗病毒等方面显示出潜在的药用价值[7-8]。本研究以高脂高糖饲料喂养和一次性注射链脲菌素复制糖尿病模型，比较高、中、低剂量黄精多糖对小鼠降血糖以及对肠道组织结构的改善作用，旨在为中药治疗糖尿病提供理论依据，为黄精药材的开发应用奠定基础。
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ICR小鼠，雄性，体重18~22 g，购于重庆腾鑫生物技术有限责任公司，合格证号：SCXK（京）2019-0010，伦理编号：伦审〔2021〕2-077号，饲养于遵义医科大学动物中心。饲养环境为光照，通风良好，温度（23±2） ℃。试验开始前分笼饲养，适应环境7 d，整个试验过程自由进食和饮水。普通饲料(碳水化合物占65.08%，脂肪占11.85%，蛋白质占23.07%)，高脂饲料的重量组成以 67%普通饲料为基料，添加10%猪油、20%蔗糖、2.5%胆固醇、0.5%胆酸钠，购自北京科奥协力饲料有限公司。
黄精多糖（批号：TZR200714，陕西天之润生物科技有限公司）；链脲佐菌素(Sigma公司)；甲醛（批号：2018080201，成都科隆化学品有限公司）；柠檬酸（批号：2020052090）、柠檬酸钠（批号：2019072051）购自天津市致远化学试剂有限公司。
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ME104E/02 电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；DW-86L386 立式超低温保存箱（青岛海尔特种电器有限公司）；GA-3型血糖仪及配套试纸（三诺生物传感股份有限公司）；Multifuge X1R 冷冻离心机[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]；DM400B 显微镜、PELORIS型脱水机、YB-9LF型包埋机、RM 2235切片机（德国莱卡公司)；202-1AB型电热恒温干燥箱、DK-98-IIA 电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。
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分别称取0.625、1.25、2.5 g黄精多糖溶于50ml 蒸馏水，配置成12.5、25、50 mg/ml的低、中和高剂量黄精多糖溶液，备用。
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称取柠檬酸2.1g加入双蒸水至100 ml中配成柠檬酸溶液，称取柠檬酸钠2.94 g加入100 ml双蒸水配成柠檬酸钠溶液，将柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液按1∶1.1的比例混合，用柠檬酸钠溶液调节pH至4.4，配制浓度1%的链脲佐菌素，现配现用。
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将小鼠饲养于小鼠笼中，温度（23±2） ℃，昼夜12 h条件下饲养。适应性喂养7 d，整个试验过程自由进食和饮水，之后开始建立2型糖尿病小鼠模型。除正常对照组外，其余小鼠均高糖高脂饲料喂养6周，一次性给予40 mg/kg 链脲佐菌素腹腔注射，继续喂养高糖高脂饲料；尾静脉取血检测小鼠血糖值，血糖值≥11.1mmol/L的小鼠则造模成功。将小鼠分为5组，每组10只，正常对照组：正常饲养；模型组：给予高脂高糖饲料并灌胃20ml/kg生理盐水；黄精多糖低、中、高剂量组：给予高脂高糖饲料并分别灌胃125、250、500 mg/kg[9]黄精多糖；每天早上九点灌胃，连续4周，每周测一次小鼠体重和血糖值，实验结束使用浓度为2%的戊巴比妥钠，以50 mg/kg腹腔注射麻醉后颈椎脱位法处死小鼠。
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小鼠禁食不禁水，每周称取体重，观察小鼠生长情况。
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每周进行小鼠尾静脉取血测血糖。
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实验结束前收集各组小鼠的粪便于冻存管，立即存放至液氮中，委托诺禾致源生物科技有限公司进行16S rRNA 基因高通量测序工作。
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依据文献所述方法[10-11]，末次给药1 h后结束实验，解剖小鼠，取5 cm小肠用生理盐水轻轻冲洗，固定于10%甲醛溶液中，进行梯度酒精脱水、石蜡包埋、组织切片制备、HE染色及中性树胶封片，至光学显微镜下观察小肠组织各部分结构。
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数据分析采用SPSS 22.0 统计软件，计量资料以均数±标准差(
$ \bar x \pm s $ )表示，多组比较用单因素方差分析，两两比较用 LSD-t 检验，P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异极显著。 -
由图1可知，正常组小鼠体重整个实验中一直呈增长趋势，但随着饲养时间增长，增长幅度变小；其余组小鼠在给予高脂高糖饲料一周后体质量下降，随后呈上升趋势分别增长26%、29%、32%和36%，而正常组增长率约为20%，第6周一次性注射STZ后，小鼠体重均急速下降，模型组小鼠体重下降5.31%，黄精多糖高、中、低剂量组分别下降7.85%、7.91%和6.18%，如图2；模型组给予生理盐水灌胃，继续添加高脂高糖饲料饲养，体重呈缓慢增长趋势，给药组分别以高、中、低剂量黄精多糖给予灌胃，继续喂养高脂高糖饲料，各组小鼠体重分别增加14.24%、11.97%、8.78%，如图3。由此可见，糖尿病影响小鼠体重变化，灌胃黄精多糖溶液后，各组小鼠体重均有恢复，且高剂量效果明显。
图 1 小鼠体重变化情况(
$ \overline{x}\pm s $ , n=10)
图 2 造模前后小鼠体重变化(
$ \bar x \pm s $ , n=10)
图 3 给药后各组小鼠体重变化(
$ \overline{x}\pm s $ , n=10) -
实验过程中，给予充足的饮水和饲料，正常对照组小鼠活动正常，精神状态良好，色泽光亮，粪便呈浅墨绿色；模型组小鼠给予高脂高糖饲料第一周食欲下降，体重减轻，注射STZ后体重下降，表现不活泼、精神状态不好，竖毛，尿液呈深黄色，粪便呈黄棕色。黄精多糖组小鼠灌胃相应剂量后精神、饮食活动改善，尿液颜色变淡等，说明黄精多糖可以改善糖尿病小鼠的不良症状。结果表明，可能是STZ与高脂高糖饮食联合，破坏胰腺组织β细胞，并致胰岛素分泌发生不足，进而使体内糖代谢絮乱，发生胰岛素抵抗 [11-12]。
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如表1所示，建模前血糖无显著差异(P>0.05)，建模成功后的7 d和14 d时，与正常对照组相比，模型组小鼠血糖极显著升高(P<0.01)；与模型组相比，黄精多糖各剂量组均无显著差异(P>0.05)。在21 d时，与正常对照组相比，模型组差异极显著(P<0.01) ；与模型组相比，黄精多糖低剂量和中剂量组无显著差异(P>0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P<0.01)。在28 d时，与正常对照组相比，模型组差异极显著(P<0.01)；与模型组相比，黄精多糖各剂量组小鼠血糖值均降低，差异极显著(P<0.01)。
表 1 黄精多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响(
$ \overline{x}\pm s $ , n=10)组别 血糖含量 建模前 建模后7 d 建模后14 d 建模后21 d 建模后28 d 正常组 5.67±0.33 5.95±0.24 5.95±0.21 5.97±0.22 5.99±0.24 模型组 5.6±0.43 15.85±0.28** 15.79±0.15** 15.59±0.16** 15.25±0.13** 黄精多糖低剂量组 5.76±0.36 15.88±0.40 15.45±0.18 14.75±0.11 13.77±0.11## 黄精多糖中剂量组 5.44±0.25 15.86±0.23 14.7±0.11 13.69±0.16 12.32±0.12## 黄精多糖高剂量组 5.57±0.29 15.85±0.21 13.81±0.10 12.3±0.16## 11.63±0.36## *P<0.05、**P<0.01，与正常对照组比较；#P<0.05、##P<0.01，与模型对照组比较 -
小鼠小肠病理组织切片HE染色结果显示，正常组小鼠小肠绒毛较长，结构完整，排列整齐；模型组小鼠小肠绒毛明显缩短，小肠绒毛断裂不完整，排列不紧密，与正常组比较差异显著；黄精多糖各剂量组小鼠小肠呈明显恢复状态，绒毛增长，排列较整齐，效果随黄精多糖剂量升高而表现明显，见图4。
图 4 小肠组织HE染色切片(×100)
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生物信息学分析结果表明，肠道微生物组成丰富，如图5，健康组和黄精多糖灌胃组中厚壁菌门和拟杆菌门丰富，而这两种菌是人类肠道内的优势有益菌，对人体健康起着重要作用，而糖尿病模型组中疣微菌门增多，这种菌可能会损害子代的消化和代谢能力，糖尿病造成了肠道菌群的紊乱。由此可推测，黄精多糖可以调节小鼠肠道微生物组成，增加有益菌丰富度，从而保护肠道。
图 5 肠道微生物影响
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糖尿病动物模型可通过高脂高糖饲料饲养和注射链脲佐菌素等多种方法制备，复制成功率高。本实验中发现，小鼠对高脂高糖饲料有一段过渡期，一开始饲喂高脂高糖饲料会影响小鼠食欲，导致体重下降，后体重迅速增长，小鼠肥胖，肥胖高脂的小鼠更容易患糖尿病。黄精多糖是中药材黄精的主要活性成分，已被证实具有治疗糖尿病的作用。黄精多糖可通过多种保护机制对糖尿病动物的各器官进行保护[13]，但目前以肠组织为靶点的研究很少，且随着黄精属药用植物的广泛应用以及价格不断上涨，出现混用、滥用现象，黄精的临床规范应用受到一定程度的限制。黄精多糖可显著改善老龄鼠肠组织病理状态[14]，本实验结果证实，黄精多糖可降低糖尿病小鼠血糖，恢复糖尿病小鼠代谢能力，改善其小肠绒毛排序结构，对肠道黏膜免疫功能可能存在一定作用，但目前未作进一步研究。肠道结构是肠道屏障功能的一部分，肠道微生物是影响代谢性疾病的关键因素，改变肠道微生物的群落结构，会引起代谢功能紊乱，肠道菌群与糖尿病存在密切关系，调节肠道菌群可以在一定程度上缓解患者症状，减轻黏膜炎症，有实验证明通过服用蜂胶、蒲公英、党参等，可调节小鼠肠道微生物，从而改善其肠道屏障功能[15-16]。肠道微生物区系组成的调节方法可能有助于糖尿病的治疗[17]，本研究结果提示，糖尿病模型组中疣微菌门增多，可能会损害子代的消化和代谢能力，而健康组和黄精多糖灌胃组中厚壁菌门和拟杆菌门丰富，而这两种菌是人类肠道内的优势有益菌，且黄精多糖可调节肥胖小鼠的肠道菌群[18-19]，这为进一步将肠道微生物和肠道免疫调控作为预防和治疗糖尿病的靶点提供理论基础，对临床治疗具有重要指导意义，为中药材黄精在糖尿病患者饮食辅助的治疗应用中提供重要的参考价值。
Study on hypoglycemic effect and intestinal effect of Polygonatum sibiricum polysaccharides in diabetic mice
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摘要:
目的 研究黄精多糖对2型糖尿病小鼠降血糖作用及其对肠道菌群和小肠病理结构的影响。 方法 雄性小鼠50只，除10只正常饲养外，其余以高脂高糖饲料喂养6周，腹腔注射链脲佐菌素制备2型糖尿病小鼠模型，建模成功后随机分为4组：模型组、黄精多糖高、中、低(500、250、125 mg/kg)组，模型组小鼠给予生理盐水。记录各组小鼠体重和血糖值变化。4周后，收集粪便，进行16S rRNA高通量测序，HE染色观察小肠组织病理结构变化。 结果 小鼠在糖尿病状态下体重下降，给予黄精多糖高、中、低剂量后小鼠体重分别增加14.24%、11.97%和8.78%，血糖值分别降低26.6%、22.3%和13.3%。此外，小肠病理组织学排列错乱和肿胀现象有所改善。模型组和黄精多糖组之间的肠道微生物存在显著差异，模型组中疣微菌门显著增多，而健康组和黄精多糖灌胃组中厚壁菌门和拟杆菌门的微生物丰度更高。 结论 黄精多糖对糖尿病小鼠具有显著的降血糖作用，且对其肠道具有一定保护作用，其机制可能通过增加有益菌丰富度，提高小鼠免疫功能来实现的，且呈一定剂量效应关系，其免疫功能有待进一步研究。 Abstract:Objective To study the hypoglycemic effect of Polygonatum sibiricum polysaccharides on type 2 diabetic mice and its effects on intestinal flora and pathological structure of small intestine. Methods Fifty male mice were used, except 10 were fed normally, the others were fed with high-fat and high-sugar diet for 6 weeks, and then injected with streptozotocin intraperitoneally to make type 2 diabetes mice model. After successful modeling, they were randomly divided into model group and Polygonatum sibiricum polysaccharides (500, 250, 125 mg/kg) group and the model group mice were given normal saline. The changes of bodyweight and blood glucose of mice in each group were recorded. After 4 weeks, feces were collected and sequenced by a 16S rRNA high-throughput sequencing, and the pathological changes of small intestine were observed by HE staining. Results In diabetic mice, the weight decreased. After given Polygonatum sibiricum polysaccharides, the weight of mice increased by 14.24%,11.97% and 8.78%, and the blood glucose decreased by 26.6%, 22.3% and 13.3%, respectively after high, medium and low doses of Polygonatum sibiricum polysaccharides were administered. In addition, the pathological disorder and swelling of intestinal histopathology were improved. There were significant differences in intestinal microorganisms between the model group and the Polygonatum sibiricum polysaccharides. Verrucomicrobiae in the model group increased significantly, while the microorganism abundance of Firmicutes and Bacteroidetes in the healthy group and Polygonatum sibiricum polysaccharides group was higher. Conclusion Polygonatum sibiricum polysaccharides has a significant hypoglycemic effect on diabetic mice and a certain protective effect on their intestines, the mechanism may be achieved by increasing the richness of beneficial bacteria and improving the immune function of mice, it’s in a certain dose-effect relationship, and its immune function needs further study. -
骨质疏松性椎体压缩骨折（OVCF）属于脊柱骨折，多发于中老年人，为临床最为常见的骨质疏松性骨折之一，严重影响患者脊柱功能、日常活动能力等，且发病率、致残、致死率均较高。现阶段，临床多以经皮椎体成形术（PVP）对OVCF患者进行治疗，临床疗效确切，可迅速缓解骨折引起的疼痛，促进椎体形态和功能恢复，但其对患者骨质疏松程度及骨质疏松引起的疼痛改善效果欠佳，故临床倡导PVP术后予以适当的干预以改善手术效果[1]。西医临床常用药物为碳酸钙D3，但有研究[2]指出其对部分患者的干预效果较差，临床多与中医药物干预、锻炼等相结合对PVP术后OVCF患者进行治疗。中医学认为，OVCF属“骨痿”范畴，主要病机为肾精不足、气滞血瘀所致骨质枯槁，肝肾阴虚证为其主要证型之一，应治以滋补肝肾，填精壮骨[3]。中药膏方含阿胶、枸杞子、鸡血藤、党参等，根据临床中药机制可见其有补肾填精、益气健脾、通络止痛等功效，但其对PVP术后OVCF患者的疗效及机制尚未完全明确[4]。故设立本研究，以120例于我院行PVP治疗的OVCF患者为研究对象进行前瞻性随机对照研究，旨在进一步观察中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF患者的疗效，为其临床应用提供参考。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
前瞻性选取120例2016年1月至2017年9月于我院行PVP治疗的OVCF患者为研究对象，患者均知情同意，按随机数字表法将其分为观察组（60例），对照组（60例）。本研究经我院医学研究伦理研究委员会审核通过。观察组：男35例，女25例；年龄50~80岁，平均（66.27±2.15）岁；体质量指数（BMI）19~25 kg/m2，平均（22.35±0.41）kg/m2；骨质疏松病程1~5年，平均（2.51±0.22）年；骨折病程1~3周，平均（1.55±0.12）周；骨压缩程度[5]：轻度16例，中度30例，重度14例。对照组：男33例，女27例；年龄51~78岁，平均（66.18±2.20）岁；BMI 19~25 kg/m2，平均（22.41±0.42）kg/m2；骨质疏松病程1~5年，平均（2.48±0.20）年；骨折病程1~3周，平均（1.52±0.13）周；骨压缩程度：轻度15例，中度29例，重度16例。两组性别、年龄、BMI、骨质疏松病程、骨折病程、压缩程度等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 纳入标准
①中医诊断符合《中医药防治原发性骨质疏松症专家共识（2015）》[6]中肝肾阴虚证相关辩证标准，西医诊断符合《骨质疏松性骨折诊疗指南》[7]中OVCF相关诊断标准，并经临床检查确诊者；②均为胸腰椎骨折，且是首次因OVCF就诊者；③无PVP相关禁忌，手术成功，且术后生命体征平稳者；④近3个月内未行特殊的抗骨质疏松治疗，同期未接受其他治疗者；⑤无脊髓损伤或神经根症状者等。
1.3 排除标准
①椎体爆裂性骨折、陈旧性胸腰椎压缩性骨折或肿瘤、感染等所致病理骨折者；②脊柱结核、骨肿瘤者；③继发性骨质疏松者；④精神障碍、认知能力或沟通能力障碍者；⑤伴严重器官障碍、急性腰扭伤、骨瘤骨转移、强直型脊柱炎、四肢新鲜骨折、软组织损伤者等。
1.4 方法
对照组予以碳酸钙D3咀嚼片[重庆海默尼制药有限公司，国药准字H20205039，碳酸钙1.25 g（相当于钙0.50 g）、维生素D3 200 IU]口服，每次1片，每日2次。同时指导患者每天摄入适量豆类、瘦肉、牛奶、鱼类等优质蛋白（1.20~1.40 g/kg），进行适当的日光浴及行走锻炼（30 min以上）。
观察组在对照组基础上予以中药膏方（将阿胶、枸杞子、鸡血藤、党参各200 g，鹿角胶、茯苓、桑寄生、熟地黄、牛膝、丹参、威灵仙各150 g，龟板胶、白术、骨碎补、神曲各100 g，炙甘草60 g制成膏剂后即得）口服，开水调服，每次10 g，每日2次。同时指导患者进行八段锦锻炼，所用方法为改良八段锦第八式：躯体直立，两足平行分开（与肩同宽），两手臂自然下垂，手指稍并拢，掌指向前，两膝关节屈曲135°~170°；两眼平视前方，微张口，平稳呼吸，全身放松2 min，紧接着保持原来体位尽可能屈膝下蹲，然后在双上臂伸直情况下慢慢上举到水平，慢慢随之站起（保持躯体直立下），至身体直立时顺势将两脚跟向上提起（期间慢慢匀速吸气到最满并憋气），停顿10~15 s；两脚跟下落着地，双手臂随之顺势下落，回到膝关节屈曲位（期间慢慢匀速呼气）；每次7个循环，每日3次。两组均治疗6个月，并随访3年。
1.5 观察指标
1.5.1 疗效
根据《中药新药临床研究指导原则》[8]可将两组治疗6个月后的疗效分为临床治愈（腰部功能完全恢复，临床症状、体征完全消失，X射线可见压缩椎体恢复正常状态），显效（腰部功能没有完全恢复，临床症状、体征基本消失，X射线可见压缩椎体恢复正常状态），有效（腰部功能没有完全恢复，临床症状、体征减轻，X射线可见大量骨痂形成，但未完全愈合），无效（腰部功能有改善，临床症状、体征有减轻，但X射线可见几乎无骨痂形成）。临床治愈率=临床治愈例数/总例数；显效率=显效例数/总例数；有效率=有效例数/总例数；无效率=无效例数/总例数。总有效率=（临床治愈+显效+有效）例数/总例数。
1.5.2 不同时点腰背疼痛情况
以疼痛视觉模拟评分法（VAS，0~10分）[9]评估两组治疗1、3、6个月的腰背疼痛情况，得分越高提示患者腰背疼痛程度越严重。
1.5.3 骨密度（BMD）、椎体后凸角度（Cobb角）及椎体前壁高度（AVBH）变化情况
以BMD测定仪（QDR 4500C，美国Hologic公司）检测两组治疗前、治疗6个月后的腰椎、股骨颈BMD；以X射线检查两组治疗前、治疗6个月后的Cobb角、AVBH。
1.5.4 骨代谢指标
抽取两组治疗前、治疗6个月后的晨起空腹静脉血3 ml，离心机3 000 r/min离心15 min，分离血清，以全自动电化学发光分析仪（罗氏Cobas e601，北京东方迈润医疗器械有限公司）检测血清I型原胶原降解产物（β-Cross I）、N端中段骨钙素（N-MID Ost）、甲状旁腺素（PTH）水平。
1.5.5 PVP术后推体再骨折发生率
记录两组随访时间及随访1年内、1~3年内PVP术后推体再骨折发生率，同1例患者发生多次再骨折仅算1例。
1.6 统计学方法
数据采用SPSS 21.0（IBM公司，美国）统计学软件进行分析，计量资料采用（
$\bar x $ ±s）表示，组内比较使用配对t检验，治疗前、治疗6个月后的比较使用独立样本t检验，多组间比较采用F检验；计数资料采用[n(%)]表示，使用χ2检验进行比较。2. 结果
2.1 两组患者临床疗效比较
治疗6个月后，观察组临床治愈率为73.33%，高于对照组的53.33%（P<0.05）；而两组显效率、有效率、无效率、总有效率比较差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
表 1 两组患者临床疗效比较[n(%)]组别 例数 临床治愈率 显效率 有效率 无效率 总有效率 观察组 60 44(73.33) 13(21.67) 3(5.00) 0(0.00) 60(100.00) 对照组 60 32(53.33) 20(33.33) 8(13.33) 0(0.00) 60(100.00) χ2 5.167 2.048 2.502 P <0.05 >0.05 >0.05 2.2 两组患者不同时点腰背疼痛情况比较
治疗前，两组患者VAS评分比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗3、6个月后两组VAS评分均降低，且观察组低于对照组（P<0.05）；与治疗3个月后比较，治疗6个月后，两组VAS评分均降低（P<0.05，表2）。
表 2 两组患者不同时点腰背疼痛情况比较（$\bar x $ ±s，分）组别 例数 治疗前 治疗3个月后 治疗6个月后 观察组 60 7.55±0.37 2.47±0.33* 1.14±0.23** 对照组 60 7.52±0.35 3.51±0.51* 2.36±0.42** t 0.456 13.262 19.735 P >0.05 <0.05 <0.05 *P<0.05，与治疗前比较；**P<0.05，与治疗3个月后比较 2.3 两组患者BMD、Cobb角及AVBH变化情况比较
治疗前，两组患者BMD、Cobb角及AVBH比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗6个月后两组腰椎、股骨颈BMD及AVBH均升高，且观察组高于对照组（P<0.05）；而两组Cobb角均降低，且观察组低于对照组（P<0.05，表3）。
表 3 两组患者BMD、Cobb角及AVBH变化情况比较（$\bar x $ ±s）时间 组别 例数 腰椎BMD(g/cm3) 股骨颈BMD(g/cm3) Cobb角(°) AVBH(%) 治疗前 观察组 60 0.70±0.07 0.68±0.06 23.09±2.51 53.93±7.26 对照组 60 0.69±0.08 0.67±0.07 23.11±2.49 54.04±7.44 t 0.729 0.840 0.044 0.082 治疗6个月后 观察组 60 0.93±0.08* 0.93±0.07* 6.47±1.98* 96.56±9.41* 对照组 60 0.84±0.11* 0.85±0.08* 8.91±2.26* 85.73±8.04* t 5.125 5.829 6.290 6.778 *P<0.05，与治疗前比较 2.4 两组患者骨代谢指标比较
治疗前，两组患者血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与治疗前比较，治疗6个月后，两组血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平均降低，且观察组低于对照组（P<0.05，表4）。
表 4 两组患者骨代谢指标比较（$\bar x $ ±s）时间 组别 例数 β-Cross I(ng/ml) N-MID Ost(ng/ml) PTH(pg/ml) 治疗前 观察组 60 0.79±0.13 42.10±9.53 62.28±9.42 对照组 60 0.78±0.14 41.98±9.52 62.25±9.39 t 0.405 0.069 0.017 治疗6个月后 观察组 60 0.67±0.10* 36.15±5.46* 52.47±4.02* 对照组 60 0.73±0.12* 38.93±6.14* 57.45±5.72* t 2.975 2.621 5.518 *P<0.05，与治疗前比较 2.5 两组患者PVP术后推体再骨折发生率比较
两组患者随访时间、随访1年内、1~3年内PVP术后推体再骨折发生率比较，均无统计学意义（P>0.05）；随访3年内，观察组PVP术后推体再骨折发生率为3.33%，低于对照组的20.00%（P<0.05，表5）。
表 5 两组患者PVP术后推体再骨折发生率比较组别 例数 随访1年内发生率
[n(%)]随访1~3年内 合计
[n(%)]随访时间
($\bar x $±s, 年)发生率
[n(%)]观察组 60 2(3.33) 1.94±0.43 0(0.00) 2(3.33) 对照组 60 7(11.67) 1.86±0.72 5(8.33) 12(20.00) t/χ2 3.003 0.739 3.339 8.086 P >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 3. 讨论
骨质疏松为临床常见的慢性骨代谢异常疾病，可见骨钙含量减少、骨量下降，极易出现骨折，OVCF为其临床常见类型。OVCF发病后可致患者出现椎体高度下降、疼痛、功能障碍等，未得到及时有效的治疗，可致残、致死，且其再发骨折风险高[10]。现阶段，微创PVP治疗为大多保守治疗无效的OVCF患者的主要选择，可恢复椎体力学强度、稳定骨折，但骨转换率及骨量流失未能纠正，且手术造成的内外骨膜血管损伤及制动可能会加重骨质疏松而影响患者预后[11]。故PVP术后予以适当的干预治疗至关重要，临床常用药物为碳酸钙D3，其可促进骨质形成而缓解骨质疏松程度，但其多偏重于抑制骨吸收，减轻骨质流失。近年来，越来越多的研究[12-13]发现，中医药治疗PVP术后OVCF有一定成效，其既能抑制流失，又能促进成骨形成，在抗骨质疏松、促进骨折愈合、防治再骨折发生等方面优势明显，现已备受临床医生青睐，但关于何种药物更佳尚无统一定论。
中医认为OVCF属“骨枯”、“骨萎”、“痹证”等范畴，肾中精气是骨生长发育的根本，脾胃为后天之本，气血生化之源，故其发病机制主要为肾精亏虚、脾精不足所致骨骼失养；外伤导致筋脉损伤、气血运行不畅，加之患者湿热寒邪侵袭、肾脾虚亏，容易加重气滞血瘀症状，使得骨骼和筋骨失去濡养，导致骨关节萎缩、活动不利等而诱发OVCF，故治疗应补肾壮骨、活血行气、舒经通络、消肿止痛[14]。中药膏方中的阿胶、枸杞子、鹿角胶、龟板胶可补血益气、填精益髓，其中，龟鹿二仙胶中鹿角胶、龟板胶为主方，与党参、枸杞子配伍可增强益气养阴、补肾填精益髓之功；鸡血藤可活血补血、舒筋活络、疏风止痛；党参可补中益气、生血行血；茯苓可利水消肿、益气健脾；桑寄生、熟地黄、骨碎补、牛膝可补肾壮骨；丹参、威灵仙、神曲可健脾和胃、消食调中，进而减轻膏方的厚腻；炙甘草可补脾和胃，益气复脉，同时调和诸药；全方可发挥补肾填精、益气健脾、通络止痛之功效[15-16]。同时八段锦作为一种由八节不同动作组成的一套医疗、康复体操，其通过人体垂直方向的应力刺激成骨、下蹲平衡锻炼、膀胱经的经气疏通等可对OVCF患者产生舒筋活络的良好功效，进而有助于促进患者腰部功能恢复，提高患者临床疗效。本研究显示，治疗6个月后，观察组临床治愈率高于对照组，且治疗3、6个月后VAS评分低于对照组，进一步说明中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可有效缓解患者腰背疼痛，疗效显著。
OVCF的发生发展与骨代谢及转换密切相关，其中，β-Cross I为骨吸收的重要指标，N-MID Ost为骨形成、骨转换的重要指标，可直接反映成骨细胞的活性与数量变化，PTH则可加速骨代谢活跃，促进骨吸收，血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平升高提示患者骨转换成程度严重，可促进病情进展，不利于PVP术后腰部功能的恢复[17]。本研究显示，治疗6个月后，观察组腰椎、股骨颈BMD及AVBH高于对照组，Cobb角、血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH低于对照组，且随访3年内PVP术后推体再骨折发生率低于对照组，提示中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可调节患者机体骨代谢，提高腰椎、股骨颈BMD及AVBH，降低Cobb角，促进腰部功能的恢复，降低PVP术后推体再骨折发生率。PVP术后OVCF患者骨折愈合的本质为骨重建，该过程涉及局部微环境的构建、成骨细胞的活化、大量血管的生成等，而现代药理学研究[18-20]指出，中药膏方中的骨碎补含双氢黄酮苷、黄酮等成分，可提高BMD，刺激成骨细胞增殖分化，防止骨吸收、促进骨形成，发挥抗骨质疏松、促进骨折愈合等作用，进而促进腰部功能的恢复；牛膝含牛膝竹节参皂苷，可发挥较好的抗炎、止痛、改善微循环作用，有助于促进局部微环境的构建而促进患者骨折愈合，进而降低再骨折发生率。同时联合八段锦进行治疗，可有效疏通OVCF患者经络，促进机体气血运行通畅，进而可增强中药膏方促进患者腰部功能恢复的作用，降低患者PVP术后推体再骨折发生率。而对照组由于仅进行常规对症治疗，而未对患者采取中药膏方联合八段锦等治疗，故患者复发的风险明显增加。
综上，中药膏方联合八段锦治疗PVP术后OVCF可降低其血清β-Cross I、N-MID Ost、PTH水平，调节机体骨代谢，有助于提高腰椎、股骨颈BMD及AVBH，降低Cobb角，促进腰部功能的恢复，进而缓解患者腰背疼痛，降低PVP术后推体再骨折发生率，疗效显著。
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图 3 给药后各组小鼠体重变化(
$ \overline{x}\pm s $ , n=10)a.正常组；b.模型组；c.黄精多糖低剂量组；d.黄精多糖中剂量组；e.黄精多糖高剂量组
图 5 肠道微生物影响
C.糖尿病组；H.健康组；CA1.黄精多糖低剂量组；CA2.黄精多糖中剂量组；CA3.黄精多糖高剂量组注：线性判别分析评分(LDA SCORE)的阈值，默认设置为4
表 1 黄精多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响(
$ \overline{x}\pm s $ , n=10)组别 血糖含量 建模前 建模后7 d 建模后14 d 建模后21 d 建模后28 d 正常组 5.67±0.33 5.95±0.24 5.95±0.21 5.97±0.22 5.99±0.24 模型组 5.6±0.43 15.85±0.28** 15.79±0.15** 15.59±0.16** 15.25±0.13** 黄精多糖低剂量组 5.76±0.36 15.88±0.40 15.45±0.18 14.75±0.11 13.77±0.11## 黄精多糖中剂量组 5.44±0.25 15.86±0.23 14.7±0.11 13.69±0.16 12.32±0.12## 黄精多糖高剂量组 5.57±0.29 15.85±0.21 13.81±0.10 12.3±0.16## 11.63±0.36## *P<0.05、**P<0.01，与正常对照组比较；#P<0.05、##P<0.01，与模型对照组比较 
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