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鼻渊净胶囊为纯中药内服制剂[批准文号：总制字（2016）F405004]，由苍耳子、辛夷、连翘、白芷、羌活、野菊花等六味中药组成，具有散风消炎、宣通鼻窍、稀化鼻窦与气管粘稠分泌物的功效，主要用于鼻渊的治疗。由于该制剂原有质量标准制定年代久远，质量控制仅有白芷一味药材的薄层鉴别，主要药味均无含量测定项，不能较好地反映制剂质量，本课题组前期对其原有的工艺参数进行了优选[1]，并进行了质量标准研究。新的质量标准增加了辛夷、连翘、羌活、野菊花四味药的薄层定性鉴别，并建立了辛夷中木兰脂素、连翘中连翘苷、白芷和羌活中欧前胡素、野菊花中蒙花苷等主要成分的HPLC含量测定[2]，本研究在此基础上，建立了鼻渊净胶囊的HPLC指纹图谱，拟从多成分角度对其质量进行全面控制，进一步保证制剂的质量均一和临床用药安全。
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Agilent 1260高效液相色谱仪，含G1329A自动进样器、G4212B DAD检测器（美国，Agilent公司）；JM-B2102型电子天平（余姚市纪铭称重校验设备有限公司）；FA1605型电子天平（上海横平仪表厂）；KH-100B型超声波清洗器（昆山和创超声仪器有限公司)。
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10个批次(标记为S1～S10)的鼻渊净胶囊样品（批号：150901、150902、150904、150905、150910、150913、150916、150920、150921、150923，本院制剂室自制）；连翘苷（批号：110753-201314）、蒙花苷（批号：110805-200508）、木兰脂素（批号：110780-201007）、欧前胡素（批号：111730-201307）、异欧前胡素（批号：111640-201005）等对照品，购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯；水为自制纯水；其他试剂均为国产分析纯。
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取鼻渊净胶囊内容物适量，研碎，精密称取粉末约1 g置于具塞锥形瓶中，加入甲醇20 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，冷却，加甲醇补足损失重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
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分别取紫花前胡苷、连翘苷、蒙花苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素对照品各10 mg，精密称定，分别置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密量取1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
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分别取野菊花、连翘、苍耳子、辛夷、羌活、白芷单味药材适量，按照鼻渊净胶囊的制备方法及供试品溶液的制备方法，制备各单味药的样品溶液。
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色谱柱：Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈(A)-水(B)梯度洗脱：0～5 min，20% A；5～15 min，20%～30% A；15～35 min，30%～40% A；35～50 min，40%～50% A；50～70 min，50%～55% A；70～80 min，55% A；流速：1.0 ml/min；检测波长210 nm；进样量10 μl。
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精密度试验：取鼻渊净胶囊S1号样品（批号：150901）胶囊内容物，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，用“2.2.1”项下的色谱条件测定，连续进样6次，记录指纹图谱，以峰9为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。
重复性试验：取鼻渊净胶囊S1号样品（批号：150901）胶囊内容物，共6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，用“2.2.1”项下色谱条件测定，记录各共有峰的保留时间和峰面积，以峰9为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。
稳定性试验：取同一S1号样品（批号：150901）的供试品溶液，分别在0、2、4、8、12 h依法进样测定，以峰9为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。
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取鼻渊净胶囊S1～S10号共10批样品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，用“2.2.1”项下色谱条件测定，将图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”进行分析。
根据10批供试品溶液的色谱峰生成参照图谱，选择参照图谱中峰面积大于500且分离度较好的峰为共有指纹峰，分析确定鼻渊净胶囊的共有指纹峰。
釆用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》评价10批鼻渊净胶囊的图谱的相似性，并进行综合评价。
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精密度试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.62%，平均相对峰面积的RSD为1.17%，在该方法下的精密度良好；重复性试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.29%，平均相对峰面积的RSD为1.15%，在该方法下重复性良好；稳定性试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.90%、平均相对峰面积的RSD为1.10%，样品在12 h内稳定。
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以批号150901（S1）的指纹图谱作为参照谱，多点校正，采用中位数法生成对照指纹图谱，结果见图1。
图 1 10批样品的HPLC特征图谱叠加图
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分析结果确定鼻渊净胶囊有20个共有指纹峰，其中峰9为鼻渊净胶囊的指标成分木兰脂素，该峰吸收信号最强、保留时间适中，峰形较好且稳定，故将其作为参照峰。鼻渊净胶囊指纹图谱见图2。
图 2 鼻渊净胶囊HPLC指纹图谱
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比较10批鼻渊净胶囊的色谱图，以木兰脂素峰（峰9）的保留时间和色谱峰面积为1，分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表1和表2。
表 1 10批次鼻渊净胶囊指纹图谱共有峰的相对保留时间
峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.135 0.145 0.140 0.138 0.138 0.138 0.139 0.138 0.145 0.146 2 0.238 0.238 0.239 0.237 0.239 0.239 0.240 0.238 0.238 0.238 3 0.371 0.370 0.371 0.376 0.371 0.371 0.372 0.371 0.371 0.371 4 0.409 0.408 0.409 0.409 0.409 0.409 0.411 0.409 0.410 0.409 5 0.430 0.430 0.431 0.430 0.431 0.430 0.432 0.430 0.431 0.431 6 0.520 0.520 0.521 0.520 0.521 0.520 0.522 0.520 0.521 0.521 7 0.801 0.801 0.802 0.801 0.801 0.801 0.800 0.801 0.800 0.801 8 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.952 0.953 0.952 0.953 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 11 1.094 1.093 1.094 1.107 1.093 1.094 1.095 1.094 1.094 1.094 12 1.158 1.157 1.157 1.157 1.157 1.157 1.159 1.158 1.158 1.158 13 1.200 1.200 1.200 1.199 1.199 1.199 1.201 1.199 1.201 1.200 14 1.238 1.237 1.237 1.238 1.237 1.237 1.237 1.237 1.239 1.238 15 1.345 1.344 1.344 1.345 1.341 1.344 1.346 1.344 1.347 1.345 16 1.510 1.509 1.509 1.509 1.509 1.509 − − 1.512 1.509 17 1.596 1.595 1.596 1.583 1.595 1.596 1.585 1.581 1.599 1.595 18 1.625 1.625 1.626 1.619 1.626 1.627 − − 1.628 1.624 19 1.684 1.683 1.684 1.684 1.683 1.684 − − 1.687 1.683 20 1.748 − 1.749 1.748 1.748 1.748 1.751 1.746 1.752 1.749 表 2 10批次鼻渊净胶囊指纹图谱共有峰的相对峰面积
峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.053 0.043 0.267 0.293 0.113 0.173 0.117 0.183 0.070 0.075 2 0.046 0.022 0.146 0.163 0.025 0.124 0.082 0.076 0.044 0.046 3 0.022 0.019 0.018 0.044 0.061 0.029 0.027 0.031 0.022 0.022 4 0.077 0.040 0.122 0.189 0.054 0.111 0.094 0.107 0.072 0.074 5 0.122 0.015 0.032 0.039 0.156 0.223 0.190 0.114 0.113 0.120 6 0.066 0.089 0.038 0.073 0.156 0.198 0.102 0.127 0.063 0.063 7 0.068 0.100 0.032 0.071 0.115 0.130 0.087 0.118 0.068 0.069 8 0.308 0.420 0.392 0.319 0.347 0.370 0.359 0.327 0.296 0.308 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 0.341 0.227 0.203 1.426 0.452 0.248 0.252 0.293 0.338 0.334 11 0.163 0.274 0.230 0.095 0.095 0.209 0.235 0.178 0.170 0.162 12 0.168 0.202 0.125 0.075 0.099 0.116 0.046 0.057 0.160 0.164 13 0.031 0.016 0.026 0.045 0.037 0.025 0.028 0.029 0.033 0.033 14 0.092 0.122 0.066 0.038 0.066 0.099 0.010 0.015 0.091 0.093 15 0.024 0.027 0.028 0.023 0.046 0.039 0.029 0.069 0.020 0.019 16 0.046 0.037 0.029 0.007 0.032 0.037 − − 0.046 0.046 17 0.224 0.290 0.203 0.333 0.150 0.201 0.074 0.120 0.220 0.220 18 0.046 0.053 0.033 0.018 0.019 0.036 − − 0.049 0.048 19 0.031 0.031 0.021 0.012 0.009 0.021 − − 0.033 0.031 20 0.183 − 0.083 0.232 0.040 0.117 0.235 0.337 0.174 0.1867 -
指纹相似度在0.9～1.0之间，各批次之间的相似性较强，说明鼻渊净胶囊的制备工艺及样品分析方法稳定可行，相似度结果见表3。
表 3 10批次鼻渊净胶囊HPLC指纹图谱相似度
样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照图谱 相似度 0.979 0.952 0.966 0.951 0.932 0.959 0.936 0.920 0.949 0.948 1.000 -
采用对照品对照法对共有峰进行确认，取“2.1”项下配制的各对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进行检测，在对照品溶液保留时间处，供试品溶液的色谱峰与对照品色谱峰的在线UV图一致，由此来判断共有峰化学成分的归属。通过此方法，判断4号峰为连翘苷，5号峰为蒙花苷，9号峰为木兰脂素，15号峰为欧前胡素，17号峰为异欧前胡素（见图3）。
图 3 鼻渊净胶囊与蒙花苷HPLC叠加图及蒙花苷的UV光谱图
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采用各单味药阳性对照试验，取“2.1”项下各单味药材溶液，按照“2.2.1”项下的色谱条件进行测定。通过比较各色谱峰的保留时间和UV光谱图，对鼻渊净胶囊样品中共有峰的来源进行追溯。结果表明，峰1、2、4、6、7来自连翘，峰5来自野菊花，峰8～13来自辛夷，峰15、17、20来自白芷，其中峰17、20为羌活和白芷的共有峰。
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在预实验中，曾尝试多种不同的溶剂系统作为流动相，分别考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸、乙腈-乙酸、乙腈-磷酸，发现选用甲醇-水时，基线总是漂移；选用乙腈-水时，乙腈比甲醇的洗脱效果更明显，且加入酸溶液并不能改善峰型、基线平稳，各峰的峰型和分离度均良好，故选择乙腈-水作为流动相。经过对供试品采用DAD检测器进行全波长扫描发现，在210 nm波长下供试品溶液图谱的信息量较多、各吸收峰强度较大，故最终选择210 nm作为鼻渊净胶囊HPLC指纹图谱的检测波长。
对中成药的评价需要全面方能准确反映制剂质量。本研究采用HPLC法，建立了以木兰脂素为参照物的鼻渊净胶囊的指纹图谱，标定了21个共有指纹峰，指认了5个成分，10批次样品指纹图谱整体的相似性结果在0.9以上。在此次建立的鼻渊净胶囊HPLC-UV指纹图谱中，苍耳子药材的特征性成分表达很少，可能是因为其特征性成分在该波长下紫外吸收较少，或者是受其他成分的影响未能表达，此不足考虑在以后的研究中运用液质联用技术对其成分进行分析与检测来弥补[21-22]，从而为鼻渊净胶囊的质量评价提供更全面可靠的依据。
Study on HPLC fingerprints of Biyuanjing capsules
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摘要:
目的 建立鼻渊净胶囊的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。 方法 采用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）色谱柱，乙腈-水为流动相、以1.0 ml/min流速行梯度洗脱，检测波长210 nm，柱温30 ℃，洗脱时间为80 min。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）对检测出色谱进行指纹图谱相似度评价。 结果 建立了鼻渊净胶囊的HPLC指纹图谱，确定了20个共有峰，15个峰归属到各药材，其中5个峰确认了化学成分；10批样品的指纹图谱的整体相似度与对照图谱比较，均在90%以上。 结论 所建立的鼻渊净胶囊指纹图谱有助于从整体上控制该制剂的质量。 Abstract:Objective To establish a HPLC fingerprints of Biyuanjing capsules. Methods The column was Agilent SB-C18(4.6mm×250 mm, 5 µm). The mobile phase was acetonitrile-water with gradient elution at a flow rate of 1.0 ml/min. The detection wavelength was 210 nm. The detection time was 80 min. Results The HPLC fingerprints of Biyuanjing capsules were established. Twenty common peaks were confirmed, of which, 15 peaks were belonging to each crude drug and 5 peaks were identified as chemical components. The overall similarity of the fingerprints of 10 batches of samples was above 90% comparing with the control. Conclusion This method can be used for the quality control of Biyuanjing capsules. -
Key words:
- Biyuanjing capsules /
- fingerprints /
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phillyr in / - linarin /
- magnolin /
- imperatorin /
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isoimperatorin
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图 3 鼻渊净胶囊与蒙花苷HPLC叠加图及蒙花苷的UV光谱图
A. 鼻渊净胶囊与蒙花苷HPLC叠加图（a.鼻渊净胶囊；b.蒙花苷对照品；）B. 蒙花苷对照品的UV图；C. 5号峰在鼻渊净胶囊中的UV图
表 1 10批次鼻渊净胶囊指纹图谱共有峰的相对保留时间
峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.135 0.145 0.140 0.138 0.138 0.138 0.139 0.138 0.145 0.146 2 0.238 0.238 0.239 0.237 0.239 0.239 0.240 0.238 0.238 0.238 3 0.371 0.370 0.371 0.376 0.371 0.371 0.372 0.371 0.371 0.371 4 0.409 0.408 0.409 0.409 0.409 0.409 0.411 0.409 0.410 0.409 5 0.430 0.430 0.431 0.430 0.431 0.430 0.432 0.430 0.431 0.431 6 0.520 0.520 0.521 0.520 0.521 0.520 0.522 0.520 0.521 0.521 7 0.801 0.801 0.802 0.801 0.801 0.801 0.800 0.801 0.800 0.801 8 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.952 0.953 0.952 0.953 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 11 1.094 1.093 1.094 1.107 1.093 1.094 1.095 1.094 1.094 1.094 12 1.158 1.157 1.157 1.157 1.157 1.157 1.159 1.158 1.158 1.158 13 1.200 1.200 1.200 1.199 1.199 1.199 1.201 1.199 1.201 1.200 14 1.238 1.237 1.237 1.238 1.237 1.237 1.237 1.237 1.239 1.238 15 1.345 1.344 1.344 1.345 1.341 1.344 1.346 1.344 1.347 1.345 16 1.510 1.509 1.509 1.509 1.509 1.509 − − 1.512 1.509 17 1.596 1.595 1.596 1.583 1.595 1.596 1.585 1.581 1.599 1.595 18 1.625 1.625 1.626 1.619 1.626 1.627 − − 1.628 1.624 19 1.684 1.683 1.684 1.684 1.683 1.684 − − 1.687 1.683 20 1.748 − 1.749 1.748 1.748 1.748 1.751 1.746 1.752 1.749 
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表 2 10批次鼻渊净胶囊指纹图谱共有峰的相对峰面积
峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.053 0.043 0.267 0.293 0.113 0.173 0.117 0.183 0.070 0.075 2 0.046 0.022 0.146 0.163 0.025 0.124 0.082 0.076 0.044 0.046 3 0.022 0.019 0.018 0.044 0.061 0.029 0.027 0.031 0.022 0.022 4 0.077 0.040 0.122 0.189 0.054 0.111 0.094 0.107 0.072 0.074 5 0.122 0.015 0.032 0.039 0.156 0.223 0.190 0.114 0.113 0.120 6 0.066 0.089 0.038 0.073 0.156 0.198 0.102 0.127 0.063 0.063 7 0.068 0.100 0.032 0.071 0.115 0.130 0.087 0.118 0.068 0.069 8 0.308 0.420 0.392 0.319 0.347 0.370 0.359 0.327 0.296 0.308 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 0.341 0.227 0.203 1.426 0.452 0.248 0.252 0.293 0.338 0.334 11 0.163 0.274 0.230 0.095 0.095 0.209 0.235 0.178 0.170 0.162 12 0.168 0.202 0.125 0.075 0.099 0.116 0.046 0.057 0.160 0.164 13 0.031 0.016 0.026 0.045 0.037 0.025 0.028 0.029 0.033 0.033 14 0.092 0.122 0.066 0.038 0.066 0.099 0.010 0.015 0.091 0.093 15 0.024 0.027 0.028 0.023 0.046 0.039 0.029 0.069 0.020 0.019 16 0.046 0.037 0.029 0.007 0.032 0.037 − − 0.046 0.046 17 0.224 0.290 0.203 0.333 0.150 0.201 0.074 0.120 0.220 0.220 18 0.046 0.053 0.033 0.018 0.019 0.036 − − 0.049 0.048 19 0.031 0.031 0.021 0.012 0.009 0.021 − − 0.033 0.031 20 0.183 − 0.083 0.232 0.040 0.117 0.235 0.337 0.174 0.1867
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表 3 10批次鼻渊净胶囊HPLC指纹图谱相似度
样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照图谱 相似度 0.979 0.952 0.966 0.951 0.932 0.959 0.936 0.920 0.949 0.948 1.000
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[1] 张玉杰, 李明春, 张华, 等. 正交设计法优化鼻渊净胶囊超临界CO2萃取工艺条件研究[J]. 中国医院药学杂志, 2016, 36(6):459-463. [2] 程艳芹, 陈延绅, 李明春. 鼻渊净胶囊的质量控制[J]. 药学服务与研究, 2018, 18(5):364-367. [3] 肖会敏, 何悦, 雷美娜, 等. 清脂胃舒佐餐茶HPLC法指纹图谱的研究及4个成分的含量测定[J]. 药学实践杂志, 2018, 36(4):324-328. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2018.04.008 [4] 陈根顺, 徐丽芳, 李鹏. 草珊瑚的HPLC指纹图谱研究[J]. 中草药, 2011, 42(2):293-296. [5] 沈丽霞, 付延伟, 纪松岗, 等. 基于检测波长切换技术的复方茵陈颗粒HPLC指纹图谱研究[J]. 中国药师, 2018, 21(10):1769-1775. doi: 10.3969/j.issn.1008-049X.2018.10.016 [6] 赵丽艳, 李明春, 石永坚, 等. 复方苦黄凝胶剂的HPLC指纹图谱研究[J]. 热带医学杂志, 2020, 20(7):907-911. doi: 10.3969/j.issn.1672-3619.2020.07.011 [7] 赵晶, 曹红, 邢俊波. 川参通注射液HPLC指纹图谱的研究[J]. 药学实践杂志, 2013, 31(2):137-139. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.02.016 [8] 张玉婷, 汪永忠, 姜辉, 等. 五味温通除痹胶囊的UPLC指纹图谱研究[J]. 现代中药研究与实践, 2019, 33(5):30-33. [9] 范建伟, 庄会芳, 李艳芳, 等. 茵栀黄颗粒的HPLC指纹图谱研究及共有峰归属分析[J]. 中国医院药学杂志, 2019, 39(13):1342-1346, 1352. [10] 罗晖明, 肖炳燚, 聂平, 等. 苍耳子药材的HPLC特征图谱研究[J]. 中国药师, 2018, 21(1):71-74. doi: 10.3969/j.issn.1008-049X.2018.01.017 [11] 王红霞, 张飞, 陈随清, 等. 中药辛夷的HPLC指纹图谱研究[J]. 中国实验方剂学杂志, 2011, 17(15):87-90. [12] 庄岩, 遆铁军, 霍金海, 等. 牛黄清感胶囊HPLC指纹图谱研究[J]. 中国中医药科技, 2019, 26(6):868-872. [13] 王月红, 游飞祥, 王磊, 等. 六经头痛片HPLC指纹图谱建立及多指标成分定量测定研究[J]. 中草药, 2017, 48(20):4167-4173. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2017.20.006 [14] 李英梅, 王东, 宋爽, 等. 羌活HPLC指纹图谱研究[J]. 辽宁中医药大学学报, 2013, 15(7):68-70. [15] 陈宁, 韩永成, 刘伟, 等. 野菊花的UPLC指纹图谱研究[J]. 中国实验方剂学杂志, 2014, 20(3):83-85. [16] 梁俊, 黄良永, 杨光义. 连翘配方颗粒高效液相色谱指纹图谱[J]. 医药导报, 2015, 34(7):946-949. doi: 10.3870/yydb.2015.07.028 [17] 王佳琪, 江宇勤, 罗婷, 等. 不同等级白芷饮片HPLC指纹图谱[J]. 中成药, 2019, 41(12):2964-2969. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2019.12.027 [18] 王林凤, 魏国玲. 九味羌活颗粒HPLC特征指纹图谱研究[J]. 中国药师, 2016, 19(10):1879-1882. doi: 10.3969/j.issn.1008-049X.2016.10.021 [19] 江洁怡, 胥爱丽, 李养学, 等. 白芷配方颗粒的指纹图谱研究[J]. 今日药学, 2017, 27(9):612-615, 638. doi: 10.12048/j.issn.1674-229X.2017.09.006 [20] 张远芳, 连云岚, 郝云芳, 等. 羌活与宽叶羌活的GC/HPLC指纹图谱研究[J]. 中国药事, 2019, 33(5):519-527. [21] 苏靖, 戴荣继. 液质联用技术在中药研究中的应用[J]. 生命科学仪器, 2014, 12(Z1):38-42. [22] 顾思佳, 肖畅, 周秋桂, 等. 健脾化湿解毒方的质量标准研究[J]. 湖北中医杂志, 2019, 41(8):3-6. -
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