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菊花为菊科植物菊花的干燥头状花序,是一种常见的药食两用的花卉,具有清热、明目、疏风、解毒之功效[1-2]。根据经典的记载,中国栽培菊花历史已有3000多年。汉朝《神农本草经》记载:“菊花久服能轻身延年”。现代药理学研究表明,菊花具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎以及保肝等作用[3-12],因此,常作为保健饮品服用。安徽黄山是菊花的重要产地,拥有黄山金丝皇菊、黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊等多个品种,其中皇菊的黄酮含量极高,富含多种氨基酸、维生素和微量硒元素,具有重要的药用价值;而道地黄山贡菊更是菊花中的上等品,“白边黄芯绿屁股”,处于四大药菊之首。本研究主要对以上四种菊化品种进行研究,对比其抗氧化及抗炎活性,为菊花抗氧化和抗炎品种的开发提供参考和借鉴。
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4种菊花(黄山金丝皇菊、黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊)来源于黄山市产品质量检验研究院;总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)、总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼试剂盒(DPPH法)购自Solarbio;双报告基因检测试剂盒购自Promega;LPS购自美国Sigma公司;SD大鼠,雄性,体重180~220g,购自上海斯莱克实验动物中心。
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4种不同菊花经粉碎机粉碎并过60目筛,各取100 g,加入1000 ml去离子水浸泡12 h,然后加热回流提取2 h,过滤去除滤渣,滤液用旋转蒸发仪(60 ℃)蒸发去除溶剂,然后经真空干燥彻底去除水分[13]。由于4种菊花水提物得率基本一致(约17%),因此后续用相同质量的水提物表征同等质量的菊花。
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将等体积的ABTS溶液和氧化剂溶液混合配置成ABTS工作母液,室温避光存放24 h。使用前,把ABTS工作液用PBS稀释30~50倍,要求ABTS工作液的吸光度减去相应的PBS空白对照后,A734为0.7±0.05,对应的A405在1.4左右。称取菊花粗提物粉末100 mg,用适量蒸馏水充分溶解。同时,用蒸馏水将10 mmol/L Trolox标准溶液稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5 mmol/L。于96孔板的每个检测孔中加入200 μl ABTS工作液,空白对照孔中加入10 μl蒸馏水;标准曲线检测孔中加入10 μl各浓度Trolox标准溶液;样品检测孔中加入10 μl样品溶液,轻轻混匀。室温孵育2~6 min后测定A734。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力[14]。
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将TPTZ稀释液与TPTZ溶液充分混匀再加入检测缓冲液,从而配制成FRAP工作液。称取菊花粗提物粉末100 mg,用适量蒸馏水充分溶解。称取27.8 mg本试剂盒提供的 FeSO4•7H2O,溶解并定容到1 ml,此时浓度即为100 mmol/L。取适量100 mmol/L FeSO4溶液用蒸馏水稀释至0.15、0.3、 0.6、 0.9、 1.2和1.5 mmol/L。于96孔板的每个检测孔中加入180 μl FRAP工作液,空白对照孔中加入5 μl蒸馏水;标准曲线检测孔中加入5 μl各浓度FeSO4标准溶液;样品检测孔中加入5 μl样品溶液,轻轻混匀。室温孵育2~6 min后测定A593。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力[14]。
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称取菊花粗提物粉末100 mg,用适量蒸馏水充分溶解。同时,用蒸馏水将10 mmol/L Trolox标准溶液稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5 mmol/L。于96孔板的每个检测孔中加入190 μl DPPH工作液,空白对照孔中加入10 μl蒸馏水;标准曲线检测孔中加入10 μl各浓度Trolox标准溶液;样品检测孔中加入10 μl样品溶液,混匀后室温避光静置30 min,测定A515。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力[14]。
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Raw264.7细胞以适当密度接种于96孔板,实验分别设置空白组、LPS刺激组和不同药物浓度处理组,每组分别设置3个复孔。细胞过夜贴壁,利用转染试剂共转染报告基因质粒pNF-κB-Luc 和pRL-SV40,转染6 h后换液。转染24 h后加药,药物孵育2 h后加入LPS(终浓度1 μg/ml)刺激6 h,双报告基因法检测NF-κB转录活性。
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取SD大鼠48只,随机分为6组,分别为空白组、模型组、菊花水提物给药组(2 g/ kg,相当于菊花11.76 g/kg)。各组大鼠连续灌胃给药3 d,模型组给予相同体积的生理盐水,第4天于每只大鼠右后足垫皮下注射1.0%角叉菜胶100 μl,致炎后灌胃给予相应药物,分别在致炎前和致炎后1、2、4 h,测量大鼠致炎侧足容积,计算足趾肿胀率和肿胀抑制率[15-16]。按下式计算小鼠足趾肿胀率和抑制率:肿胀率=(致炎后足趾体积-致炎前足趾体积)/致炎前足趾体积×100%, 抑制率= (模型组足趾肿胀率-给药组足趾肿胀率)/模型组足趾肿胀率×100%。
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数据以(
$\bar x $ ±s)表示,单因素方差分析(One way ANOVA)比较各组差异,以P<0.05为差异具有统计学意义。 -
ABTS、FRAP和DPPH线性方程以及相关系数见表1。
表 1 ABTS、FRAP、DPPH的线性方程及相关系数
项目 方程 相关系数 ABTS Y=0.662 4X+0.715 3 r=0.999 5 FRAP Y=0.298 5X+0.060 r=0.999 4 DPPH Y=0.459 8X−0.023 8 r=0.998 9 从表1可以看出,ABTS、FRAP以及DPPH测定方法具有很好的线性。
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ABTS法检测菊花水提物总抗氧化能力,结果显示,4种菊花的抗氧化能力存在明显差异,其中,黄山金丝皇菊抗氧化能力最强,为(0.481±0.052) mmol/g(总抗氧化能力用TEAC标准溶液表示),其次是黄山皇菊,为(0.402±0.043) mmol/g,然后依次是黄山贡菊(0.369±0.031)mmol/g和黄山黄菊(0.287±0.014)mmol/g。FRAP和DPPH检测以上四种菊花水提物抗氧化能力,结果与ABTS法类似,黄山金丝皇菊抗氧化能力最强,其次依次是黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。综上,可以得出结论:黄山金丝皇菊水提物抗氧化能力最强,其次是黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊(表2)。
表 2 4种菊花抗氧化能力
名称/抗氧化
能力FRAP(mmol FeSO4/g) ABTS(mmol Trolox/g) DPPH(mmol Trolox/g) 黄山金丝皇菊 0.504±0.049 0.481±0.052 0.359±0.025 黄山皇菊 0.421±0.036 0.402±0.043 0.305±0.033 黄山贡菊 0.347±0.028## 0.369±0.031 0.277±0.041# 黄山黄菊 0.270±0.017###,** 0.287±0.014## 0.208±0.019##,* *P<0.05,**P<0.01,与黄山皇菊比较;#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001,与黄山金丝皇菊比较。 -
利用双报告基因的方法检测4种菊花水提物对Raw264.7细胞 NF-κB转录活性的影响,结果显示4种菊花水提物均能够一定程度的抑制LPS诱导的NF-κB的转录活性。相同作用浓度下,黄山皇菊NF-κB抑制活性最强,其次依次是黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。结果表明黄山皇菊抗炎作用最强,其次是黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊(图1)。
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为了进一步确认4种菊花提取物的抗炎活性,我们构建了角叉菜胶致大鼠足肿胀模型。大鼠足趾肿胀率和肿胀抑制率如表3所示,1 h时间点,给予菊花水提物处理的各组大鼠足趾肿胀均低于模型对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2 h时间点,黄山皇菊和黄山金丝皇菊对足趾肿胀仍然具有抑制作用,而黄山贡菊和黄山黄菊抑制作用消失; 组间比较,黄山皇菊足趾肿胀抑制作用优于黄山贡菊和黄山黄菊(P<0.05)。4 h时间点,各组对足趾肿胀的抑制作用消失。综上结果表明,黄山皇菊的抗炎活性最好,其次是黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊,该结论与NF-κB报告基因结果一致。
表 3 角叉菜胶致大鼠急性炎症模型结果(x±s,n=8)
组别 1 h 2 h 4 h 肿胀率(%) 抑制率(%) 肿胀率(%) 抑制率(%) 肿胀率(%) 抑制率(%) 模型组 41.6±
4.5− 52.5±
10.7− 45.1±
8.2− 黄山金丝皇菊 31.5±
5.9#24.3 42.3±
7.1#19.5 44.9±
8.80.5 黄山皇菊 28.9±
5.9##30.6 38.9±
7.8#,*,ΔΔ26.0 46.4±
10.0−2.8 黄山贡菊 31.8±
6.3#23.7 50.0±
11.74.8 46.4±
8.3−2.8 黄山黄菊 33.3±
6.2#20.1 51.0±
7.32.9 44.9±
8.80.6 *P<0.05,与黄山贡菊比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型组比较;ΔΔP<0.01,与黄山黄菊比较。 -
本研究采用ABTS、FRAP和DPPH 这3种方法测定了4种黄山菊花水提物的抗氧化活性,并通过报告基因法和大鼠足肿胀模型评估了其抗炎活性。结果表明,4种菊花表现出不同的抗氧化活性和抗炎活性,其中黄山金丝皇菊的抗氧化能力最强,其次是黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊;而黄山皇菊的抗炎活性最强,其次是黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。菊花中黄酮类化合物具有清除自由基和超氧阴离子的能力,其抗氧化能力与黄酮类化合物含量有关;而菊花中的抗炎成分相对复杂,包含多糖、黄酮类化合物(如木犀草素、槲皮素及黄芩苷等)、有机酸(如绿原酸)和挥发油等,4种不同菊花在抗炎及抗氧化方面的活性差异可能与上述成分的差异有关[2,17-18]。尽管不同菊花品种在抗氧化和抗炎活性方面存在差异,但是均表现出良好的药用及食用价值,人们在日常生活中可以根据使用目的的不同进行选择,如考虑通过饮用菊花茶起到抗氧化目的,可以优先选用金丝皇菊,而如果考虑菊花抗炎作用,则可以考虑黄山皇菊。综之,4种黄山道地菊花提取物均表现出一定的抗氧化活性及抗炎活性,常饮之有保健功效。
Antioxidant and anti-inflammatory activities of four kinds of Huangshan chrysanthemum
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摘要:
目的 探究4种黄山菊花品种水提物的抗氧化和抗炎活性。 方法 采用ABTS、FRAP和DPPH 3种方法测定黄山金丝皇菊、黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊4种菊花水提物的抗氧化活性,并通过NF-κB报告基因法和大鼠足肿胀模型评估其抗炎活性。 结果 ABTS、FRAP和DPPH结果显示,4种菊花水提物均具有抗氧化作用,其中黄山金丝皇菊作用最强,其次是黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。NF-κB报告基因和大鼠足肿胀模型结果显示,4种菊花提取物均能够一定程度的抑制LPS诱导的NF-κB转录活性和缓解角叉菜胶致大鼠足趾肿胀程度,其中,黄山皇菊作用最为显著,其次是黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。 结论 4种黄山菊花品种的水提物均表现出一定的抗氧化及抗炎活性,其抗氧化活性由强到弱依次为黄山金丝皇菊、黄山皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊,抗炎活性由强到弱依次为黄山皇菊、黄山金丝皇菊、黄山贡菊和黄山黄菊。 Abstract:Objective To investigate the antioxidant and anti-inflammatory activities of four kinds of Huangshan chrysanthemum. Methods ABTS, FRAP and DPPH were used to detect the antioxidant activities of Huangshan golden silk chrysanthemum, Huangshan chrysanthemum, Huangshan gongju, and Huangshan dendranthema. Their anti-inflammatory activities were evaluated by NF-κB reporter gene assay and rat foot swelling models. Results The outcomes of ABTS, FRAP and DPPH showed that the water extracts of four kinds of chrysanthemum all had certain antioxidant activities and the activities of Huangshan golden silk chrysanthemum were strongest, followed by Huangshan chrysanthemum , Huangshan gongju , and Huangshan dendranthema. Results of NF-κB reporter gene assay and rat foot swelling models showed that four extracts of chrysanthemum morifolium could inhibit the transcription of NF-κB induced by LPS and alleviate foot swelling of rat induced by carrageenan, with the strongest activity of Huangshan chrysanthemum, followed by Huangshan golden silk chrysanthemum, Huangshan gongju, and Huangshan dendranthema. Conclusion The antioxidant activities of Huangshan golden silk chrysanthemum were strongest, followed by Huangshan chrysanthemum, Huangshan gongju, and Huangshan dendranthema. The anti-inflammatory activities of Huangshan chrysanthemum were strongest, followed by Huangshan golden silk chrysanthemum, Huangshan gongju, and Huangshan dendranthema. -
Key words:
- antioxidation /
- anti-inflammation /
- chrysanthemum /
- feet swelling
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白蔹为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹的干燥块根,首载于《神农本草经》。白蔹是最早用于疮痈、烫伤[1]治疗的药物,具有解毒、生肌的功效。资料显示,白蔹在皮肤创伤治疗中的使用频率较高。随着白蔹药理研究的不断深入,发现白蔹还具有抗菌、抗病毒[2-6]、免疫调节及促进溃疡快速愈合等作用。
在2015版《中国药典》中,白蔹的质量标准只有定性分析而无定量分析。白蔹成分检测中发现其含大黄素等蒽醌类活性成分[7],且白蔹中大黄素的定量测定方法文献资料[8-9]较少。本实验采用反相高效液相色谱法,建立白蔹药材中大黄素含量测定方法,为白蔹的质量控制标准提供方法和依据。
1. 试药与仪器
1.1 试药
大黄素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110756-201512,经面积归一化法计算含量为99.1%);甲醇(烟台远东精细有限公司,批号:160706)为色谱纯,水为超纯水,磷酸(莱阳市双双化工有限公司,批号:2010246)为分析纯,硫酸(淄博市淄川区张庄化学试剂厂,批号:950626)为分析纯。白蔹饮片(安国市弘发中药材饮片有限公司,批号:131001),经淄博市中医院药品供应科主任魏星教授鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹Ampelopsis japonica(Thunb.) Makino的干燥块根。
1.2 仪器
Lab Alliance PC 3000 高效液相色谱仪(美国科学系统公司),紫外检测器(北京普析通用仪器有限责任公司);LD310-2R电子天平(沈阳龙腾电子有限公司);FA/JA系列电子天平(上海上平仪器有限公司);RE-201D型恒温水浴锅、RE-201D型旋转蒸发器(郑州博科仪器设备有限公司);766-3型远红外快速干燥箱(江苏省南通县金余电器配件厂)。
2. 方法与结果
2.1 色谱条件
Apollo-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇−0.2%磷酸溶液(85:15),流速1.0 ml/min,检测波长220 nm,进样量20 μl。在此条件下,大黄素与相邻色谱峰分离度良好,无干扰,理论塔板数为2 000。对照品与供试品色谱图见图1。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备
取大黄素对照品(含量为99.1%)约10 mg,精密称定,置于1 000 ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为9.91 μg /ml 的大黄素对照品储备液,备用。
2.2.2 供试品溶液的制备
取过5目筛的白蔹药材粉末,置烘箱内(70±2)℃,2 h烘干。精密称量30 g,用10倍量质量分数20%的硫酸在50 ℃条件下回流水解2 h。过滤,取滤渣。滤渣用纯化水洗至中性(pH=7),烘干。称其质量,记录。再以8倍量体积的95%乙醇在82 ℃条件下回流提取2次,每次1 h,过滤,合并乙醇提取液,减压蒸馏,浓缩至无醇味,加乙醇溶解并定容于10 ml容量瓶中,即得供试品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察
分别精密量取“2.2.1”项下制备的大黄素对照品溶液各125、250、500、1 000、2 000、4 000 μl,分别置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,配制成6种不同浓度的对照品溶液。依次精密吸取对照品溶液各20 μl注入高效液相色谱仪中,记录峰面积。以峰面积Y为纵坐标,对照品溶液浓度X为横坐标,进行线性回归,得回归方程为Y = 53 962X − 966. 46,r = 0.999 7;结果表明大黄素在0.124~3.968 μg/ml浓度范围内线性关系良好。
2.3.2 精密度试验
精密量取对照品溶液20 μl,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,测定峰面积。大黄素峰面积RSD为1.7%。仪器精密度良好,符合要求。
2.3.3 重复性试验
精密称取同一批号样品6份,按“2.2.2”项下方法平行制备样品溶液,在“2.1”项色谱条件下,分别进样,测定大黄素的峰面积,RSD为1.2%(n= 6),结果表明本方法重复性良好。
2.3.4 稳定性试验
按“2.1”项下色谱条件,分别精密量取在室温(10~30 ℃)下放置0、2.5、5、7.5、10、24 h的同一份供试品溶液各20 μl进样测定,记录大黄素的峰面积,6次进样结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定,RSD为1.5%。
2.3.5 加样回收率试验
取同一批次(批号:20170704)已知含量的白蔹药材样品9份,分别按相当于样品溶液中大黄素含量的80%(n=3)、100%(n=3)、120%(n=3)加入“2.3.1”项下制备的对照品溶液,按“2.2”项下色谱条件进行测定。计算回收率,结果见表1。
表 1 白蔹药材样品加样回收率试验结果样品含有量(m/mg) 加样量(m/mg) 测得量(m/mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD
(%)0.225 0.180 0.399 96.7 99.7 2.5 0.225 0.180 0.403 98.9 0.225 0.180 0.409 102.0 0.225 0.225 0.446 98.2 0.225 0.225 0.458 103.6 0.225 0.225 0.447 98.7 0.225 0.270 0.503 103.0 0.225 0.270 0.494 99.6 0.225 0.270 0.487 97.0 2.3.6 样品测定
取不同批次白蔹药材样品,分别按“2.3.2”项下方法制备样品溶液,按“2.2”项下色谱条件测定峰面积,连续进样3次,以外标法计算含量,测定结果见表2。
表 2 白蔹样品大黄素含量测定结果(n=3)批号 含量(μg/g) RSD(%) 20170622 17.845 1.16 20170626 19.113 2.07 20170704 15.002 2.50 3. 讨论
3.1 色谱条件的选择
3.1.1 检测波长的选择
笔者所查文献[8-10]中,测量大黄素所用波长有254、290 nm等。通过实验发现,不同的波长影响其重现性及灵敏度。通过对大黄素标准品甲醇溶液全波段(200~400 nm)紫外扫描可见:其在220、254、260、272、278 nm处均具有特征吸收。通过综合比较上述波长处大黄素峰的峰形及峰面积,220 nm处波长的峰形较好、干扰少、峰面积较大,故选定220 nm作为白蔹药材中大黄素的测定波长。
3.1.2 流动相的选择
大黄素的化学名为1'3'8-三羟基-6-甲基蒽醌,具有一定的极性和酸性。所查文献中,大黄素含量测定的流动相体系有多种。在实验过程中发现,流动相对色谱峰的保留时间及分离度有较大影响。故本实验在选择流动相时,考察了不同比例的甲醇-水,乙腈-水,甲醇:0.1%磷酸溶液[8-10],甲醇:0.5%磷酸溶液[11],甲醇:0.2%磷酸溶液,甲醇:0.02%磷酸溶液,甲醇:1% 冰醋酸[12]等不同溶剂系统,结果表明,相同条件下,甲醇:0.2%磷酸溶液(85:15)为流动相时,可以达到基线分离,出峰时间较短,峰形较好。
3.1.3 流速与进样量的选择
在流动相及波长选定的条件下,考察了不同流速(0.5~2.0 ml/min)对出峰时间的影响,当流速小于1.0 ml/min时,保留时间延长,使流动相的用量增加,会造成试剂的浪费;当流速大于1.0 ml/min时,保留时间缩短,但大黄素的峰会与杂质峰产生重叠,影响分离度及重现性。本实验选择1.0 ml/min作为流速。
在样品浓度一定的条件下,考察了不同进样体积(10~30 μl)的影响。实验结果表明,进样体积小于20 μl时,重现性及灵敏度均下降;大于20 μl时,杂质峰明显。当进样量为20 μl时,峰的对称性得到保证。因此,本实验选择20 μl为进样量。
3.2 样品提取方法的选择
已有文献[8]对白蔹中大黄素的提取方法采用甲醇提取及三氯甲烷萃取法。通过实验发现这种方法稳定性差、步骤烦琐,且所用试剂毒性较大。本实验在上述提取方法的基础上,参照大黄药材中大黄素的提取方法[10],通过4因素(粒度、溶剂剂量、溶剂浓度、提取时间)3水平的正交设计确定了白蔹中大黄素的提取方法。结果表明,采用过5目筛的白蔹粉末,先用20%的硫酸在50 ℃条件下回流酸水解2 h,滤渣用纯化水洗至中性。再用8倍量体积的95%乙醇,水浴回流2 h能够达到较好的提取效果。白蔹中含大黄素等游离蒽醌,还含有结合型蒽醌[13-14]。先进行酸水解,使结合型蒽醌水解,结果大黄素的含量有所提高。白蔹具有的抗菌性与其中的大黄素[15-16]有关,大黄素是白蔹的活性成分。本提取方法克服了以往相关文献报道方法的不足,分离度好、重现性好、结果准确,因此大黄素作为白蔹药材中指标成分有一定可行性,为完善白蔹药材的质量控制标准提供了方法和依据。新药临床试验的质量是药品上市后安全、有效的保障[17],所以临床试验过程中的质量控制尤为重要。包括相似性评价(外观检测和观感评估测试)、安全性评价(常规安全性检测)、适用性评价(薄层鉴别、HPLC、指标成分测定和药理实验)和最终制剂的质量标准。临床试验过程中的质量控制所要评价的范围更广、要求更为严格,是为了确保临床数据的真实、准确、完整和可靠,为下一步临床应用提供依据,对提高医疗水平具有重大意义。
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表 1 ABTS、FRAP、DPPH的线性方程及相关系数
项目 方程 相关系数 ABTS Y=0.662 4X+0.715 3 r=0.999 5 FRAP Y=0.298 5X+0.060 r=0.999 4 DPPH Y=0.459 8X−0.023 8 r=0.998 9 表 2 4种菊花抗氧化能力
名称/抗氧化
能力FRAP(mmol FeSO4/g) ABTS(mmol Trolox/g) DPPH(mmol Trolox/g) 黄山金丝皇菊 0.504±0.049 0.481±0.052 0.359±0.025 黄山皇菊 0.421±0.036 0.402±0.043 0.305±0.033 黄山贡菊 0.347±0.028## 0.369±0.031 0.277±0.041# 黄山黄菊 0.270±0.017###,** 0.287±0.014## 0.208±0.019##,* *P<0.05,**P<0.01,与黄山皇菊比较;#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001,与黄山金丝皇菊比较。 表 3 角叉菜胶致大鼠急性炎症模型结果(x±s,n=8)
组别 1 h 2 h 4 h 肿胀率(%) 抑制率(%) 肿胀率(%) 抑制率(%) 肿胀率(%) 抑制率(%) 模型组 41.6±
4.5− 52.5±
10.7− 45.1±
8.2− 黄山金丝皇菊 31.5±
5.9#24.3 42.3±
7.1#19.5 44.9±
8.80.5 黄山皇菊 28.9±
5.9##30.6 38.9±
7.8#,*,ΔΔ26.0 46.4±
10.0−2.8 黄山贡菊 31.8±
6.3#23.7 50.0±
11.74.8 46.4±
8.3−2.8 黄山黄菊 33.3±
6.2#20.1 51.0±
7.32.9 44.9±
8.80.6 *P<0.05,与黄山贡菊比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型组比较;ΔΔP<0.01,与黄山黄菊比较。 -
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