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消痰通腑方应用于治疗胃肠癌前病变患者已有十余年，能够延缓胃肠癌前患者向肿瘤的进展，同时对脓毒症等危重症患者的胃肠功能恢复有较好疗效[1-5]。该方剂由法半夏、生大黄、制大黄、制南星、重楼和黄连六味中药配伍组成，法半夏、制大黄为主药，旨在消痰止呕、泄下通俯之意。半夏乃燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之良药，法半夏为半夏的炮制品，倍其化痰之力；制大黄为生大黄炒制，泻下力缓，能通达肠腑而推陈出新，又不伤正气，两者合用，既燥湿化痰，又缓消积滞，达消痰通腑之功。黄连既能泻脾胃之火，又能燥痰饮之湿。
目前对该方剂的研究集中在药理功效方面，尚无对该方剂化学成分、有效成分的相关研究报道。寻找中药复方的临床药效基础，是长期困扰中医人临床研究的难点。超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱法（UHPLC-Q-TOF/MS）是一种简便、快速、高灵敏度的现代分析技术，能够提供化合物的精确分子量、元素组成以及离子碎片信息（MS1和MS），广泛用于中药化学成分的快速分析和鉴别[6-7]。本研究拟采用此方法对消痰通腑方的化学成分开展研究，为其质量标志物筛选和探明药效物质提供实验依据。
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Agilent 1290 Infinity型超高效液相色谱和 6530型四极杆-飞行时间串联质谱仪（美国安捷伦）；CPA255D型1/10万电子天平(德国Sartorius)；Eppendorf mini spin离心机、Eppendorf 5430r离心机(德国Eppendorf)；Lyovapor L-200冷冻干燥机(瑞士BUCHI)；Milli-Q型纯水系统(美国Millipore)；SK7200H型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。
甘草酸（批号：F610137）、重楼皂苷I（批号：F278755）、重楼皂苷II（批号：F297228）、重楼皂苷VI（批号：F483230）、薯蓣皂苷（批号：F543583）、重楼皂苷H（批号：F297228）、奎宁酸（批号：F435708）、柠檬酸（批号：F594530）、异佛莱心苷（批号：F109963）、芹糖异甘草苷（批号：F667242）购自上海一飞生物科技有限公司，异佛莱心苷纯度为95%，其余对照品纯度均≥98%；芦荟大黄素（批号：D1226AS）、大黄素甲醚（批号：O1026AS）、大黄酚（批号：D0316AS）、大黄酸（批号：N1107AS）购自大连美仑生物科技有限公司，纯度均≥98%；水为去离子水；甲醇、乙腈、甲酸（质谱纯，德国E. Merck公司）；其余试剂均为分析纯。
消痰通腑免煎剂由法半夏、生大黄、制大黄等药物组成。由江阴制药厂生产，长征医院监制，生产批号：20200420。
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精密称定免煎剂0.5 g，加入70%甲醇50 ml，超声提取30 min，得70%甲醇提取物（简称醇提液）；精密称定免煎剂0.5 g，加入70~80°C热水50 ml，搅拌5 min，超声提取30 min得水提液。提取液于3000 r/min离心10 min，取上层溶液1.5 ml置离心管中，再经15000 r/min离心10 min，取上清液过0.22 μm 微孔滤膜，即得。
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精密称取适量甘草酸、芦荟大黄素等对照品，加甲醇分别制成每1 ml 含对照品1 mg的储备溶液。精密吸取上述储备溶液各10 μl，置于1.5 ml 离心管中混合，涡旋混匀，加入甲醇配制成各对照品浓度分别为10 μg/ml的混合标准溶液。
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从已有的药材化合物成分分析文献中获取该方剂各味药的成分信息，确保数据库中收录的化合物能够在已发表的文献中检索可得，在基于Agilent自带的defult文档上建立方剂化合物数据库。采用Agilent MassHunter Qualitative Analysis 10.0软件对数据进行分析。
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Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以 0.1% 甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~3 min，5 %B；3~15 min，5 %~35 %B；15~30 min，35 %~95 %B），柱温30 °C，流速0.3 ml/min，进样量1 μl，检测波长254 nm。
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ESI离子源，分别在正、负离子模式下采集数据，采集范围100~1700 m/z。离子源温度350 ℃，毛细管电压3.5 kV（正离子）、4.0 kV（负离子），雾化气压力45 Psi，干燥气流速11 L/min，鞘气流速11 L/min，鞘气温度350 ℃，碎片电压140 V。对照品和消痰通腑方的UHPLC-Q-TOF/MS色谱图分别见图1和图2。
图 1 混合对照品的UHPLC-Q-TOF/MS色谱图
图 2 消痰通腑方的UHPLC-Q-TOF/MS色谱图
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在全扫描质谱图中，大多数对照品化合物在正模式下显示[M+H]+离子，或在负模式下显示[M-H]−。由于流动相中存在Na+和甲酸，部分化合物中观察到[M+Na]+和[M+HCOOH-H]−，少许化合物中观察到[M+K]+、[M+NH4]+及[M+CH3COOH-H]−。
化合物的鉴定首先使用 Agilent 10.0软件中的按化学式查找功能，根据精确质量、同位素丰度，以及上述分子离子峰进行鉴定。当有对照品时，通过比较其在图谱上的保留时间和m/z信息与对照品的相关信息进行鉴别。在没有对照品的情况下，主要根据质谱信息（包括化合物二级质谱信息）和参考文献进行初步的鉴定。根据质谱信息和参考文献进行初步鉴定时，通过导入已建立的方剂化合物数据库，利用Agilent 10.0软件进行识别，并结合Massbank、Pubchem、Chemspider等在线数据库进行辅助分析，根据化合物准确分子量及碎片信息进行判断，排除假阳性结果。例如：
化合物1：通过数据库识别到0.906 min的分子离子峰在正负离子模式下分别出现m/z 175.1193 的[M+H]+离子和m/z 173.1036的 [M-H]− 离子，软件自动生成匹配度最高分值的分子式为C6H14N4O2，说明其可能为精氨酸。其次，结合Massbank在线数据库对其二级碎片离子进行查找，发现正离子模式下可识别到158、116碎片离子，负离子模式下可识别到173、131等碎片离子，因此，推断化合物1为精氨酸，结合我们建立化合物数据库信息，判断该化合物来源于黄连或制半夏[8]。
化合物12：通过数据库识别到1.394 min的分子离子峰在正负离子模式下分别出现m/z 333.0878的[M+H]+离子和m/z 331.0672的 [M-H]− 离子，软件自动生成匹配度最高分值的分子式为C13H16O10。其次，化合物产生m/z 169没食子酸的特征碎片离子，而大黄中的简单酚酸类成分基本结构主要是没食子酸、对香豆酸、阿魏酸、对羟基苯丙酸等，因此，推测该化合物为来源于大黄的没食子酸-3-O-β-D-葡萄糖苷[9]。
化合物44：负离子模式下在17.208 min识别到m/z 837.3886的 [M-H]− 离子，软件自动生成匹配度最高分值的分子式为C42H62O17。其次，化合物产生m/z 351的离子峰，为其结构中2 分子的葡萄糖醛酸苷键断裂形成的碎片离子m/z 351[2 × C6H8O6-H]−离子，因此，推断化合物44为甘草皂苷G2，来源于法半夏[10]。
考虑到此中药方剂以水冲服的方式，本研究还同步分析了水提液的化学成分，结果亦参见图2和表1。结果表明，70%甲醇提取物能够识别的化合物比水提液识别的化合物多10个，且化合物的峰面积也较高。与70%甲醇提取方式获得化合物相比，水提液识别的是即将吸收入血的体外化合物群的信息，而70%甲醇提取液识别的则是方剂中更多的化合物的信息，有助于解析其多成分的特征，保证消痰通腑免煎剂所含有的化合物的准确性，也有助于免煎剂生产的质量控制。
表 1 消痰通腑方的鉴定分析结果
序号 质量 相对时间（min） 分子式 m/z（MS1） 部分特征离子峰 m/z (MS2) 差异(Δ ppm) 名称 来源药材 来源文献 1 174.1115 0.906 C6H14N4O2 175.1193 [M+H]+ 175,158,116 −1.01 精氨酸 黄连*，制半夏 [8,11] 174.1113 0.906 173.1036 [M-H]- 173,131 −2.40 2 192.0617 0.965 C7H12O6 191.0552 [M-H]- 191,173,111 −4.71 奎宁酸 黄连 [8] 3 251.1022 0.996 C10H13N5O3 252.1093 [M+H]+ 252,194,137 0.79 脱氧腺苷 重楼，制半夏 [11-12] 4 192.0281 1.189 C6H8O7 230.9906 [M+K]+ 1.73 柠檬酸 黄连 [12] 192.0276 1.168 191.0203 [M-H]- 191,111,103 3.14 5 332.0767 1.394 C13H16O10 333.0878 [M+H]+ 4.61 没食子酸-3-O-β-D-葡萄糖苷 大黄* [13] 332.0746 1.395 331.0672 [M-H]- 271,169 0.30 6 170.0216 1.396 C7H6O5 171.0289 [M+H]+ 171,155,153 0.29 没食子酸 大黄* [13] 170.0216 1.520 169.0143 [M-H]- 125,111 0.42 7 131.0945 1.508 C6H13NO2 132.1018 [M+H]+ 132,86 −0.76 异亮氨酸 天南星，制半夏 [11,14] 131.0939 1.475 130.0869 [M-H]- −3.84 8 165.079 2.273 C9H11NO2 166.0864 [M+H]+ 166,120 0.60 苯丙氨酸 天南星，制半夏 [11,14] 165.0792 2.238 164.0723 [M-H]- 3.66 9 354.0946 3.752 C16H18O9 353.0874 [M-H]- 353,191 −1.13 绿原酸 黄连* [8] 10 204.0899 4.31- C11H12N2O2 205.0973 [M+H]+ 159,146 0.10 色氨酸 黄连*，制半夏 [8,11] 204.0897 4.207 203.0819 [M-H]- 142,116 −0.69 11 326.1026 4.812 C15H18O8 325.0919 [M-H]- 325,235,145 2.86 对香豆酸-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 12 452.1327 5.06- C21H24O11 475.1211 [M+Na]+ 0.00 儿茶素-O-葡萄糖苷 /表儿茶素-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 452.1319 4.993 451.1239 [M-H]- 451,137 −1.55 13 578.143 5.392 C30H26O12 579.1505 [M+H]+ 0.94 原花青素B2 大黄* [13] 578.1417 5.277 577.1345 [M-H]- 577,289 −1.23 14 290.0797 6.073 C15H14O6 291.0867 [M+H]+ 161 1.37 儿茶素 大黄 [13] 290.0794 5.995 289.0721 [M-H]- 245,203,187 1.04 15 194.0586 6.076 C10H10O4 217.0492 [M+Na]+ 177，145 4.68 阿魏酸 大黄 [13] 16 654.1949 6.449 C33H34O14 653.1871 [M-H]- 653,313,169 −0.77 4-( 4'-羟基苯基) -2-丁酮-O-阿魏酰-没食子酰-葡萄糖苷 大黄 [13] 17 484.0858 6.826 C20H20O14 483.078 [M-H]- 313,169 0.00 没食子酸-O-没食子酰基葡萄糖苷 大黄 [15] 18 164.0470 8.434 C9H8O3 163.0397 [M-H]- 163,155 −2.45 对香豆酸 大黄 [13] 19 564.1492 8.589 C26H28O14 565.1559 [M+H]+ 565,505 1.24 夏佛托苷 天南星 [16] 564.1478 8.556 563.1418 [M-H]- 2.13 20 322.1093 8.578 C19H16NO4+ 323.1163 [M+H]+ 265,189 3.40 格兰地新 黄连 [17] 21 284.0687 8.920 C16H12O5 285.076 [M+H]+ 242 1.05 大黄素甲醚 大黄 [18] 22 564.1871 9.192 C27H32O13 587.1756 [M+Na]+ 356,322 3.58 鼠李糖甘草苷 法半夏 [16] 23 234.0533 9.318 C12H10O5 235.0604 [M+H]+ 222,189 1.28 2-甲基-5-羧甲基-7-羟基色原酮 大黄 [13] 234.0531 9.262 233.0458 [M-H]- 1.29 24 578.1641 9.686 C27H30O14 577.1554 [M-H]- 577,146 −1.55 异佛莱心苷 法半夏 [11] 25 442.0921 9.820 C22H18O10 443.0976 [M+H]+ 393,123 4.81 表儿茶素没食子酸酯 大黄 [13] 442.0901 9.820 441.0824 [M-H]- 0.23 26 550.1704 9.845 C26H18O10 549.1614 [M-H]- 283,239 0 芹糖异甘草苷 法半夏 [10] 27 446.0856 9.912 C21H18O11 469.0733 [M+Na]+ 279,248 −1.71 大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [15] 446.0848 9.845 445.0772 [M-H]- −0.90 28 478.1471 9.978 C23H26O11 479.1551 [M+H]+ 0.63 异莲花掌苷 大黄 [15] 478.1472 9.922 477.14 [M-H]- 313 −0.42 29 310.1058 10.092 C15H18O7 333.0949 [M+Na]+ 1.20 2-O-桂皮-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 310.1055 10.002 355.1035 [M+HCOOH-H]- 345 0.00 30 234.0897 10.684 C13H14O4 235.097 [M+H]+ 235 2.13 2-(2′-羟丙基)-5-甲基-7-羟基色原酮 大黄 [13] 234.0895 10.631 233.0822 [M-H]- 1.29 31 862.1953 10.833 C42H38O20 861.1888 [M-H]- 699,654 0.46 番泻苷 B 大黄 [13] 32 320.0893 11.572 C19H14NO4 321.0991 [M+H]+ 292,234 −1.90 黄连碱 黄连 [19] 33 399.1665 12.363 C22H25NO6 422.1598 [M+Na]+ 350,336,292 4.69 秋水仙碱 天南星 [20] 34 462.1161 12.313 C22H22O11 461.1088 [M-H]- 461,331,169 −0.22 桂皮酸-O-没食子酰-葡萄糖苷 大黄 [9] 35 418.1257 13.394 C21H22O9 417.1188 [M-H]- 255,213 −0.72 异甘草苷 法半夏 [10] 36 1048.5438 14.102 C51H84O22 1071.5336 [M+Na]+ 869,577 −0.93 重楼皂苷G 重楼 [21] 1048.5457 14.078 1047.5386 [M-H]- 0.48 37 408.1422 14.182 C20H24O9 431.1314 [M+Na]+ 306,292 0.23 6-甲氧基酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 408.1424 14.112 407.1352 [M-H]- 0.98 38 432.1053 14.372 C21H20O10 455.0942 [M+Na]+ 455,292 −1.54 芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 432.1060 14.317 431.0989 [M-H]- 1.16 39 1046.5283 14.384 C51H82O22 1047.5356 [M+H]+ 415,172 −1.43 polyphylloside III 重楼 [20] 1046.5282 14.852 1091.5286 [M+HCOOH-H]- 0.55 40 416.1109 14.554 C21H20O9 439.0999 [M+Na]+ 439,336 −0.23 大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 416.1104 14.487 415.1032 [M-H]- −0.72 41 286.048 15.273 C15H10O6 287.0552 [M+H]+ 0.74 木犀草素 黄连* [8] 286.0484 15.216 285.0412 [M-H]- 285,215,199 2.20 42 446.1213 15.932 C22H22O10 469.1104 [M+Na]+ 469,283 −0.21 大黄素甲醚-8-O-β-D葡萄糖苷 大黄 [15] 284.0687 15.865 283.0616 [M-H]- 1.41 43 450.1523 17.150 C22H26O10 473.1413 [M+Na]+ 473,230 −1.06 决明柯酮-O-乙酰基葡萄糖苷 大黄 [15] 450.1528 17.097 449.1469 [M-H]- 3.56 44 838.3969 17.208 C42H62O17 837.3886 [M-H]- 661,351 −3.34 甘草皂苷G2 法半夏 [10] 45 822.4012 17.943 C42H62O16 845.392 [M+Na]+ −3.17 甘草酸 法半夏* [10] 822.4031 17.914 821.3959 [M-H]- 351,193 −0.83 46 284.0328 18.384 C15H8O6 283.0257 [M-H]- 239 3.18 大黄酸 大黄 [18] 47 884.4779 19.643 C15H20O3 907.4652 [M+Na]+ 685,292 −1.10 纤细薯蓣皂苷 重楼 [21] 884.4762 19.622 929.4748 [M+HCOOH-H]- −0.43 48 870.4622 19.768 C44H70O17 893.4502 [M+Na]+ 376,251 −0.34 重楼皂苷H 重楼 [21] 870.4607 19.622 915.459 [M+HCOOH-H]- −0.55 49 854.4664 19.773 C44H70O16 877.4557 [M+Na]+ 877,306 −1.31 重楼皂苷II 重楼 [21] 870.4646 19.750 869.4546 [M-H]- 0.69 50 738.4219 19.932 C39H62O13 783.4170 [M+HCOOH-H]- 783,146 −0.26 重楼皂苷VI 重楼 [21] 51 270.0537 20.820 C15H10O5 269.0460 [M-H]- 225,146 1.86 芦荟大黄素 大黄 [18] 52 868.482 22.136 C45H72O16 891.4746 [M+Na]+ 725,415 3.70 薯蓣皂苷 重楼 [22] 868.482 22.104 913.4809 [M+HCOOH-H]- 0.77 53 854.4668 22.323 C44H70O16 877.4572 [M+Na]+ 196,140 0.43 重楼皂苷I 重楼* [21] 854.4655 22.297 899.4609 [M+HCOOH-H]- −1.07 54 254.0577 22.790 C15H10O4 255.0647 [M+H]+ 196 −1.96 大黄酚 大黄 [18] 55 576.4428 27.329 C35H60O6 599.4282 [M+Na]+ 429,355 6.67 胡萝卜苷 天南星* [23] 576.4374 27.263 621.4349 [M+HCOOH-H]- −2.68 注：*表示在水提液中未检测出的化合物 通过上述分析方法得到55种化合物，其中，精氨酸、奎宁酸、柠檬酸、黄连碱、格兰地新、绿原酸、木犀草素、色氨酸共8个化合物来自黄连；脱氧腺苷、薯蓣皂苷、重楼皂苷G、polyphylloside III、重楼皂苷II、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷H、重楼皂苷VI、重楼皂苷I共9个化合物来自重楼；异亮氨酸、苯丙氨酸、夏佛托苷、秋水仙碱、胡萝卜苷共5个化合物来自天南星；精氨酸、脱氧腺苷、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、鼠李糖甘草苷、异佛莱心苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草皂苷G2、甘草酸共10个化合物来自法半夏；没食子酸-3-O-β-D-葡萄糖苷、没食子酸、对香豆酸-O-葡萄糖苷、儿茶素-O-葡萄糖苷/表儿茶素-O-葡萄糖苷、原花青素B2、儿茶素、阿魏酸、4-( 4'-羟基苯基) -2-丁酮-O-阿魏酰-没食子酰-葡萄糖苷、没食子酸-O-没食子酰基葡萄糖苷、对香豆酸、大黄素甲醚、2-甲基-5-羧甲基-7-羟基色原酮、表儿茶素没食子酸酯、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、异莲花掌苷、2-O-桂皮-β-D-葡萄糖苷、2-(2'-羟丙基)-5-甲基-7-羟基色原酮、番泻苷B、桂皮酸-O-没食子酰-葡萄糖苷、6-甲氧基酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-D葡萄糖苷、决明柯酮-O-乙酰基葡萄糖苷、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚共27个化合物来自生大黄或制大黄，具体参见表1。其中，部分化合物例如精氨酸、脱氧腺苷、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸是根茎类化合物的共有化学成分，在黄连、重楼及半夏中均可以检测到，因此，根据化合物的文献检索进行了相应的归属。
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中药方剂在中医临床实践中形成了以汤剂为主的口服给药方式，药材煎煮制备获得复方时是否会导致化学成分的改变，消痰通腑方免煎剂是否也需要对上述化合物进行检测来确定方剂的质量均未知。再有，中药方剂具有多成分、多靶点、多途径、整合调节的作用特点，因此，有必要对消痰通腑方所含所有药材的化学成分群进行分析，初步确定其化学成分特征，为后期研究和临床应用提供数据参考。
为了实现化合物的高效、快速提取，首先考察了不同的超声提取溶剂（水、70%及100%甲醇溶液）、提取时间（30、45 和60 min）、样品与溶剂的比例（1:5、1:10和1:20），结果表明，以10倍溶剂即50 ml的75%甲醇溶液超声提取30 min为最佳样品制备方法。为了获得分离效果好、总离子流强的色谱图，选择了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-水（含0.1%甲酸）和乙腈-水（含0.1%甲酸）流动相体系进行分析。结果表明，乙腈-0.1%甲酸水溶液组成的流动相在正、负离子扫描模式下均表现出良好的分离效果和丰富的信号响应。除此以外，本研究还考察了不同流速（0.3、0.4 和0.5 ml/min）和不同柱温（25、30 和35 ℃）对于分析效果的影响。结果显示，当柱温在30 °C，流速为0.3 ml/min时，色谱峰峰形尖锐、色谱图基线稳定，柱压平稳。
本研究采用的分析方法具有快捷、简便、易行，样品用量小和高通量等特点，且样品前处理简单，所建立的方法可用于快速鉴别消痰通腑方免煎剂的化学成分。所鉴定的化合物中包括多数具有抗炎抗肿瘤等活性的化合物。例如，已有文献表明，重楼皂苷类成分如重楼皂苷I可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和转移等发挥抗肿瘤作用[24-25]；天南星中的夏佛托苷可以通过诱导自噬激活发挥抗肿瘤细胞增殖作用[26]；黄连碱作为黄连中的主要成分之一，具有抗真菌、胃黏膜保护、细胞毒等一些药理活性[27]；含大黄的方剂具有辅助放、化疗增敏减毒的功效，所含化合物大黄酸、大黄素甲醚在抗炎、抗肿瘤等方面都具有显著效果[28]。
综上，本研究基于UHPLC-Q-TOF/MS技术开展消痰通腑方免煎剂中的化学成分分析，丰富了全方的物质基础研究，为进一步明确其质量控制标志物和药效物质研究提供了科学依据。
Rapid analysis of chemical components of Xiaotan Tongfu formula based on UHPLC-Q-TOF/MS
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摘要:
目的 探明消痰通腑方的主要化学成分，为方剂药效物质基础研究和临床治疗提供科学依据。 方法 采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱法（UHPLC-Q-TOF/MS）对消痰通腑方化学成分进行鉴定，色谱条件为Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100 mm，1.7 μm），以 0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，柱温30 °C，流速0.3 ml/min，进样量1 μl，检测波长254 nm；质谱条件为电喷雾离子源（ESI），正、负离子全扫描模式采集质谱数据，根据对照品、自建质谱数据库和在线获得的化合物质谱数据库对色谱峰进行物质鉴定。 结果 初步鉴定出55个化合物，分别来自黄连、重楼、大黄、天南星、法半夏。 结论 本文所建立的UHPLC-Q-TOF/MS方法能系统、准确地鉴别消痰通腑方的化学成分，可为该方剂的质量标志物筛选和有效成分研究提供参考。 -
关键词:
- 超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱 /
- 化学成分 /
- 消痰通腑方
Abstract:Objective To rapidly explore the chemical components of Xiaotan Tongfu formula, and to provide scientific basis for the basic research and clinical treatment of the formula. Methods Analysis was performed on an Agilent 1290 ultra-performance liquid chromatography system coupled with an Agilent 6530 accurate quality Q-TOF/MS system, by using a Waters ACQUITY UPLC BEH C18 column (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm), with a gradient elution applying 0.1% aqueous formic acid solution and acetonitrile as a mobile phase. The flow rate was 0.3 ml/min. The column temperature was 30°C. The injection volume was 1 μl, and the detection wavelength was 254 nm. Mass spectrometry (MS) data were collected in both positive and negative ESI ion modes. Components in the formula were identified by using the in-house compound database, and comparing the retention time (tR), MS1 and MS2 data with the standard compounds, and the online compound MS database. Results A total of 55 compounds were identified from Coptis coptidis, Pseudomonas solani, Rhubarb, Araceae artemisiae and Pinellia chinensis. Conclusion The established UHPLC-Q-TOF/MS method could systematically and accurately identify the chemical components from Xiaotan Tongfu formula, and provided a reference for the quality marker selection and the research on the active ingredient. -
Key words:
- UHPLC-Q-TOF/MS /
- chemical components /
- Xiaotan Tongfu formula
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随着社会经济发展和饮食结构改变，功能性便秘（FC）发生率逐年攀升，并具有顽固性、复发性的特点，无根治特效药[1]，目前临床上对于便秘的干预措施主要包括药物、按摩、膳食调理等，但都存在依从性低、副作用明显、疗效不可靠等弊端[2]，新型抗便秘产品的研发具有迫切需求。黑蒜是一种发酵大蒜，在高温高湿条件下发酵一定时间制得[3]。黑蒜主要化学成分包括多糖、类黑精、蛋白质、多酚、含硫化合物等[4]，研究表明其具有显著的抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗肥胖[5-9]等作用，近年，黑蒜在通便相关的药食同源产品研发领域应用较多，但关于黑蒜抗便秘作用的研究较少，抗便秘功效成分更不明确，相关产品进一步研发与推广缺乏足够的科学依据。且黑蒜用于抗便秘每日需服用20 g以上[10]，易导致依从性差，难以长期坚持等问题。有研究发现大蒜多糖具有一定抗便秘作用[11]，而大蒜在加工成黑蒜的过程中糖类物质含量可增加数倍[12-13]，可合理推测黑蒜多糖可能具有更显著的抗便秘作用，是黑蒜抗便秘作用的物质基础之一，但目前还没有相关的研究。因此，本文建立复方地芬诺酯（CO.D）诱导的小鼠FC模型，探究黑蒜多糖的抗便秘作用，为新型抗便秘产品的研发提供科学依据。
1. 材料与仪器
1.1 实验材料
黑蒜（批号：20231030，上海明可名生物科技有限公司）；乳果糖口服液（规格：667 mg/ml，批号：22110047，北京韩美药品有限公司）；复方地芬诺酯片（2.5 mg/片，批号：210804，仁和堂医药连锁股份有限公司）。
1.2 实验试剂
D-无水葡萄糖（批号：S22J12H137237，源叶生物）；无水乙醇（批号：P2708277，泰坦科技）；生理盐水（批号：230327042，雷根生物）；4%多聚甲醛（批号：HP184401，博光生物）；浓硫酸（批号：
20230420）、 丙酮（批号：20230807 ）、石油醚（批号：20220507 ）均购自国药集团；三氯乙酸（批号：C14990699）、活性炭粉（批号：C14853603）、阿拉伯树胶粉（批号：C15109301）、苯酚（批号：C15031044）均购自麦克林生化；所有水均为超纯水机所制一级水。1.3 实验仪器
鼓风干燥箱DAG-924（满贤经贸）；循环水式多用真空泵SHB-III（明杰仪器）；万分之一天平JA1003（恒平仪器）；电热恒温水浴锅HWS-12（一恒仪器）；高速离心机M18G（创宜生物）；旋转蒸发器RE-52AA（亚荣仪器）；超纯水机Smart-S（和泰仪器）。
1.4 实验动物
SPF级C57雄性小鼠，体重18 ~22 g，许可证号： SCXK（浙）2019-00004，杭州子源实验动物科技有限公司。
2. 方法
2.1 黑蒜多糖的提取
取10 g黑蒜，按下列步骤处理： ①脱脂：剥去外壳，研磨成泥，85%乙醇水溶液（V/V）浸渍，常温静置8 h，抽滤，滤渣用85%乙醇水溶液洗涤2次，置于烘箱60℃挥干至无醇味，充分研磨获得脱脂黑蒜粉。②水提：所得脱脂黑蒜粉用80℃热水浸提1 h，料液比为1∶50，抽滤，滤液减压浓缩至原体积1/2。③脱蛋白：在浓缩液中加入等体积10%三氯乙酸水溶液，充分混匀，4℃静置10 h，离心取上清液。④醇沉：上清液加入无水乙醇，调节乙醇水溶液浓度为80%，充分混匀，4℃静置12 h，离心取沉淀。⑤干燥：挥干有机溶剂，烘箱60℃干燥，去除残留溶剂，得黑蒜多糖干燥粉末。
2.2 多糖含量的测定
采用苯酚-硫酸法[14]测定多糖含量。
2.2.1 葡萄糖标准曲线绘制
精密称取D-无水葡萄糖适量，配置为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/ml的葡萄糖标准溶液，分别吸取250 μl于离心管中，依次加入6%苯酚溶液150 μl、浓硫酸625 μl，迅速振摇，静置反应30 min，吸取200 μl于96孔板，设置3个复孔，测量490 nm处吸光度。绘制葡萄糖标准曲线，求得回归方程。
2.2.2 样品测定
精密称取适量黑蒜多糖干燥粉末，加入蒸馏水配制成一定浓度的多糖溶液，根据酶标仪检测范围进行稀释。吸取250 μl多糖溶液于96孔板中，按照2.2.1项下方法进行测定，计算样品中多糖的含量，进一步计算黑蒜多糖的得率和纯度。
计算公式：黑蒜多糖得率（%）=
$ \dfrac{W2}{W1}\times 100\text{%} $ 黑蒜多糖纯度（%）=
$ \dfrac{C\times V\times D}{W2}\times 100\text{%} $ 式中：
$ W $ 1为黑蒜质量（g）；$ W $ 2为黑蒜多糖粉末质量；$ C $ 为样品中多糖的质量浓度（mg/ml）；$ V $ 为提取溶剂体积（ml）；$ D $ 为样品稀释倍数。2.3 动物实验给药剂量及配置
乳果糖口服液：乳果糖含量为667 mg/ml，正常成人用药量15 ml/d[15]，换算可得小鼠的用药剂量为4 g/（kg·d）。量取乳果糖口服液6 ml，加蒸馏水14 ml，配置成200 mg/ml的乳果糖口服液。
CO.D混悬液：参考贾红慧等[16]研究结果，选用5 mg/kg剂量CO.D造模，模型稳定、灵敏。取CO.D 4片，研磨成细粉，加蒸馏水20 ml，配置成0.5 mg/ml的 CO.D混悬液，使用前需充分混匀。
黑蒜多糖低、中、高剂量溶液：参考胡淼等[17]研究结果，黑蒜多糖低、中、高剂量组剂量分别选用0.25、0.5、1 g/kg。称取0.5、1、2 g黑蒜多糖干燥粉末，分别加蒸馏水20 ml，配置成25、50、100 mg/ml的黑蒜多糖溶液。
墨汁[18]：阿拉伯树胶于蒸馏水中加热至完全溶解，料液比为1∶8。加入5 g活性炭粉末，混合均匀，重复煮沸3次，冷却后定容至100 ml，使用前需充分混匀。
含药墨汁：取适量受试药，加入墨汁，配制成与上述受试药剂量相同的含药墨汁。
2.4 实验动物分组及给药方法
2.4.1 小鼠小肠墨汁推进实验
小鼠60只，适应性饲养1周，正常饮食饮水。给药前按照体重随机分为空白组、模型组、阳性组、黑蒜多糖低、中、高剂量组，每组10只。
按照0.1 ml/10 g灌胃给药。①给药：空白组和模型组小鼠给予蒸馏水，阳性组和黑蒜多糖组小鼠分别给予乳果糖口服液和黑蒜多糖溶液。1次/d，连续给药1周，观察并记录小鼠体重变化及一般状态。②造模：末次给药后禁食12 h，自由饮水，空白组小鼠灌胃蒸馏水，其余各组小鼠灌胃CO.D溶液。③给药：30 min后空白组、模型组灌胃墨汁，其它组小鼠灌胃相应含药墨汁。25 min后处死，剖取小鼠小肠（幽门至盲肠上端），平铺成直线，测量小肠总长度和墨汁推进距离，避免拉伸小肠，影响实验结果。
计算公式：小肠墨汁推进率（%）=墨汁推进距离（cm）/小肠总长度（cm）×100%
2.4.2 小鼠排便实验
分组、给药剂量及方法同“2.4.1”项下实验方法，给药后，记录每只小鼠首次排出黑便的时间、6 h内排出黑便的数量及重量，并进行粪便含水量测定，同时观察粪便性状。含水量测定方法为：将小鼠新鲜粪便置于提前干燥、称重的容器中，称重，于烘箱中干燥至重量不再变化，计算粪便含水量。
计算公式：粪便含水量（%）=
$ \dfrac{M1-M2}{M1}\times 100\text{%} $ 式中：M1为干燥前粪便质量（g），M2为干燥后粪便质量（g）。
2.5 统计学方法
采用SPSS 24统计软件进行数据分析，以均数±标准差（
$ \bar{X} $ ±S）表示计量资料。两两比较采用LSD-t检验，多组比较采用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异显著，P<0.001表示差异极显著。3. 结果与分析
3.1 黑蒜多糖的得率和纯度
精密称量所得黑蒜多糖干燥粉末质量为0.832 g，代入公式计算可得黑蒜多糖的得率为8.32%。以葡萄糖浓度（mg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，可得回归方程为Y=
2.2829 X+0.0764 ，相关系数r=0.9982 ，线性关系较好，代入回归方程计算可得黑蒜多糖的纯度为58.23%。3.2 黑蒜多糖对小鼠体重的影响
从表1可以看出，与空白组相比，各组小鼠体重均正常增长，无显著性差异，表明黑蒜多糖不会对正常小鼠体重产生影响。实验过程中，各组小鼠饮食正常，状态良好，无腹泻等不良反应，为后续实验提供前提保证。
表 1 黑蒜多糖对小鼠体重的影响组别 小鼠小肠墨汁推进实验 排便实验 初始体重
（m/g）最终体重
（m/g）初始体重
（m/g）最终体重
(m/g)空白组 21.28±1.15 22.23±1.19 21.80±1.02 22.90±0.61 模型组 21.20±1.36 22.24±1.22 21.58±1.00 22.64±0.84 阳性组 21.17±1.18 22.31±1.28 21.42±1.01 22.81±0.91 黑蒜多糖
低剂量组21.44±1.32 22.38±1.54 21.98±1.20 23.02±1.20 黑蒜多糖
中剂量组21.06±1.13 22.16±0.77 21.59±1.10 22.38±1.08 黑蒜多糖
高剂量组21.42±1.15 22.54±1.26 21.79±1.29 22.85±0.98 3.3 黑蒜多糖对小鼠小肠墨汁推进的影响
从表2可以看出，与空白组相比，模型组墨汁推进率极显著减小，表明本实验小鼠FC模型造模成功。与模型组相比，黑蒜多糖组小鼠墨汁推进率均显著增大，分别增大了24.75%、56.95%、95.25%，表明黑蒜多糖对FC模型小鼠小肠运动具有促进作用，且成剂量依赖性。
表 2 黑蒜多糖对小鼠小肠墨汁推进的影响组别 碳末推进距离
（l/cm）小肠总长度
（l/cm）墨汁推进率
（%）空白组 28.86±3.25 34.87±1.60 82.90±9.97 模型组 9.60±0.73*** 34.09±2.31 29.50±1.35*** 阳性组 26.94±3.55### 34.15±1.60 79.00±9.92### 黑蒜多糖
低剂量组12.58±1.15### 34.35±1.67 36.80±4.42# 黑蒜多糖
中剂量组16.01±2.06### 34.48±3.18 46.30±4.19### 黑蒜多糖
高剂量组19.95±1.60### 34.66±1.96 57.60±4.06### 注：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，与空白组比较；#P<0.05，##P<0.01， ###P<0.001，与模型组比较。 3.4 黑蒜多糖对小鼠排便的影响
从表3可看出，与空白组相比，模型组小鼠首次排出黑便时间极显著延长，6 h排便粒数显著减少，6 h排便重量极显著减少，粪便含水量极显著降低，粪便呈球形或短椭圆形，部分串联，质地干硬，颜色普遍偏黑，表明本实验小鼠FC模型造模成功。与模型组相比，黑蒜多糖组小鼠首次排出黑便时间均极显著缩短，分别缩短了42.55%、44.99%、45.81%；6 h排便重量显著增加，分别增加了68.42%、78.95%、78.95%；粪便含水量极显著增大，分别增大了29.96%、32.78%和35.82%，粪便呈长椭圆形，质地较软，颜色为深棕色，无腹泻现象；除黑蒜多糖低剂量组外，中、高剂量组小鼠6 h排便粒数有统计学差异，分别增加了31.45%和32.52%。表明黑蒜多糖可能通过增大FC模型小鼠粪便含水量发挥促排便作用，各剂量组间效果差异不明显。
表 3 黑蒜多糖对小鼠排便及粪便含水量的影响组别 首黑便时间
（t/min）6 h排便数
（粒）6 h排便湿重
（m/g）6 h排便干重
（m/g）含水量
（%）空白组 111.50±8.98 16.50±3.51 0.46±0.10 0.22±0.04 52.16±2.53 模型组 241.50±19.54*** 11.13±2.75** 0.19±0.02*** 0.13±0.01*** 32.58±2.35*** 阳性组 121.50±110.81### 15.13±4.09# 0.41±0.12### 0.20±0.06## 50.06±1.83### 黑蒜多糖低剂量组 138.75±10.79### 13.75±2.71 0.32±0.08## 0.19±0.42# 42.34±2.27### 黑蒜多糖中剂量组 132.88±8.34### 14.63±3.66# 0.34±0.10## 0.19±0.05## 43.26±2.68### 黑蒜多糖高剂量组 130.88±9.09### 14.75±3.73# 0.34±0.12## 0.19±0.05## 44.25±6.72### 注：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，与空白组比较；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001，与模型组比较。 4. 讨论
CO.D是一种止泻药，可通过抑制肠道平滑肌上的肠黏膜感受器抑制肠道运动，减慢排便进程，减少排便次数，同时肠内容物与肠粘膜接触时间延长，可促进肠内容物水分的重吸收，降低粪便含水量，是常用的FC小鼠模型造模药[19]。因此，本研究建立CO.D诱导的小鼠FC模型，探究黑蒜多糖的抗便秘作用。实验结果表明，黑蒜多糖可显著促进CO.D诱导的FC模型小鼠小肠蠕动，缩短排便时间，增加粪便含水量，从而发挥抗便秘作用。有研究显示成人每日服用约2 g黑蒜多糖便可达到较好疗效，用量仅为黑蒜的1/10[10]。给药期间小鼠状态良好、体重正常，未产生腹泻等副作用。因此，黑蒜多糖用于FC治疗可有效规避依从性差、副作用明显、疗效不可靠等弊端，前景广阔。此外，有相关研究发现，采用CO.D 10 mg/kg和15 mg/kg灌胃造模（大鼠）都存在停药后恢复的情况[20]，提示我们使用CO.D进行慢性便秘造模，在造模成功后的治疗给药阶段也需要持续用药，以维持药效。目前该便秘模型的建立没有统一标准，后续可对造模时间、造模剂量进行优化，为更深入的黑蒜多糖抗便秘机制研究提供基础。
FC是典型的胃肠动力障碍性疾病，现代研究普遍认为，其发病机制主要与卡哈尔间质细胞（ICCs）数量、功能以及分布异常、肠神经递质水平异常、水通道蛋白表达异常、氧化应激指标失衡、肠道菌群紊乱等有关[21-22]。大蒜多糖主要为果聚糖，占干重的65%，在发酵生成黑蒜的过程中，果聚糖因高温作用大量降解为低聚果糖（FOS）、果糖等小分子糖[23]。FOS在国际营养学界被称作“具有优良难消化性的水溶性膳食纤维”，还是典型的“超强双歧因子”。因其无法被肠道吸收，可被双歧杆菌等益生菌分解利用，短时间内促进双歧杆菌增殖10~100倍，分解生成的有机酸，可有效调节肠道pH，刺激肠道蠕动，促进排便[24]。双歧杆菌还可抑制有害肠道病菌生长、抵抗病原菌感染、产生维生素并促进矿物质吸收以维持肠道健康，有研究表明人体双歧杆菌含量随年龄增长逐渐减少，是老年人易发生便秘的主要原因[25]。因此，需要进一步明确黑蒜多糖的单糖组成、相对分子质量以及结构，为后续抗便秘机制研究提供依据。此外，便秘成因复杂，可结合具体的证型如脾虚、血虚、阳虚、津亏等便秘模型进一步探究黑蒜多糖抗便秘作用的有效性。
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表 1 消痰通腑方的鉴定分析结果
序号 质量 相对时间（min） 分子式 m/z（MS1） 部分特征离子峰 m/z (MS2) 差异(Δ ppm) 名称 来源药材 来源文献 1 174.1115 0.906 C6H14N4O2 175.1193 [M+H]+ 175,158,116 −1.01 精氨酸 黄连*，制半夏 [8,11] 174.1113 0.906 173.1036 [M-H]- 173,131 −2.40 2 192.0617 0.965 C7H12O6 191.0552 [M-H]- 191,173,111 −4.71 奎宁酸 黄连 [8] 3 251.1022 0.996 C10H13N5O3 252.1093 [M+H]+ 252,194,137 0.79 脱氧腺苷 重楼，制半夏 [11-12] 4 192.0281 1.189 C6H8O7 230.9906 [M+K]+ 1.73 柠檬酸 黄连 [12] 192.0276 1.168 191.0203 [M-H]- 191,111,103 3.14 5 332.0767 1.394 C13H16O10 333.0878 [M+H]+ 4.61 没食子酸-3-O-β-D-葡萄糖苷 大黄* [13] 332.0746 1.395 331.0672 [M-H]- 271,169 0.30 6 170.0216 1.396 C7H6O5 171.0289 [M+H]+ 171,155,153 0.29 没食子酸 大黄* [13] 170.0216 1.520 169.0143 [M-H]- 125,111 0.42 7 131.0945 1.508 C6H13NO2 132.1018 [M+H]+ 132,86 −0.76 异亮氨酸 天南星，制半夏 [11,14] 131.0939 1.475 130.0869 [M-H]- −3.84 8 165.079 2.273 C9H11NO2 166.0864 [M+H]+ 166,120 0.60 苯丙氨酸 天南星，制半夏 [11,14] 165.0792 2.238 164.0723 [M-H]- 3.66 9 354.0946 3.752 C16H18O9 353.0874 [M-H]- 353,191 −1.13 绿原酸 黄连* [8] 10 204.0899 4.31- C11H12N2O2 205.0973 [M+H]+ 159,146 0.10 色氨酸 黄连*，制半夏 [8,11] 204.0897 4.207 203.0819 [M-H]- 142,116 −0.69 11 326.1026 4.812 C15H18O8 325.0919 [M-H]- 325,235,145 2.86 对香豆酸-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 12 452.1327 5.06- C21H24O11 475.1211 [M+Na]+ 0.00 儿茶素-O-葡萄糖苷 /表儿茶素-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 452.1319 4.993 451.1239 [M-H]- 451,137 −1.55 13 578.143 5.392 C30H26O12 579.1505 [M+H]+ 0.94 原花青素B2 大黄* [13] 578.1417 5.277 577.1345 [M-H]- 577,289 −1.23 14 290.0797 6.073 C15H14O6 291.0867 [M+H]+ 161 1.37 儿茶素 大黄 [13] 290.0794 5.995 289.0721 [M-H]- 245,203,187 1.04 15 194.0586 6.076 C10H10O4 217.0492 [M+Na]+ 177，145 4.68 阿魏酸 大黄 [13] 16 654.1949 6.449 C33H34O14 653.1871 [M-H]- 653,313,169 −0.77 4-( 4'-羟基苯基) -2-丁酮-O-阿魏酰-没食子酰-葡萄糖苷 大黄 [13] 17 484.0858 6.826 C20H20O14 483.078 [M-H]- 313,169 0.00 没食子酸-O-没食子酰基葡萄糖苷 大黄 [15] 18 164.0470 8.434 C9H8O3 163.0397 [M-H]- 163,155 −2.45 对香豆酸 大黄 [13] 19 564.1492 8.589 C26H28O14 565.1559 [M+H]+ 565,505 1.24 夏佛托苷 天南星 [16] 564.1478 8.556 563.1418 [M-H]- 2.13 20 322.1093 8.578 C19H16NO4+ 323.1163 [M+H]+ 265,189 3.40 格兰地新 黄连 [17] 21 284.0687 8.920 C16H12O5 285.076 [M+H]+ 242 1.05 大黄素甲醚 大黄 [18] 22 564.1871 9.192 C27H32O13 587.1756 [M+Na]+ 356,322 3.58 鼠李糖甘草苷 法半夏 [16] 23 234.0533 9.318 C12H10O5 235.0604 [M+H]+ 222,189 1.28 2-甲基-5-羧甲基-7-羟基色原酮 大黄 [13] 234.0531 9.262 233.0458 [M-H]- 1.29 24 578.1641 9.686 C27H30O14 577.1554 [M-H]- 577,146 −1.55 异佛莱心苷 法半夏 [11] 25 442.0921 9.820 C22H18O10 443.0976 [M+H]+ 393,123 4.81 表儿茶素没食子酸酯 大黄 [13] 442.0901 9.820 441.0824 [M-H]- 0.23 26 550.1704 9.845 C26H18O10 549.1614 [M-H]- 283,239 0 芹糖异甘草苷 法半夏 [10] 27 446.0856 9.912 C21H18O11 469.0733 [M+Na]+ 279,248 −1.71 大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [15] 446.0848 9.845 445.0772 [M-H]- −0.90 28 478.1471 9.978 C23H26O11 479.1551 [M+H]+ 0.63 异莲花掌苷 大黄 [15] 478.1472 9.922 477.14 [M-H]- 313 −0.42 29 310.1058 10.092 C15H18O7 333.0949 [M+Na]+ 1.20 2-O-桂皮-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 310.1055 10.002 355.1035 [M+HCOOH-H]- 345 0.00 30 234.0897 10.684 C13H14O4 235.097 [M+H]+ 235 2.13 2-(2′-羟丙基)-5-甲基-7-羟基色原酮 大黄 [13] 234.0895 10.631 233.0822 [M-H]- 1.29 31 862.1953 10.833 C42H38O20 861.1888 [M-H]- 699,654 0.46 番泻苷 B 大黄 [13] 32 320.0893 11.572 C19H14NO4 321.0991 [M+H]+ 292,234 −1.90 黄连碱 黄连 [19] 33 399.1665 12.363 C22H25NO6 422.1598 [M+Na]+ 350,336,292 4.69 秋水仙碱 天南星 [20] 34 462.1161 12.313 C22H22O11 461.1088 [M-H]- 461,331,169 −0.22 桂皮酸-O-没食子酰-葡萄糖苷 大黄 [9] 35 418.1257 13.394 C21H22O9 417.1188 [M-H]- 255,213 −0.72 异甘草苷 法半夏 [10] 36 1048.5438 14.102 C51H84O22 1071.5336 [M+Na]+ 869,577 −0.93 重楼皂苷G 重楼 [21] 1048.5457 14.078 1047.5386 [M-H]- 0.48 37 408.1422 14.182 C20H24O9 431.1314 [M+Na]+ 306,292 0.23 6-甲氧基酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 408.1424 14.112 407.1352 [M-H]- 0.98 38 432.1053 14.372 C21H20O10 455.0942 [M+Na]+ 455,292 −1.54 芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷 大黄 [13] 432.1060 14.317 431.0989 [M-H]- 1.16 39 1046.5283 14.384 C51H82O22 1047.5356 [M+H]+ 415,172 −1.43 polyphylloside III 重楼 [20] 1046.5282 14.852 1091.5286 [M+HCOOH-H]- 0.55 40 416.1109 14.554 C21H20O9 439.0999 [M+Na]+ 439,336 −0.23 大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄 [13] 416.1104 14.487 415.1032 [M-H]- −0.72 41 286.048 15.273 C15H10O6 287.0552 [M+H]+ 0.74 木犀草素 黄连* [8] 286.0484 15.216 285.0412 [M-H]- 285,215,199 2.20 42 446.1213 15.932 C22H22O10 469.1104 [M+Na]+ 469,283 −0.21 大黄素甲醚-8-O-β-D葡萄糖苷 大黄 [15] 284.0687 15.865 283.0616 [M-H]- 1.41 43 450.1523 17.150 C22H26O10 473.1413 [M+Na]+ 473,230 −1.06 决明柯酮-O-乙酰基葡萄糖苷 大黄 [15] 450.1528 17.097 449.1469 [M-H]- 3.56 44 838.3969 17.208 C42H62O17 837.3886 [M-H]- 661,351 −3.34 甘草皂苷G2 法半夏 [10] 45 822.4012 17.943 C42H62O16 845.392 [M+Na]+ −3.17 甘草酸 法半夏* [10] 822.4031 17.914 821.3959 [M-H]- 351,193 −0.83 46 284.0328 18.384 C15H8O6 283.0257 [M-H]- 239 3.18 大黄酸 大黄 [18] 47 884.4779 19.643 C15H20O3 907.4652 [M+Na]+ 685,292 −1.10 纤细薯蓣皂苷 重楼 [21] 884.4762 19.622 929.4748 [M+HCOOH-H]- −0.43 48 870.4622 19.768 C44H70O17 893.4502 [M+Na]+ 376,251 −0.34 重楼皂苷H 重楼 [21] 870.4607 19.622 915.459 [M+HCOOH-H]- −0.55 49 854.4664 19.773 C44H70O16 877.4557 [M+Na]+ 877,306 −1.31 重楼皂苷II 重楼 [21] 870.4646 19.750 869.4546 [M-H]- 0.69 50 738.4219 19.932 C39H62O13 783.4170 [M+HCOOH-H]- 783,146 −0.26 重楼皂苷VI 重楼 [21] 51 270.0537 20.820 C15H10O5 269.0460 [M-H]- 225,146 1.86 芦荟大黄素 大黄 [18] 52 868.482 22.136 C45H72O16 891.4746 [M+Na]+ 725,415 3.70 薯蓣皂苷 重楼 [22] 868.482 22.104 913.4809 [M+HCOOH-H]- 0.77 53 854.4668 22.323 C44H70O16 877.4572 [M+Na]+ 196,140 0.43 重楼皂苷I 重楼* [21] 854.4655 22.297 899.4609 [M+HCOOH-H]- −1.07 54 254.0577 22.790 C15H10O4 255.0647 [M+H]+ 196 −1.96 大黄酚 大黄 [18] 55 576.4428 27.329 C35H60O6 599.4282 [M+Na]+ 429,355 6.67 胡萝卜苷 天南星* [23] 576.4374 27.263 621.4349 [M+HCOOH-H]- −2.68 注：*表示在水提液中未检测出的化合物 
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