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丽蕾金线兰Anoectochilus lylei Rolfe ex Downie是兰科金线兰属植物，主要分布于云南省，其植物形态与同属植物金线兰A. roxburghii (Wall.) Lindl非常相似，在民间被当作金线莲使用[1-2]。金线莲是闽台特色中药，基原是金线兰A. roxburghii（Wall.）Lindl[3]，主要活性成分包含内酯苷和多糖等，具有降血糖、抗氧化、抗肝损伤、抗骨质疏松，还有减肥等生物活性[2,4-9]。前期研究发现，丽蕾金线兰和金线兰中的内酯苷类成分（金线莲苷和goodyeroside A）含量有较大的差异，12批金线兰金线莲苷含量为57.10 ～164.98 mg/g，仅1批检测到goodyeroside A，含量为1.69 mg/g；而丽蕾金线兰中goodyeroside A含量达到91.23 mg/g，金线莲苷含量仅为6.2 mg/g。金线莲苷和goodyeroside A是差向异构体，其药理作用具有明显的不同，金线莲苷具有抗高脂血症、降血糖和抗自身免疫性肝炎的作用，而goodyeroside A却无上述活性 [2]。因此，笔者对丽蕾金线兰植物形态特征、显微特征做了较全面的研究，以期为丽蕾金线兰的准确鉴定以及进一步的开发利用提供参考。
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SZ2体视镜显微镜（日本OLYMPUS）；200D单反相机（日本佳能）；YS100生物显微镜（日本Nikon公司）。
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试剂：水合氯醛、盐酸、F.A.A 固定液、间苯三酚等，丽蕾金线兰Anoectochilus lylei采自云南西双版纳景洪市，经福建中医药大学药学院吴岩斌副研究员鉴定为兰科金线兰属丽蕾金线兰 (Anoectochilus lylei Rolfe ex Downie)。
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采集野生丽蕾金线兰，移栽至开花后用数码相机拍照，记录植株形态特征，并在体视显微镜下对花进行解剖、拍照。取丽蕾金线兰的根、茎、叶制成片，观察其横切面特征，取新鲜叶片，撕下上表皮和下表皮，进行制片，观察上、下表皮的主要特征。
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植株高8~28 cm。茎淡绿色，半透明，肉质。叶卵心形，长2.0~6.5 cm，宽2.5~4.5 cm，上面深绿色或黑紫色，通常具红色网脉，有绢丝光泽，有 5 条弧形主脉，背面淡紫红色；叶柄的基部扩大成鞘，抱茎。总状花序具2~8朵花；花苞片淡红色，卵状披针形，先端渐尖；花倒置；中萼片长卵形，侧萼片呈偏斜的长圆状椭圆形；花瓣镰刀状披针形，与中萼片近等长；具Y字形白色的唇瓣，基部距呈圆锥状，前部裂片条状长圆形，中唇两侧各具1 ~ 3个极短的细齿，距中部呈绿色或黄色，末端白色，2 浅裂，与子房平行，内侧胼胝体2个，盾状；蕊柱黄色，长4 ~ 5 mm，蕊柱翅基部具急尖翅，见图1。上述特征与文献报道的丽蕾金线兰植物形态特征一致[1]。
图 1 丽蕾金线兰植物形态特征图
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近圆形，最外层表皮为1层不规则的类方形细胞构成，外具栓质化根被，排列紧密；皮层占横切面的5/6左右。外皮层为 2～3排列较紧密的不规则细胞；中皮层细胞为大小不等的类圆形，有草酸钙针晶分布；内皮层细胞类圆形；中柱鞘明显，维管束为木质部与韧皮部相间排列的辐射状，木质部导管多角形或类圆形，1～5个成束；中央髓部常不明显，见图2。
图 2 丽蕾金线兰根横切面组织构造及其组织
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类圆形，表皮为1层排列紧密的类圆形细胞，具角质层；皮层占横切面的 4/5左右，由排列较疏松的类圆形薄壁细胞组成，常可见草酸钙针晶分布，内皮层明显，由1层排列紧密的长椭圆形细胞组成，凯氏点明显可见；维管柱内无序散在13～30个有限外韧型维管束；木质部导管多类圆形，1～7个成束，髓部不明显，见图3。
图 3 丽蕾金线兰茎横切面组织构造及其组织
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上表皮细胞1层，排列紧密，表面常具乳突状或类三角状的突起，具角质层，气孔未见；下表皮由一列类长方形细胞组成，叶肉细胞多列，含较多叶绿体，偶见草酸钙针晶；主脉上方平整，下方微凸，维管束 1 个，为有限外韧型，见图4。
图 4 丽蕾金线兰叶（过中脉）横切面组织构造及其组织
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叶片上表皮细胞类方形或类圆形，排列紧密，未见气孔分布；下表皮细胞类圆形或为不规则多角形，常见的气孔类型有不定式、直轴式和不等式气孔，见图5。
图 5 丽蕾金线兰叶表面观
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金线兰属植物形态相似，在民间均当作金线莲使用[2,11-12]。市场上销售的金线莲大多数是经过组织培养的瓶苗或者瓶苗经过种植后的栽培品，但是组培金线莲的外植体常常未经过准确鉴定，多种金线兰属植物均作为金线莲组培的外植体，导致市场上出现了多种形态各异的金线莲品系，如“小圆叶” “尖叶” “大圆叶” “红霞”[10,13]。丽蕾金线兰叶片较大，民间称为“大圆叶”金线莲，但是其主要化学成分与金线兰明显不同。因此，为避免丽蕾金线兰与金线兰混淆，有必要对其进行准确鉴定。
本实验对丽蕾金线兰的植物形态及组织构造、鉴别特点等进行了较为全面的研究，结果显示丽蕾金线兰与金线兰的植物形态、显微特征存在一定的差异[13-17]。差异之处在于丽蕾金线兰根茎和叶片较金线兰粗大，叶片长多数在5 cm以上，叶主脉上表面较平整，下表面微凸；花倒置，唇瓣位于下方，唇瓣前唇裂片条状圆形，中唇两侧各具1 ~ 3个极短的细齿，距中部呈绿色或黄色，末端白色，与子房平行，蕊柱黄色，蕊柱翅基部具急尖翅。金线兰根茎和叶片较小，叶主脉上表面微凹，下表面呈半圆形凸出，花不倒置，唇瓣位于上方，唇瓣前唇裂片近长圆形或近楔状长圆形，中唇两侧各具6～8条、4～6 mm流苏状细裂条，距白色，与子房近垂直，蕊柱白色，蕊柱翅基部不具急尖翅。上述形态特征可作为丽蕾金线兰与金线兰鉴别的主要依据。
Morphology and microscopic identification of Anoectochilus lylei
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摘要:
目的 对丽蕾金线兰进行生药鉴定，为其准确鉴定及进一步开发奠定基础。 方法 利用性状和显微鉴定方法对丽蕾金线兰进行鉴定研究。 结果 丽蕾金线兰叶片为卵心形，通常具红色网脉，花倒置，具Y字形白色的唇瓣，唇瓣前部2裂片，裂片条状长圆形；中唇两侧各具1～3个短的细齿。显微特征主要为根、茎横切面中皮层宽广，根木质部维管束1～5个成束，茎木质部维管束1～7个成束；叶横切面主脉维管束有限外韧型，叶下表皮气孔类型众多，气孔以不定式为主。 结论 这些特征可为丽蕾金线兰的正确鉴定提供参考。 Abstract:Objective To perform the pharmacognostic identification of Anoectochilus lylei and establish the foundation for its accurate identification and further development. Methods The macroscopic identification and microscopic identification methods were used to identify A. lylei. Results A. lylei has ovate leaf shape, possessing red reticulated veins. Inverted flowers have Y-shaped and white lip. The anterior part of lip is two-lobed, and the lobes are linear-oblong. There are 1 to 3 shorts serrations on each side of the middle part of lip. Microscopic characteristics mainly show as follows: the cortex is broad in the transverse section of roots and stems; 1-5 and 1-7 vascular bundles in the xylem of transverse section of roots and stem, respectively. Collateral vascular bundle in the main veins of transverse section of leaves. There are multitudinous types of stomas in the leaf abaxial epidermis, most of which are anomocytic. Conclusion These characteristics could provide reference for the correct identification of A. lylei. -
溃疡性结肠炎（ulceractive colitis, UC）属于炎症性肠病的一种，有着较高的发病率，其特征为损伤性炎症，近年来有关其病因及发病机制的研究受到广泛关注，但至今仍不明确[1]。对于溃疡性结肠炎的治疗目前多采用手术、抗感染、糖皮质激素及免疫抑制剂等治疗，但上述治疗手段均为对症治疗，且药物长期使用的不良反应很容易造成疾病复发[2]。因此，探究溃疡性结肠炎的发病机制，将为今后治疗药物的研发提供理论基础。
Metrnl（Meteorin-like）是近年来新发现的神经营养因子，也叫Cometin, Subfatin或是IL-39[3-4]。 Jorgensen等[4]在2012年将Metrnl描述为类似于Meteorin（Metrn）的神经营养因子。Metrnl基因开放阅读框包含4个外显子，由936个碱基对编码311个氨基酸。Metrnl蛋白包含45个N端信号肽序列，切除信号肽后的266个氨基酸构成分子量约为30 000的成熟蛋白分子，整个蛋白分子没有穿膜区域，是一种分泌蛋白。到目前为止，关于Metrnl功能的研究较少，我们前期针对该蛋白相关研究确认Metrnl为一种新的细胞因子，阐明了Metrnl通过PPARγ信号通路介导胰岛素的增敏作用的重要机制[5]。 Jorgensen等[4]报道了Metrnl在神经突触生长和成神经细胞迁移中的神经营养活性。Watanabe等[6]报道，Metrnl是潜伏过程（Latent process，LP）基因，可用于细胞分化和神经突触延伸。脂肪组织Metrnl能促进脂肪细胞分化、改善代谢、抑制炎症从而调节脂肪功能，对抗肥胖引起的胰岛素抵抗[7]。通过检测Metrnl在各种组织中的表达，我们发现Metrnl在人和小鼠胃肠组织中，特别是在肠上皮细胞中都高度表达，并发现肠上皮Metrnl敲除后可以通过抑制肠上皮细胞的自噬而加重溃疡性结肠炎，提示 Metrnl是溃疡性结肠炎的治疗靶点[8]。
肠道微环境形成了良好的微生物群栖息地，肠道微生物群被认为是人体的重要器官，越来越多的研究将这种微生物环境与胃肠道疾病联系起来。肠道菌群在溃疡性结肠炎中起着重要作用，如在无菌状态下，无法制备出某些小鼠结肠炎模型（如IL-10缺陷型小鼠等）[9-10]。也有研究报道，在治疗溃疡性结肠炎患者时，联合使用抗生素也显示出了较好疗效[11]。此外，与健康人群相比，溃疡性结肠炎患者的肠道菌群组成也发生了显著变化[12]。但由于人类肠道菌群的复杂性和多样性，目前尚未清楚某些特定菌属与溃疡性结肠炎发病机制的关系。
因此，本研究聚焦溃疡性结肠炎，从肠道微生态角度出发，探究肠上皮Metrnl对于溃疡性结肠炎的作用以及对肠道菌群调节机制的影响。
1. 材料与方法
1.1 动物、试剂和仪器
雄性C57小鼠（8周龄，20只，16~20 g），上海西普尔-必凯实验动物有限公司（生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016）。Villin-cre小鼠[B6.Cg-Tg(Vil1in-cre)1000Gum/J，021504]，2只，16~20 g，美国JAX公司（北京澄天生物科技有限公司代理），生产许可证号：SYXK（京）2018-0016），用于产生肠上皮细胞特异性Metrnl基因敲除小鼠（Metrnl(-/-)）。所有小鼠饲养于相对洁净环境下，使用独立通风系统（individual ventilated cages, IVC）动物房，温度恒定（22~26 ℃），室内明暗交替12 h（08:00至20:00照明），相对湿度为40%~70%，笼内维持正压20~25 Pa，每小时换气60~70次。所有实验动物的使用，都经过海军军医大学动物管理机构的同意和认证，符合实验动物饲养及相关管理规定。所有动物实验均按照美国国家卫生研究院实验动物的护理和使用指南进行，并得到海军军医大学动物伦理委员会的批准。IVC系统购自上海鸣励实验室科技发展有限公司。TRIzol试剂（15596026），美国Invitrogen公司；葡聚糖硫酸钠盐（dextran sodium sulfate，DSS），MFCD00081551，分子量36 000~50 000，美国MP公司，引物，生工生物工程有限公司；包埋机（JB- L5，德国徕卡有限公司）；切片机（RM2126，德国徕卡有限公司）；RT-PCR仪器（ABI 7500系统，美国赛默飞公司）；粪便DNA提取试剂盒（QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit，Qiagen, Hilden, 德国）；紫外微量分光光度计（NanoDrop 2000，Thermo Scientific, 美国）；DNA凝胶回收试剂盒（AxyPrep DNA GelExtraction Kit，Axygen Biosciences, 美国）；微型荧光计（QuantiFluor-ST，Promega, 美国）；测序仪（Illumina MiSeq，Illumina, 美国）。
1.2 肠上皮细胞特异性Metrnl基因敲除小鼠的制备
首先按照本课题组已报道的方法[5]制备Metrnlloxp/loxp小鼠。根据报道的Metrnl(-/-)小鼠的繁殖策略[13]，即将Metrnlloxp/loxp小鼠与购买的Villin-Cre小鼠进行交配，产下后代小鼠基因型为Metrnlloxp/wtVillin-Cre。将Metrnlloxp/wtVillin-Cre小鼠和Metrnlloxp/loxp小鼠交配，产生下一代Metrnlloxp/loxpVillin-Cre小鼠。继续与Metrnlloxp/loxp交配，产下的后代，经基因型鉴定分别为Metrnlloxp/loxpVillin-Cre（Metrnl(-/-)）和Metrnlloxp/loxp（Metrnl(+/+)）。
1.3 RT-PCR定量肠道组织Metrnl mRNA表达
按照本课题组已报道的方法[3]，使用TRIzol试剂从肠道组织中提取总RNA，并使用ABI 7500系统进行RT-PCR。最终的20 μl反应混合物包括10 μl SYBR Green，2 μl cDNA模板和1 μl引物。通过重复反应确定平均阈值循环（Ct），将靶基因表达标准化为GAPDH，并使用ΔΔCT方法获得定量测量结果。Metrnl上游引物（F）CTGGAGCAGGGAGGCTTATTT，下游引物（R）GGACAACAAAGTCACTGGTACAG；GAPDH上游引物（F）GTATGACTCCACTCACGGCAAA，下游引物（R）GGTCTCGCTCCTGGAAGATG。
1.4 DSS诱导肠炎模型制备
雄性C57小鼠（8周龄）于实验室适应2周后，按照本课题组已报道的方法进行模型制备[7]，将DSS溶于水中，分别至终浓度为3%和1%，让小鼠自由饮用。
小鼠溃疡性结肠炎疾病程度评分，按照我们之前已报道的的评分标准进行评分[8]，对体重下降程度、大便性状、血便情况共3部分分别进行评分，然后进行加和，计算总分数。具体评分标准如下（表1）。
表 1 小鼠溃疡性结肠炎疾病程度评分表疾病评分 体重下降 (%) 大便性状 大便潜血 0 <1 正常 阴性 1 ≥1-5 - + 2 ≥5-10 软 ++ 3 ≥10-15 - +++ 4 ≥15 腹泻 ++++ 注：“-” 无此性状；“+” 潜血程度。 1.5 结肠长度检测及HE染色
小鼠处死后，取整个结肠部位，测量长度进行比较。然后将结肠下段部位组织用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片机切至4 μm的切片，按照之前的实验方法[14]，进行HE染色，染色后在光学显微镜下观察炎症细胞浸润情况，组织损伤情况并拍照记录。
1.6 肠道菌群测定
使用16S核糖体RNA基因测序技术检测肠道菌群。为了进行样品收集和DNA提取，从实验小鼠中收集粪便样品，并在取样后3h内将其冷冻在−80°C下。使用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit进行DNA提取。使用NanoDrop 2000测量细菌DNA的浓度。然后，将16S核糖体RNA基因测序用于检测细菌DNA。基因的V3-V4区域使用FastPfu聚合酶通过条形码索引引物（338F和806R）进行PCR扩增。然后通过AxyPrep DNA GelExtraction Kit，凝胶提取纯化扩增子，并使用QuantiFluor-ST进行定量。将纯化的扩增子以等摩尔浓度合并，并使用Illumina MiSeq仪器进行末端配对测序。
1.7 微生物宏基因组学分析
16S rRNA测序数据由Quantitative Insights Into Microbial Ecology平台（V.1.9.1）处理，并进行了MegaBLAST搜索，将生物分类单位的读数（OTU）与国家生物技术信息中心16S rRNA数据库中的参考序列比对。按照文献报道的方法[15]进行宏基因组学分析，从16S rRNA序列推算肠道微生物组的基因组，并且对每个样品的基因含量进行了预测。
1.8 统计分析
本实验结果数据以（
$\bar x $ ±s）表示，使用SPSS18.0软件进行统计分析。多组以上比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），各组与正常对照组比较采用Dunnett t检验法，两组比较采用独立样本t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。2. 结果
2.1 Metrnl(-/-)小鼠未表现结肠炎症状
我们构建了肠上皮细胞特异性Metrnl基因敲除（Metrnl(-/-)）小鼠，并检测了Metrnl mRNA在大肠和小肠组织中的表达。结果表明，Metrnl(-/-)小鼠中Metrnl mRNA的表达在结肠和小肠组织中极低（图1A）。 HE结肠切片显示Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠之间均无组织损伤和炎症细胞浸润（图1B）。以上结果表明，肠上皮细胞特异性Metrnl基因敲除后不会诱发溃疡性结肠炎。
2.2 溃疡性结肠炎模型制备条件的选择
在建立DSS诱发的溃疡性结肠炎模型之前，为了选择最佳的观察时间和DSS给药浓度，我们分别选择3％DSS和1％DSS进行造模，并观察了不同DSS浓度下C57小鼠的存活时间。结果显示，在3％DSS组的第6天，出现了小鼠死亡；直至给药10 d，全部小鼠死亡（图2A）。在1％DSS组中，未观察到小鼠死亡。与对照组相比，3％DSS组的小鼠体重在第5天时显著性降低（P<0.05），而1％DSS组的体重并无显著改变（图2B）。同样，与对照组相比，3％DSS组小鼠DAI增加（P<0.05），结肠长度显著性缩短（P<0.05），而1％DSS组在疾病活动指数、结肠长度方面均无明显变化（图2C-D）。 组织形态学方面，3％DSS组表现出结肠炎表型，具有明显的组织损伤，而对照组并无明显变化（图2E）。因此，我们选择3％DSS和5 d的给药时间作为后续实验条件。
2.3 Metrnl缺乏对DSS诱导的溃疡性结肠炎的影响
给予Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠3％DSS后，两组小鼠均表现出溃疡性结肠炎症状，其特征为持续的体重减轻、疾病活动指数增加、血性腹泻、结肠长度缩短以及结肠炎症（图3）。在此过程中，在给药后第5天时，与Metrnl(+/+)小鼠体重减轻（−8.27± 1.32）%相比，Metrnl(-/-)小鼠的体重减轻（−14.92±1.05）%，具有统计学差异（P<0.05，图3A）；与Metrnl(+/+)小鼠的疾病活动指数（6.00±1.63）相比，Metrnl(-/-)小鼠显著增加至（9.67±1.38）（P<0.05，图3B）；与Metrnl(+/+)小鼠结肠长度（7.08±0.89 cm）相比，Metrnl(-/-)小鼠结肠更短（5.77±0.58 cm）（P<0.05）（图3D）；为了排除上述差异不是由小鼠摄入不同量的3%DSS引起的，我们还检测了两组小鼠的饮水量。结果显示两组小鼠饮水量之间并无显着差异（图3C）。
图 3 Metrnl敲除后对DSS诱导的溃疡性结肠炎的影响A. 体重；B.疾病评分；C.水摄入量；D.结肠长度；E.结肠组织HE染色P<0.05，与DSS-Metrnl(+/+)组比较。2.4 Metrnl缺乏对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的菌群平衡的影响
我们通过高通量16S rRNA基因测序，检测了Metrnl对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型中肠道菌群的影响。应用Chao1 丰度估计量（chao1 richness estimator），香农多样性指数（shannon diversity index），辛普森多样性指数（simpson diversity index）三种指标评价各组小鼠中菌群的Alpha多样性（图4A-C）。结果显示，在未进行DSS造模之前，Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠的Alpha多样性并无显著差异；而进行3%DSS造模后，Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠出现了差异，其中Metrnl(-/-)小鼠多样性显著下降（图4A-C）。主成分分析显示，在给予3%DSS造模后的Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠之间微生物的组成显著不同（图4D）。检测小鼠粪便微生物组成，结果显示，在“门”这一层面，给予3%DSS后拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）和变形杆菌门（Proteobacteria）在Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠间存在显著的不同（图4E）。在Metrnl(-/-)小鼠中，Bacteroidetes和Proteobacteria显著降低，而Firmicutes显著升高。在“纲”这一层面，发现给予DSS后，Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠间拟杆菌纲（Bacteroidia）和梭菌纲（Clostridia）具有显著差异。值得注意的是，拟杆菌纲（Bacteroidia）属于拟杆菌门（Bacteroidetes）；梭菌纲（Clostridia）属于厚壁菌门（Firmicutes）（图4F）。为了进一步探究影响给予DSS后造成Metrnl(-/-)和Metrnl(+/+)小鼠间状态的原因，我们又在“目”层面进行了检测，结果显示（图4G），拟杆菌目（Bacteroidales），属于杆菌纲（Bacteroidia）；梭菌目（Clostridiales），属于梭菌纲（Clostridia）发生了显著改变。
图 4 肠上皮Metrnl 敲除对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群动态平衡的影响A. Chao1丰度估计量；B.香农多样性指数；C.辛普森多样性指数；D.主成分分析；E.门水平上的丰度；F.纲水平上的丰度；G.目水平上的丰度P<0.05，与DSS-Metrnl(+/+)组比较。3. 讨论
本研究用DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型并从对肠道微生物影响的角度出发，探究肠上皮Metrnl特异性敲除对于肠道菌群调节的影响以及对溃疡性结肠炎的作用。发现Metrnl在溃疡性结肠炎小鼠模型中具有保护的功能，该效应可能是Metrnl通过对肠道菌群的调节所致。 近期有一篇关于Metrnl改善克罗恩氏病（CD）的报道，该研究表明肠系膜脂肪组织与肠道存在交互作用，发现小鼠在给予Metrnl后，可通过激活STAT5/PPARγ信号通路，从而达到促进脂肪细胞分化来减轻肠系膜脂肪组织病变的作用[16]。该研究表明Metrnl确实可以影响炎症性肠病的发生发展。除此以外，我们进一步证实了，肠上皮特异性Metrnl敲除后可以加重DSS诱导的溃疡性结肠炎，并且该作用是通过抑制AMPK-mTOR-p70S6K通路，下调了肠上皮细胞自噬水平产生的[7]。
肠道微环境形成了合适的微生物群栖息地，已证明会影响多种消化系统疾病的发生[17]。肠道菌群稳态的紊乱已被广泛认为与炎症性肠病的发病机制和进展密切相关[8]。肠道菌群主要有三种功能，分别是代谢作用，保护作用和营养作用[18-19]。正常人肠道中在“门”这一层面，主要有四类微生物群，包括拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）和变形杆菌门（Proteobacteria）[20-21]。
溃疡性结肠炎的主要特征是有益细菌的减少。拟杆菌门（Bacteroidetes）是革兰阴性厌氧细菌，构成了哺乳动物胃肠道中主要微生物群[22]。目前认为，拟杆菌门可以通过免疫调节和维持体内平衡而对宿主发挥有益作用。据报道，拟杆菌门可以通过分泌多糖A（polysaccharide A, PSA）来增强抗炎因子IL-10的mRNA表达[23-24]。本研究结果显示出类似趋势，在给予3%DSS进行溃疡性结肠炎造模后，Metrnl(-/-)小鼠症状更加严重，与Metrnl(+/+)小鼠相比，其拟杆菌门的成分显著下降。然而，拟杆菌门在溃疡性结肠炎中并不完全有益。有报道显示，拟杆菌门可以侵入肠道组织并引起个别患者的肠道损伤[25]。因此针对该类菌属的作用还有待进一步验证。除此以外，由于SCFA具有增强肠壁屏障和免疫系统的作用，从而有助于抵抗病原体，因此产生SCFA的菌群目前认为对人体是有益的，例如Faecalibacterium prausnitzii，Roseburia或Eubacterium[26-28]。放线菌门（Actinobacteria）中的双歧杆菌属（Bifidobacterium）也是有益菌群[29-30]。然而，在该属中发现了有争议的结果，因为有研究报道显示，与对照组相比，溃疡性结肠炎患者的Bifidobacterium增加了[31- 32]，其原因可能是疾病程度的造成的。因此，需要进一步的研究来阐明该有益菌群在溃疡性结肠炎中的作用。
相反的，目前很多研究显示菌群在溃疡性结肠炎中显著增加，如变形杆菌门（Proteobacteria）下的黏附侵入性大肠杆菌属（adherent-invasive Escherichia coli）和巴斯德杆菌属（Pasteurellaceae），厚壁菌门（Firmicutes）下的韦荣氏球菌属（Veillonellaceae）和瘤胃球菌属（Ruminococcus gnavus），梭杆菌属（Fusobacterium）。我们的研究结果也显示出类似趋势，在给予DSS后，与Metrnl(+/+)小鼠相比，Metrnl(-/-)小鼠的厚壁菌的成分显著上升。除此以外，以下菌属也被认为具有潜在致病性，如大肠杆菌属（Escherichia），沙门菌属（Salmonella），耶尔森菌属（Yersinia），脱硫弧菌属（Desulfovibrio），幽门螺杆菌属（Helicobacter），弧菌属（Vibrio）[31, 33-36]。目前报道较多的是黏附侵入性大肠杆菌，此种细菌能够黏附并穿过肠道黏液屏障，侵入肠道上皮层，促进TNFα分泌和炎症的发生[37-38]。本研究表明，肠上皮特异性Metrnl敲除后，在3%DSS诱导的溃疡性结肠炎模型中，导致肠道菌群动态平衡的进一步紊乱，表明恢复菌群动态平衡对于治疗溃疡性结肠炎至关重要。
需要注意的是，大量研究表明，目前并没有明确具体的哪一种微生物群对人体是有益的，因为每个人的菌群特征都不同。一般而言，只有相对平衡的微生物群，才能最佳地维持人体的代谢和免疫功能以及预防疾病的发展。在健康的肠道中，病原菌和共生菌群可以共存而不会出现问题。但是，这种平衡的任何紊乱都会导致营养不良，从而改变微生物与宿主之间的相互作用[39]。尽管目前普遍认为溃疡性结肠炎中肠环境平衡的破坏是显著发生的，但是造成肠道平衡紊乱的生物学机制的仍然未知，并且不清楚这种紊乱究竟是造成溃疡性结肠炎的原因还是结果。
本研究仍存在不足。首先，肠道微生态对溃疡性结肠炎的保护作用的详细机制仍未探究清楚，特别是肠道中存在的主要4类微生物群（拟杆菌，厚壁菌，放线菌，变形杆菌）对溃疡性结肠炎的作用还有待证实。其次，肠上皮特异性Metrnl敲除后通过调节肠道菌群的组成，从而加重3%DSS诱导的溃疡性结肠炎的作用证据仍不十分充分，需要今后在进一步的研究中加以阐明。
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图 2 丽蕾金线兰根横切面组织构造及其组织
A1.根被；A2.表皮；A3.皮层；A4.内皮层；A5.韧皮部；A6.木质部；A7.髓部；B1.表皮细胞（根被）；B2.薄壁细胞；B3.维管束
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[1] 胡超, 田怀珍, 董全英. 中国兰科植物一新记录种: 丽蕾金线兰(英文)[J]. 热带亚热带植物学报, 2012, 20(6):602-604. doi: 10.3969/j.issn.1005-3395.2012.06.011 [2] WU Y B, PENG M C, ZHANG C, et al. Quantitative determination of multi-class bioactive constituents for quality assessment of ten Anoectochilus, four Goodyera and one Ludisia species in China[J]. Chin Herb Med,2020,12(4):430-439. doi: 10.1016/j.chmed.2020.07.002 [3] 福建省食品药品监督管理局. 福建省中药饮片炮制规范[S]. 福州: 福建科学技术出版社, 2012: 144. [4] ZHANG J G, LIU Q, LIU Z L, et al. Antihyperglycemic activity of Anoectochilus roxburghii polysaccharose in diabetic mice induced by high-fat diet and streptozotocin[J]. J Ethnopharmacol,2015,164:180-185. doi: 10.1016/j.jep.2015.01.050 [5] ZENG B Y, SU M H, CHEN Q X, et al. Antioxidant and hepatoprotective activities of polysaccharides from Anoectochilus roxburghii[J]. Carbohydr Polym,2016,153:391-398. doi: 10.1016/j.carbpol.2016.07.067 [6] 吴岩斌, 张超, 张秀才, 等. 不同来源金线莲总黄酮含量及其体外抗氧化、降血糖活性研究[J]. 药学服务与研究, 2017, 17(3):206-209. [7] GUO Y L, YE Q, YANG S L, et al. Therapeutic effects of polysaccharides from Anoectochilus roxburghii on type II collagen-induced arthritis in rats[J]. Int J Biol Macromol,2019,122:882-892. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.11.015 [8] HSIAO H B, LIN H, WU J B, et al. Kinsenoside prevents ovariectomy-induced bone loss and suppresses osteoclastogenesis by regulating classical NF-κB pathways[J]. Osteoporos Int,2013,24(5):1663-1676. doi: 10.1007/s00198-012-2199-z [9] TIAN D M, ZHONG X Y, FU L Y, et al. Therapeutic effect and mechanism of polysaccharides from Anoectochilus Roxburghii (Wall.) Lindl. in diet-induced obesity[J]. Phytomedicine,2022,99:154031. doi: 10.1016/j.phymed.2022.154031 [10] 彭梦超, 郑承剑, 吴建国, 等. 南丹金线兰的植物形态和显微鉴定[J]. 亚热带植物科学, 2022, 51(1):58-61. doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2022.01.008 [11] 尹泽楠, 徐柯心, 樊娇娇, 等. 中国兰科开唇兰属植物化学成分研究进展[J]. 环球中医药, 2016, 9(9):1153-1160. doi: 10.3969/j.issn.1674-1749.2016.09.041 [12] 彭梦超, 吴建国, 吴锦忠, 等. 滇南金线兰的植物形态和显微鉴定[J]. 药学实践杂志, 2021, 39(6):534-537. [13] 王海阁, 许文, 张勋, 等. 林下栽培金线莲的生药鉴别[J]. 中药材, 2020, 43(2):303-308. doi: 10.13863/j.issn1001-4454.2020.02.009 [14] 郑丽香. 金线莲的资源调查及生药学研究[D]. 福州: 福建中医药大学, 2018. [15] 易骏, 吴建国, 张秀才, 等. 不同植物基原金线莲生药鉴别[J]. 中草药, 2015, 46(23):3570-3576. [16] 林美珍, 陈育青, 陈美燕, 等. 金线莲与台湾金线莲显微结构比较[J]. 亚热带植物科学, 2016, 45(3):279-282. [17] 韩利霞. 金线兰属(Anoectochilus)(兰科)的系统分类研究[D]. 上海: 华东师范大学, 2019. -
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