下载:
-
刺梨，又名文先果，为蔷薇科植物单瓣缫丝花（Rosa roxburghii Tratt.）的果实，主产于贵州、云南、广西等省份。具有健脾消食，收敛止泻之功[1]。刺梨含有碳水化合物、维生素[2]、氨基酸[3]、脂肪酸[4]、微量元素[5]等丰富的营养物质，以及委陵菜酸、刺梨酸、刺梨苷、野蔷薇苷[6]、野鸦春酸、刺梨素、槲皮素等黄酮类[7]、三萜类、有机酸类、多酚类[8]、多糖类[9]等活性物质[10]。具有抗氧化[11]、抗菌[12]、降血糖[13]、降血脂[14]、解酒护肝[15]、保护与修复胃溃疡黏膜[16]、抗衰老[17]、抗辐射[18]、抗缺氧[19]、调节机体免疫功能[20]、抗肿瘤[21-22]等作用，食用[23-24]及药用[25]价值极高，目前食品工业及保健品行业应用广泛，药用以民间及民族药应用较广，部分中成药中也有应用。现行标准中刺梨作为药用仅在少数省份中药饮片炮制规范中出现，标准内容基本局限在来源鉴定、性状鉴定上，缺乏质量控制的指标性限定。本实验在新修安徽省中药饮片炮制规范及中药材标准项目的基础上，以现行版《中国药典》（四部）指导原则为依据开展。除特征图谱标准外，显微鉴定、薄层鉴定、常规检查等也作为标准制定的考察内容。
-
分析天平（METTLER TOLEDO公司）；赛默飞U3000系列液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）；赛默飞Vanquish Core系列液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）；色谱柱：赛默飞AcclaimTM120 C18（4.6 mm×250 mm ，5 μm，120Å）、安捷伦ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、依利特C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；薄层色谱自动点样仪及成像系统（瑞士CAMAG公司）。
-
共收集8批次刺梨药材（按CL-01-00X顺序编号），经海军军医大学药学系生药学教研室黄宝康教授鉴定为蔷薇科植物单瓣缫丝花（Rosa roxburghii Tratt.）的果实。刺梨果对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121356-200401，纯度：供薄层鉴别用）；异槲皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111809-201804，纯度：92.9%）；色谱级乙腈（国药集团）。
-
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，0.1%甲酸水溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱，流速为0.8 ml/min，柱温25 ℃，检测波长为360 nm。理论板数按异槲皮苷峰计算应不低于3 000。
表 1 流动相的组成
时间（t/min） 流速（ml/min） A（%） B（%） 0 0.8 8 92 10 0.8 10 90 20 0.8 12 88 40 0.8 14 86 50 0.8 16 84 60 0.8 18 82 63 0.8 12 88 66 0.8 8 92 -
取刺梨对照药材l g，加入80%甲醇溶液50 ml，加热回流2 h，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至干，加水30 ml使溶解，用饱和的正丁醇萃取4次，每次30 ml，合并正丁醇溶液，蒸干，加甲醇定容至25 ml量瓶中，作为对照药材参照物溶液。另取异槲皮苷对照品加甲醇溶解，制成每1 ml含40 μg 的溶液，作为对照品参照物溶液。再精密量取对照药材参照物溶液2 ml，对照品参照物溶液1 ml，混匀，得混合参照物溶液，微孔滤膜过滤，即得。
-
取刺梨粉末约2 g，加入80%甲醇溶液50 ml，加热回流2 h，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至干，加水30 ml使溶解，用饱和的正丁醇萃取4次，每次30 ml，合并正丁醇溶液，蒸干，加甲醇定容至25 ml量瓶中，再精密量取2 ml及对照品参照物溶液1 ml，混匀制成供试品溶液，即得。
-
分别精密吸取上述参照物溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，即得（图1～图4）。
图 1 刺梨对照药材色谱图
图 2 刺梨供试品色谱图
图 3 异槲皮苷色谱图
图 4 空白溶剂
-
精密称取纯度为97.2%的异槲皮苷对照品适量置50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液储备液，分别精密量取一定量的对照品储备液稀释成浓度分别为0.0371、0.0743、0.1114、0.1485、0.1857、0.2228、0.3710 mg/ml的对照品溶液，注入液相色谱仪，测定含量，以浓度为纵坐标、峰面积为横坐标得标准曲线Y=905.02X−0.360 9 (r=0.999 7)。
-
精密量取混合参照物溶液20 μl注入液相色谱仪，测定加入异槲皮苷对照品峰面积，平行测定5次，计算保留时间及峰面积RSD，分别为0.1%、0.1%。精密量取混合参照物溶液20 μl注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、16、24 h测定加入异槲皮苷对照品峰面积，计算保留时间和峰面积RSD，分别为0.3%、1.0%。
-
测定8批样品，记录加入对照品及特征峰的相对保留时间，计算相对保留时间偏差，结果发现对照药材及样品共有5个峰，加入异槲皮苷对照品后，显示6个特征色谱峰（表2、表3），根据保留时间，选择相对保留时间为0.52、0.54、0.56、0.89、0.93时的色谱峰为特征色谱峰，可控制偏差范围±5%。参考《中国药典》（2020年版）四部通则指导原则的有关规定，拟定：供试品色谱中应呈现6个特征峰，并应与对照药材参照物色谱峰中的5 个特征峰保留时间相对应，另有1峰应与加入的异槲皮苷对照品参照物峰保留时间相对应（图5）。
表 2 对照药材特征峰相对保留时间
序号 峰 保留时间（t/min） 相对保留时间 1 峰1 32.419 0.52 2 峰2 34.077 0.54 3 峰3 35.339 0.56 4 峰4 55.781 0.89 5 峰5 58.434 0.93 6 异槲皮苷 62.711 1.00 表 3 样品共有峰相对保留时间（n=8）
样品 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 异槲皮苷峰 对照药材 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-001 0.52 0.54 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-002 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-003 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-004 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-005 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-006 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-007 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-008 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 平均值 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 RSD（%） 0.8 0.9 0.9 0.0 0.0 0.0 
图 5 刺梨特征图谱
-
分别采用赛默飞AcclaimTM120 C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）、安捷伦ZORBAX SB-C18（5 μm， 4.6 mm×250 mm）、依利特C18（5 μm ，4.6 mm×250 mm）色谱柱考察色谱柱的影响；柱温在20、25、30 ℃考察柱温的影响；流速为0.8、1.0、1.2 ml/min考察流速的影响；以及不同实验室考察检测环境变化的影响。根据测定数据分析，色谱柱、柱温、流速、不同实验室（表4）等，对特征峰相对保留时间具有一定的影响，其中，对峰1、峰2、峰3影响较大，但各色谱峰的影响RSD小于5%，属于可接受范围。
表 4 不同色谱条件对保留时间的影响(n=3)
色谱条件 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 异槲皮苷 色谱柱 赛默飞 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 依利特 0.50 0.53 0.54 0.88 0.92 1.00 安捷伦 0.49 0.50 0.53 0.88 0.93 1.00 平均値 0.50 0.53 0.55 0.88 0.93 1.00 RSD(%) 2.5 3.9 3.1 0.5 0.5 0.0 柱温（t/ ℃) 20 0.53 0.56 0.58 0.89 0.94 1.00 25 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 30 0.49 0.52 0.54 0.89 0.92 1.00 平均値 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 RSD(%) 3.3 3.1 3.0 0.0 0.9 0.0 流速（ml/min） 0.8 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 1.0 0.48 0.51 0.53 0.88 0.92 1.00 1.2 0.46 0.49 0.52 0.89 0.91 1.00 平均値 0.49 0.52 0.54 0.89 0.92 1.00 RSD(%) 5.1 4.8 4.0 0.5 0.9 0.0 实验室 209室 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 703室 0.51 0.53 0.56 0.89 0.93 1.00 平均値 0.52 0.54 0.57 0.89 0.93 1.00 RSD(%) 1.0 1.8 1.9 0.0 0.0 0.0 -
刺梨以干燥果实入药，药材整体上呈扁球形。表面黄褐色，贮藏时间和干燥方式对色泽稍有影响，新鲜果实直接烘干颜色稍浅，贮藏较久颜色加深，密被针刺，针刺脱落处成点状凸起，有的并具褐色斑点；先端常有黄褐色宿存的花萼5瓣，亦披针刺。种子多数，着生于萼筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，质硬，种仁乳白色。气微香，味酸、涩、微甜[26]。
-
粉末呈棕色至棕褐色，石细胞较多，形状多样。非腺毛为单细胞毛，壁不甚厚。纤维管胞长梭形，成群。草酸钙簇晶偶见，角多钝。胚乳细胞成片，内含脂肪油滴。
-
薄层鉴别是中药鉴定常用的鉴别方法，多国药典采用，实验参考有关中成药制剂制定薄层鉴别方法[27]，具体方法：取本品粉末1 g，加水50 ml，超声处理15 min，取上清液用盐酸饱和的乙醚振摇提取2次（每次20 ml），合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取刺梨果对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10 μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-醋酸乙酯-甲酸（6:3:1 )为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
-
检查项依据《中国药典》通则分别测定了所有收集批次刺梨的水分及总灰分。水分测定采用通则0832第二法测定，8批次刺梨水分在10.02%～13.77%之间。以统计学方法分析数据，水分限度以
$\mu =\bar {\rm{x}} + ts/\sqrt {\rm{n}} + {\rm{MU}}$ （$\bar {\rm{x}} $ 是样本的平均数；t是置信水平为99%的t检测值(单尾)；s是样本的标准偏差；n是样本的批数；MU是不确定度评估。以下公式注同）计算，结果为14.20%，故拟定水分不得过14.0%。总灰分采用通则2302所述方法测定，8批刺梨的总灰分在3.28%～3.51%之间。以统计学方法分析数据，总灰分限度以公式$\mu =\bar {\rm{x}} + ts/\sqrt {\rm{n}} + {\rm{MU}}$ 计算，由实验数据及统计计算得灰分的限度为3.78%，考虑到样本量以及前期实验测定的结果，拟定总灰分不得过5.0%。 -
照醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2020年版四部 通则2201）项下的冷浸法测定，用稀乙醇作溶剂，共测定8批次刺梨浸出物，浸出物在21.6%～51.5%之间。以统计学方法分析数据，浸出物限度以公式
$\mu =\bar {\rm{x}} - ts/\sqrt {\rm{n}} -{\rm{MU}} $ ，结果为20.5%，故拟定浸出物不得少于20.0%。 -
刺梨味酸、涩、甘，归肝、脾经。具有健胃、消食，解暑之功。用于食积饱胀，肠炎腹泻等。用法为内服，生食或煎汤，3~5枚。贮藏于通风干燥处，防蛀[26]。
-
中药质量标准的制定既需要来源鉴定、性状鉴定、检查项等常规的鉴别内容，还需要保证中药药效的物质限度，目前常用的质量控制方法包括有效成分的指纹图谱、特征图谱、一测多评[28]、质量标志物Q-Marker质量控制等。中药Q-Marker通过药效、功效成分、质量稳定与可测性等，全方位控制中药质量，但是Q-Marker质量控制对所含化学成分能够明确相关功效的物质要求较高[29]，目前刺梨中具有专属性强、药效相对明确物质尚不明确，通过Q-Marker质量控制有一定难度。有效成分指纹图谱、一测多评等质量控制方法需要明确刺梨中的专属成分，刺梨酸、刺梨苷等是具有专属性强、结构明确、具有一定活性的物质，可用作质量控制的标志性成分，但符合中药标准物质条件的产品，权威部门尚不能提供，将会对药材的上市检测带来不便。刺梨中含有丰富的黄酮类成分包括槲皮素、山奈素等[10]，具有较明确的药理活性，但是实验过程中槲皮素等成分液相色谱行为表现较差，检出率、重现性、稳定性以及提取方法的复杂程度等不适于特征图谱标准的制定，故选择结构类似，中国食品药品检定研究院可以足量供应的异槲皮苷作为内标对照品。实验过程中还考察了色谱柱、流速等对色谱峰的影响，色谱条件的变化对出峰数量、出峰顺序无影响，对相对保留时间有一定的影响，其中色谱柱和流速等对峰1、2、3影响稍大，但RSD小于5%，重现性、稳定性良好，属于可接受范围。
实验采用全波长检测，除分析360 nm黄酮类为主的成分特征峰之外，还考察了刺梨苷、野蔷薇苷为主的三萜皂类常用检测波长203 nm下的特征色谱峰行为，近末端吸收情况下溶剂干扰较大、色谱峰形较差、干扰峰较多[30]，且特征化合物刺梨苷等对照品无法从法定机构获得，故未选择此条件下的特征图谱用于标准制定。针对中药功效成分复杂、结构不明确等特点，从整体上控制质量是保证药效的有效途径之一。薄层色谱法可充分利用展开后斑点信息[31]，全面展示中药成分的差异，且操作简单、快速，对仪器要求不高，结合特征图谱等可以更全面地整体性控制中药的质量，因此，实验中增加了药材的薄层色谱鉴别。
-
实验采用对照药材建立对照特征图谱，通过加入结构明确的对照品标定特征对照峰并对特征成分进行说明，检出的特征峰数，包含成分不明确的色谱峰，在标准中要求供试品能够检出与对照药材相一致的色谱峰。同时参考相关文献规范了性状鉴别、增加了显微鉴别、薄层鉴别，对常规检查项也做了相应的检测，制定了限度标准。研究结果在安徽省中药饮片炮制规范及安徽省中药材标准新修项目的基础上完成，为相关地方标准的制定提供了实验依据。
Study on quality standard and characteristic chromatogram for Hirtula Roses
-
摘要:
目的 制定刺梨药材质量标准，用于刺梨的生产、监督、流通及使用等各环节的质量控制。 方法 参照《中国药典》通用检测方法及相关指导原则分别制定刺梨的水分、总灰分、浸出物限度；采用特征图谱以及薄层色谱法控制刺梨整体质量。 结果 刺梨特征图谱中应呈现6个特征峰，并应与对照药材参照物色谱峰中的5个特征峰保留时间相对应，另有1峰应与加入的异槲皮苷对照品参照物峰保留时间相对应。水分不得过14.0%，总灰分不得过5.0%，醇溶性浸出物不少于20.0%。 结论 实验所建立的刺梨质量标准符合国家有关中药质量标准制定要求，能够以标准的形式对刺梨的质量进行控制。 Abstract:Objective To establish the quality standards of Hirtula Roses for the quality control of production, supervision, circulation and application. Methods The moisture content, total ash, ethanol extract content and characteristic chromatogram of Rosa roxburghii Tratt. were determined according to the related determination method in Ⅳ-Part of Chinese Pharmacopeia 2020. Results There should be 6 characteristic peaks in the characteristic chromatogram of Rosa roxburghii Tratt., which should correspond to the retention time of 5 characteristic peaks in the reference chromatogram of the standard herbs, and another peak should correspond to the retention time of the reference chromatogram of isoquercitrin. The moisture content of Rosa roxburghii Tratt. should be less than 14.0%; the total ash content should be less than 5.0%; the ethanol extract content should be more than 20.0%. Conclusion According to the experimental results, the quality standard of Rosa roxburghii Tratt. is conformed to the national requirements of quality standards for traditional Chinese medicine, which could provide a reference for the quality control of Hirtula Roses. -
Key words:
- Rosa roxburghii Tratt. /
- characteristic chromatogram /
- quality standard
-
1. 电离辐射的危害
随着全球经济的高速发展和科技的不断进步，核工业在军事、医疗等领域得到全面发展，但伴随而来的是对从业人员和附近居民造成严重的辐射危害。
辐射是指能量以电磁波或粒子的形式向外传播的现象，可分为电离辐射和非电离辐射。拥有足够高能量而使原子电离的辐射为电离辐射，它包括X射线、α射线、β射线、γ射线等，具有潜在的致癌性。非电离辐射能量较低，不会电离物质而会使物质内粒子运动，包括红外线、紫外线和微波等[1]。
辐射可引起全身性的放射病，几乎所有系统、器官均可发生病理性改变，其中以神经系统、消化系统和造血器官的改变最为明显，会诱发心血管疾病、糖尿病甚至癌突变。辐射对机体的损伤可分为急性和慢性放射性损伤。短时间内接受高剂量的照射，可引起机体的急性损伤，常见于核事故和放射治疗患者。剂量低于1 Gy时少数会出现轻微症状，剂量在1~10 Gy时，会出现造血型急性放射病；剂量超过10 Gy，会出现高致死率[2]。而长期接受超剂量的全身或局部照射，可引起慢性放射病，如皮肤损伤、造血障碍、白细胞减少、生育功能受损等。此外，辐射还能直接导致视力下降、视网膜脱落，诱发孕妇流产、不育、畸胎、儿童发育不足等[3]。
2 抗辐射天然产物的作用机制[4]
抗辐射药物是指在辐射前或后给予药物预防或治疗，可减轻或修复辐射损伤的药物。现有的抗辐射化学合成药物主要包括细胞因子、含硫化合物和激素类药物[5]，因其毒副作用较大而应用受限，近年来天然产物因其毒副作用小、多成分多靶点的独特优势受到广泛的关注。目前认为抗辐射天然产物的作用机制主要有以下4个方面。
2.1 防护DNA损伤
辐射损伤可破坏DNA分子的结构与功能，导致DNA碱基破坏、DNA分子间交联、DNA双链或单链断裂、糖基破坏等。此外，辐射还可导致细胞周期改变以及DNA合成抑制，直接影响细胞增殖。抗辐射天然产物可通过减轻或抑制辐射致细胞周期的缩短，避免或修复DNA损伤而起辐射防护作用。
2.2 清除自由基
人体产生的80%自由基是由水分子组成的。辐射可引起水分子生成强活性的氧化自由基，主要包括·OH、
${\rm{O}}^-_2 $ 、H2O2、·NO等，其中，·OH氧化性最强，可导致组织细胞产生脂质过氧化物[6]。人体由于自由基的产生造成的破坏主要有3个方面：破坏细胞膜；使血清抗蛋白酶失去活性；损伤基因导致细胞变异，如自由基和生物大分子的结合，导致DNA主链断裂或碱基破坏，通过氧化性降解使得多糖链断裂，形成脱氢自由基，破坏细胞膜上的多糖结构[7]。现代研究表明，大多数抗辐射天然产物具有清除多种自由基作用，能降低氧化酶活性，抑制细胞过氧化物的产生。2.3 保护免疫系统
辐射主要损伤骨髓、胸腺和脾脏等免疫器官以及淋巴细胞等。崔玉芳等[8]发现辐射对免疫系统的损伤主要表现为两个特点——早期损伤严重和后期恢复缓慢。在辐射早期脾脏T、B淋巴细胞数量迅速减少，丝裂原反应明显降低，而在受照射1年后，小鼠的免疫组织和外周血淋巴细胞凋亡率与正常水平相比仍较高，小鼠T淋巴细胞免疫功能仍未恢复。促进淋巴细胞增殖，抑制胸腺和脾脏细胞凋亡等是抗辐射损伤的有效途径。
2.4 保护造血系统
造血组织是辐射的敏感组织，机体受到辐射后，造血细胞会出现功能低下甚至死亡现象，其中，造血干细胞、粒系祖细胞、红系祖细胞是辐射攻击的主要靶细胞，外周血细胞的数量随着照射剂量的增加而减少，其形态和功能也会随之发生改变[1]。因此，改善造血微环境，促进白细胞增殖，修复骨髓造血功能等有助于保护造血系统，修复辐射损伤。
3. 抗辐射天然产物
3.1 多糖类化合物
天然多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。它们是一类具有免疫调节、抗肿瘤、抗辐射、抗炎、抗疲劳、抗衰老作用的生物大分子[9]。关于多糖的抗辐射作用的机制尚不清楚，一般认为与多糖的抗氧化，对造血系统的保护，引起免疫系统的效应增强以及诱导产生某些细胞因子等作用有关。
3.1.1 植物多糖
研究表明，大多数植物多糖有较为显著的抗辐射作用，能提高辐射诱导损伤的防护能力，改善辐射诱导的氧化损伤。其辅助保护辐射损伤的作用机制复杂，一般推测与其修复DNA损伤、消除自由基、增强免疫功能等有关[10]。张乃珣等[11]研究发现，酸性黑木耳多糖(AAP)和红松球果多酚的联合使用可以有效地清除体内自由基，降低自由基对体内DNA造成的损伤，显著提高对60Co γ射线诱导氧化损伤的防护能力。此外，白海娜等[12]发现原花青素与黑木耳多糖（AAP-4）同样有协同防护辐射诱导氧化损伤的作用。徐俊杰等[13]研究山药多糖对低强度连续微波辐射致小鼠免疫系统功能损伤的保护作用，发现正常动物组与辐射损伤组相比，不同剂量(200、400、800 mg/kg)的山药多糖可提高巨噬细胞的吞噬指数、T淋巴细胞的增殖刺激指数和血清IgG水平，并降低血清IL-4水平。表明山药多糖能明显改善低强度连续微波辐射对小鼠免疫系统的损害。胡淼等[14]报道，预先给药黑大蒜多糖（150~600 mg/kg）可减轻X射线辐射对小鼠免疫器官和全血白细胞、血小板的影响，提高脾脏的代偿性造血增殖能力，提高抗氧化酶水平，具有较好的辐射防护作用。Zhang等[15]发现大黄多糖(RTP)通过调控Nrf2及其下游蛋白HO-1，显著降低细胞凋亡和炎症因子，从而显著改善辐射诱导的肠道损伤。
3.1.2 动物多糖
国内外学者从动物体内提取出不同种类的多糖，尤其是海洋动物，如虾蟹动物的甲壳质、河蚌多糖、鲍鱼多糖等，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗辐射等生物活性[16]。
3.1.3 微生物多糖
研究发现微生物中，尤其生活在高压、高辐射环境中的藻类，其多糖有着较为特殊的结构与生理特性，大多有较好的抗辐射效果。Kim等[17]在探讨低分子量岩藻多糖（LMF）对中波紫外线诱导的光老化的保护作用时发现，持续15周的中高剂量（2.0、1.0 mg/cm2）LMF治疗可对受到中波紫外线照射的小鼠光老化起到明显的保护作用，可抑制皱纹形成，皮肤水肿以及中性粒细胞在光老化病灶上的聚集。杨凯业等[18]报道称铁皮石斛多糖、褐藻多糖、灵芝多糖、竹荪多糖在50 mg/L的质量浓度下的复合作用可抑制紫外线辐射诱导的皮肤细胞光老化作用。
3.2 多酚类化合物
植物多酚是广泛存在于植物体内的一类次生代谢产物，包括黄酮类、花色苷类和酚酸类。研究表明，多酚类化合物含有多个酚羟基，具有显著的清除自由基能力，能减轻自由基对机体的伤害，从而起到辐射防护作用[19]。
Lekmine[20]等评价用阿尔及利亚南部特有植物Astragalus gombiformis Pomel地上部分制备的丁醇提取物的药理活性，采用防晒系数(SPF)等评价Astragalus gombiformis Pomel的光保护作用和抗氧化能力，结果表明提取物（SPF=37.78±0.85，SPF值>30的皮肤保护产品被认为是有效的紫外线辐射过滤器）具有良好的紫外线吸收能力，推测主要与其中的黄酮类和酚酸类化合物（主要为水飞蓟素、迷迭香酸、槲皮苷和山柰酚）的紫外吸收能力和抗氧化防御能力有关，具有潜在的辐射防护能力。
3.2.1 黄酮类化合物
黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物是一类从中草药中提取的天然产物，被认为是一种有效的抗氧化剂，可以调控炎症介质的调节酶或转录因子，通过与DNA的相互作用影响氧化应激，增强基因组稳定，具有神经保护和辐射保护作用[21]。
金银花素(5,7-二羟基黄酮)是从蜂胶、蜂蜜和几种植物中提取的一种黄酮类化合物。Mansour等[22]发现给药金银花素(50 mg/kg）可提高受5 Gy红外线照射雄性Wister大鼠大脑中丙二醛(MDA)水平和半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性，这提示金银花素具有辐射致脑损伤的神经保护作用。Kale等[23]通过组织病理评估，显示槲皮素可显著减少辐射诱导的神经元变性和炎症浸润，揭示了槲皮素对辐射致脑损伤的神经保护作用。
Li等[24]证实芹菜素（4′,5,7-三羟基黄酮）能够一定程度上修复UVB诱导的人表皮角质形成细胞(HEKs)的毛细血管扩张性共济失调的异常突变，从而抑制HEKs细胞凋亡和坏死，表明芹菜素对中波紫外线损伤的HEKs具有新型的保护作用。Prasad等[25]报道水飞蓟宾（silibinin）可以防止中波紫外线诱导的胸腺嘧啶二聚体的形成，通过增加抑癌基因p53水平进而促进DNA修复和（或）启动受损细胞的凋亡。
曲克芦丁（TRX）是一种黄酮类化合物，广泛存在于茶叶、咖啡、谷类食品、各种水果和蔬菜中，具有抗辐射作用，Panat[26]对其清除自由基的能力和抗细胞凋亡活性进行了系统的研究。TRX能清除超氧物、NO和其他模型稳定的自由基，从而保护受辐照的细胞。
有些英国科学家研究发现，每天喝两杯绿茶、吃一个橘子，就可以帮助“电脑族”们抵御计算机辐射[27]。而儿茶素类化合物作为茶叶中的主要功能成分，具有显著的抗辐射作用。茶树中儿茶素类化合物主要包括，儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯及表没食子儿茶素没食子酸酯8种单体。其中，表没食子儿茶素没食子酸酯生理活性较为突出，具有抗氧化性和抗细胞凋亡活性，可预防不同刺激对组织的损伤。Korystova等[28]研究发现在对辐射诱导的大鼠主动脉损伤的预防作用中，发现红茶比绿茶更加有效，即使浓度低于1 g/100 ml的红茶也能够有效预防红外线对主动脉造成的损伤。红茶中的儿茶素含量明显低于绿茶，但两种茶中的黄酮醇含量几乎相等。儿茶素、表没食子儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯可增加大鼠主动脉的氧化应激，而黄酮醇可降低辐射诱导的氧化应激。因此，红茶药效的提高是由于儿茶素含量的降低使黄酮醇的正向调节作用更大程度地得到发挥所致。
3.2.2 酚酸类化合物
酚酸类化合物系指具有多羟基的芳香羧酸类化合物，主要以糖、酯以及有机酸的形式存在于植物中，现代研究表明酚酸类化合物能够清除体内多种自由基，具有良好的抗氧化活性和潜在的辐射防护作用。
Milton等[29]报道，鱼腥草细胞培养物的甲醇提取物因细胞产生酚类次生代谢物而具有潜在的光保护作用，结果显示鱼腥草细胞的甲醇提取物(310～2500 g/ml)能够显著提高受紫外线照射的3T3-Swiss白化成纤维细胞活力。提取物的LC-MS化学分析表明，其总酚和总酚酸含量（主要为没食子酸和毛蕊花苷）较高，具有特征的紫外吸收峰(第一和第二波段的峰值分别为294和330 nm)，能够抵消紫外线对皮肤的有害影响。
Abozaid等[30]报道肉桂酸纳米颗粒可作为一种辐射诱导胰腺炎的氧化还原信号通路的调节剂，首先用I-精氨酸和γ射线诱导大鼠患急性胰腺炎，口服肉桂酸纳米颗粒(CA-NPs)后，急性胰腺炎的严重程度及血清淀粉酶和脂肪酶水平均降低。同时，胰腺组织的MDA水平显著降低，谷胱甘肽的消耗显著恢复，caspase-3水平降低，可明显改善胰腺组织损伤或凋亡。因此，肉桂酸纳米颗粒对辐射诱导的急性胰腺炎具有较好的治疗潜力。Liu等[31]研究发现姜黄素（Cur）对长波紫外线辐射诱导的人皮肤成纤维细胞（HDFs）光老化具有一定的保护作用。Zhang等[32]发现白藜芦醇通过激活Sirtuin1 (Sirt1，组蛋白去乙酰化酶家族成员之一，可减轻炎症损伤)减轻辐射诱导的小鼠肠道损伤。周瑞芳等[33]研究表明，丹酚酸B可减轻γ射线辐射诱导的造血系统损伤和骨髓细胞的DNA及蛋白质的减少，恢复小鼠免疫系统的辐射损伤，具有显著的抗γ射线辐射作用。
3.2.3 花色苷
花色苷是花青素和糖以糖苷键结合而成的一种化合物，广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，起到保护植物抗氧化的作用。其抗氧化和消除自由基能力可防护不同射线辐射，能够发挥独特的生理效应。
Fernandes等[34]发现花色苷家族成员（矢车菊色苷、锦葵色苷及其衍生色素）具有促进皮肤维持健康的活性，研究表明大部分化合物能够抑制金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢菌菌株的生长繁殖，减少HEKs和HDF活性氧的产生，抑制皮肤降解酶的活性且无细胞毒性作用，具有一定的紫外线过滤作用。
Targhi等[35]研究黑桑花色苷对大鼠肝组织和骨髓细胞的辐射防护作用，以 60Co γ射线远距放射（3 Gy和6 Gy）建立大鼠辐射损伤模型，随后腹腔注射200 mg/kg的黑桑花色苷，结果显示黑桑花色苷可降低大鼠肝脏MDA和SOD的水平，降低γ射线照射对大鼠骨髓细胞和肝脏的遗传毒性和细胞毒性，有潜在的辐射保护作用。
3.3 皂苷类化合物
皂苷（saponin）类化合物是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，存在于人参、桔梗、刺五加等许多中草药中，在增强免疫、抗肿瘤、抗炎等方面具有显著的生物活性。研究表明人参皂苷的抗辐射机制与清除自由基、抗氧化活性，与其对心血管系统、免疫系统的保护作用以及对细胞凋亡的抑制作用有关[36]。
Wen[37]等研究黄芪甲苷对中波紫外线诱导的大鼠真皮成纤维细胞早衰的抗光老化作用，结果显示黄芪甲苷不仅能通过激活细胞外调解蛋白激酶ERK和丝裂原活化蛋白激酶p38信号抑制中波紫外线诱导的胶原-I的降解，还通过激活细胞自噬增加胶原-I的积累，从而保护中波紫外线诱导的光老化细胞，表明黄芪甲苷在抗光老化治疗中的潜在优势。
Wang等[38]分析柴胡皂苷-d (SSd)对肝癌细胞自噬活性和放射敏感性的影响，SSd通过抑制mTOR磷酸化促进肝癌细胞自噬，增加辐射诱导的肝癌细胞凋亡并且抑制肝癌细胞的增殖，为肝癌的放射增敏治疗提供了一种可能的途径。
Kim等[39]研究知母皂苷A-III（TA-III）对中波紫外线诱导的HEKs和HDF侵袭效应的保护作用时发现，TA-III在非细胞毒性剂量下（50 nmol/L）以剂量依赖的方式抑制中波紫外线诱导的环氧合酶-2（COX-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）转录和蛋白表达水平，降低中波紫外线诱导的原代皮肤细胞的侵袭，组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和COX-2在HEKs中的过度表达，表明其具有光保护剂的开发潜力。
3.4 其他
除了上述多糖类、多酚类以及皂苷类化合物，天然产物中的许多其他化合物同样具有良好的辐射防护作用，包括维生素类、蛋白类、无机成分、稀有元素等。
Rostami等[40]研究发现预先摄入硒和维生素E能够对X射线辐射引起的遗传损害起到一定的防护作用。段一凡等[41]报道茶叶籽不饱和脂肪酸对中波紫外线诱导的HEKs损伤具有保护作用。Jaisin等[42]研究发现胡椒碱（10～40 µmol/L）预处理可抑制中波紫外线诱导的炎症信号通路，减弱HEKs的细胞毒性并且抑制其凋亡。这提示胡椒碱的抗炎作用能保护HEKs免受中波紫外线辐射的损伤，可作为一种紫外线辐射诱导皮肤炎症的有效治疗手段。
4. 结语
近年来，国内外越来越重视辐射损伤的防护，抗辐射药物的寻找也变得十分紧迫。而与传统的化学合成药物相比，天然来源的药物具有活性高、选择性强、毒副作用小等优点，作为抗辐射药物有着广阔的开发前景。但是抗辐射天然产物的筛选方法耗时耗力，因此建立高通量、高专属性的抗辐射天然产物筛选方法意义重大。此外，对已有的天然产物进行结构改造，以期获得抗辐射活性更高或毒副作用更小的衍生物以及提高抗辐射天然产物的提取纯化效率等皆是未来抗辐射天然产物研究的重点和难点。
-
表 1 流动相的组成
时间（t/min） 流速（ml/min） A（%） B（%） 0 0.8 8 92 10 0.8 10 90 20 0.8 12 88 40 0.8 14 86 50 0.8 16 84 60 0.8 18 82 63 0.8 12 88 66 0.8 8 92 
下载: 导出CSV
表 2 对照药材特征峰相对保留时间
序号 峰 保留时间（t/min） 相对保留时间 1 峰1 32.419 0.52 2 峰2 34.077 0.54 3 峰3 35.339 0.56 4 峰4 55.781 0.89 5 峰5 58.434 0.93 6 异槲皮苷 62.711 1.00
下载: 导出CSV
表 3 样品共有峰相对保留时间（n=8）
样品 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 异槲皮苷峰 对照药材 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-001 0.52 0.54 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-002 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-003 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-004 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 CL-01-005 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-006 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-007 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 CL-01-008 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 平均值 0.52 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 RSD（%） 0.8 0.9 0.9 0.0 0.0 0.0
下载: 导出CSV
表 4 不同色谱条件对保留时间的影响(n=3)
色谱条件 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 异槲皮苷 色谱柱 赛默飞 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 依利特 0.50 0.53 0.54 0.88 0.92 1.00 安捷伦 0.49 0.50 0.53 0.88 0.93 1.00 平均値 0.50 0.53 0.55 0.88 0.93 1.00 RSD(%) 2.5 3.9 3.1 0.5 0.5 0.0 柱温（t/ ℃) 20 0.53 0.56 0.58 0.89 0.94 1.00 25 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 30 0.49 0.52 0.54 0.89 0.92 1.00 平均値 0.51 0.54 0.56 0.89 0.93 1.00 RSD(%) 3.3 3.1 3.0 0.0 0.9 0.0 流速（ml/min） 0.8 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 1.0 0.48 0.51 0.53 0.88 0.92 1.00 1.2 0.46 0.49 0.52 0.89 0.91 1.00 平均値 0.49 0.52 0.54 0.89 0.92 1.00 RSD(%) 5.1 4.8 4.0 0.5 0.9 0.0 实验室 209室 0.52 0.55 0.57 0.89 0.93 1.00 703室 0.51 0.53 0.56 0.89 0.93 1.00 平均値 0.52 0.54 0.57 0.89 0.93 1.00 RSD(%) 1.0 1.8 1.9 0.0 0.0 0.0
下载: 导出CSV
-
[1] 贵州省食品药品监督管理局. 贵州省中药饮片炮制规范(2005年版)[S]. 贵州科技出版社, 贵阳: 2005, 150-151. [2] 朱志红, 伍柏坚, 郑荣波, 等. 刺梨及果脯的维生素C分析研究[J]. 饮料工业, 2021, 24(2):40-44. [3] 鲁敏, 安华明, 赵小红. 无籽刺梨与刺梨果实中氨基酸分析[J]. 食品科学, 2015, 36(14):118-121. [4] 张峻松, 张世涛, 黄鸿勋, 等. 刺梨果中多元酸和高级脂肪酸的分析研究[J]. 食品与药品, 2007, 9(6):25-27. doi: 10.3969/j.issn.1672-979X.2007.06.009 [5] 李跃红, 陈露, 冉茂乾, 等. 基于主成分分析的刺梨中微量元素的评价[J]. 农产品加工, 2020(13):46-49,54. [6] 李齐激, 南莹, 秦晶晶, 等. 药食两用植物刺梨的化学成分研究[J]. 中国中药杂志, 2016, 41(3):451-455. [7] 刘英, 张丽艳, 罗君, 等. 响应面法优化刺梨总黄酮提取工艺[J]. 食品研究与开发, 2018, 39(2):51-55. [8] 谭登航, 王鹏娇, 张硕, 等. 刺梨不同药用部位中鞣花酸的含量测定及其醇提物的体外抗氧化活性研究[J]. 中国药房, 2019, 30(9):1236-1240. [9] 付阳洋, 杨敏, 汤陆扬, 等. 响应面优化无籽刺梨多糖提取工艺及抗氧化活性研究[J]. 食品与发酵科技, 2021, 57(2):66-72. [10] 付阳洋, 刘佳敏, 卢小鸾, 等. 刺梨主要活性成分及药理作用研究进展[J]. 食品工业科技, 2020, 41(13):328-335,342. [11] 安雪菲, 但汉龙, 罗旭璐, 等. 无子刺梨的体内外抗氧化活性及化学成分分析[J]. 西南林业大学学报(自然科学版), 2022, 42(6):1-6. [12] 梁梦琳, 李清, 龙勇兵, 等. 刺梨的化学成分鉴定及其抗菌活性[J]. 贵州农业科学, 2019, 47(5):10-13. doi: 10.3969/j.issn.1001-3601.2019.05.003 [13] 陈小敏, 谭书明, 黄颖, 等. 刺梨汁对Ⅰ型糖尿病小鼠的降糖作用[J]. 现代食品科技, 2019, 35(8):13-20. [14] 崔俊英, 甘露, 万为人, 等. 刺梨汁对不同时期高脂模型小鼠的降血脂作用[J]. 公共卫生与预防医学, 2014, 25(1):7-10. [15] 周宏炫, 黄颖, 谭书明, 等. 刺梨多酚对急性酒精中毒大鼠的解酒和护肝作用[J]. 食品科学, 2021, 42(17): 163-169. [16] 郑波, 秦建设, 张薇. 刺梨汁对实验性胃溃疡大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛及前列腺素E2的影响[J]. 中华中医药学刊, 2017, 35(4): 991-993. [17] 刘思彤, 尹日凤, 韦玥吟, 等. 刺梨预防D-半乳糖诱发小鼠皮肤衰老的作用研究[J]. 食品研究与开发, 2020, 41(9):1-5. doi: 10.12161/j.issn.1005-6521.2020.09.001 [18] 郝明华, 徐萍, 李亚娜, 等. 刺梨黄酮对辐射损伤骨髓细胞周期的影响[J]. 新乡医学院学报, 2016, 33(12):1044-1046. [19] 丁晨晨, 刘明皓, 赵玉娟, 等. 刺梨苷抗大鼠急性高原缺氧作用研究[J]. 临床医药文献电子杂志, 2017, 4(96):18828. doi: 10.3877/j.issn.2095-8242.2017.96.011 [20] 李梦云, 邱荣超, 杨建平, 等. 刺梨提取物对小鼠免疫器官指数 血液指标及抗氧化功能的影响[J]. 中国兽医杂志, 2019, 55(9):51-54. [21] 黄姣娥, 江晋渝, 罗勇, 等. 刺梨三萜对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响[J]. 食品科学, 2013, 34(13):275-279. doi: 10.7506/spkx1002-6630-201313058 [22] 陈慧, 常瑛, 刘振国. 刺梨多糖对小鼠黑色素瘤抑制作用实验研究[J]. 陕西医学杂志, 2021, 50(5):529-533. doi: 10.3969/j.issn.1000-7377.2021.05.004 [23] 夏仕青, 张爱华. 刺梨的营养保健功能及其开发利用研究进展[J]. 贵州医科大学学报, 2018, 43(10):1129-1132,1153. [24] 陈旭, 李学琴. 刺梨营养特性及产品开发研究进展[J]. 现代食品, 2021(3):28-33. [25] 吕佳敏, 刘同亭, 田瑛. 刺梨的主要医学功效及应用研究进展[J]. 实用医药杂志, 2018, 35(4):370-372. [26] 《中华本草》编委会. 中华本草(第十卷)[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1999: 235-237. [27] 国家药品监督管理局. WS-5465(B-0465)-2002(试行)益肾健胃口服液质量标准[S]. 北京: 国家食品药品监督管理局, 2020. [28] 吴婉莹, 果德安. 中药整体质量控制标准体系构建的思路与方法[J]. 中国中药杂志, 2014, 39(3):351-356. [29] 刘昌孝. 中药质量标志物(Q-marker)研究发展的5年回顾[J]. 中草药, 2021, 52(9):2511-2518. [30] 陈晔, 吴宇强, 王耀搏, 等. HPLC-ELSD法测定不同产地、不同等级蕨麻中野蔷薇苷和刺梨苷的含量[J]. 武警后勤学院学报(医学版), 2018, 27(8):642-646. [31] 周跃华, 路金才, 周娟, 等. 关于中药新药复方制剂“整体鉴别”新模式的思考[J]. 中草药, 2021, 52(8):2199-2204. -
点击查看大图
计量
- 文章访问数: 5532
- HTML全文浏览量: 2351
- PDF下载量: 32
- 被引次数: 0
