Anti-inflammatory and analgesic activity analysis of Yinlian Tongfeng granules based on network Pharmacology

XU Yi; LIU Jing; HUANG Jin; CUI Jingang

doi:10.12206/j.issn.1006-0111.202007014

Volume 39 Issue 3

May 2021

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Article Navigation > Journal of Pharmaceutical Practice and Service > 2021 > 39(3): 226-231, 254

XU Yi, LIU Jing, HUANG Jin, CUI Jingang. Anti-inflammatory and analgesic activity analysis of Yinlian Tongfeng granules based on network Pharmacology[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 226-231, 254. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007014

Citation:

XU Yi, LIU Jing, HUANG Jin, CUI Jingang. Anti-inflammatory and analgesic activity analysis of Yinlian Tongfeng granules based on network Pharmacology[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 226-231, 254. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007014

Anti-inflammatory and analgesic activity analysis of Yinlian Tongfeng granules based on network Pharmacology

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007014

XU Yi^1
,,
LIU Jing¹,
HUANG Jin^{1
,
,},
CUI Jingang²

1.
Department of Pharmacy, Yueyang Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200437
2.
Clinical Research Institute of Integrative Medicine, Shanghai Academy of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200437

Received Date: 2020-07-02
Rev Recd Date: 2020-09-03

Available Online: 2021-05-25

Publish Date: 2021-05-25

Abstract

Objective To explore the anti-inflammatory and analgesic mechanism of Yinlian Tongfeng granules by network pharmacology. Methods Three main active components of Yinlian Tongfeng granules were collected from TCMSP database to predict its effective targets. Based on the network information of active components and targets, the anti-inflammatory and analgesic related targets were established by using protein-protein interaction information. The enrichment analysis of KEGG biological pathway and go function enrichment were carried out to construct the active component-target-signal pathway network and explain the main mechanism of anti-inflammatory and analgesic. Results 37 targets were closely related to anti-inflammation and analgesic effects of Yinlian Tongfeng granules, mainly on Prostaglandin endoperoxide synthase 2(PTGS2), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10) and tumor necrosis factors (TNF). The mechanism of action may relate to the regulation of nuclear transcription factor B signaling pathway(NF-κB). Conclusion The study predicted the anti-inflammatory and analgesic mechanism of Yinlian Tongfeng granules, and provided theoretical basis for further verification and interpretation of its mechanism.
- Yinlian Tongfeng granules,
- anti-inflammatory and analgesic activity,
- network pharmacology

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

1.
沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142

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痛风在中医理论中属于“痹证”、“白虎历节”范畴^[1]。中医辨证分型主要有湿热蕴结型、寒湿痹阻型、肝肾亏虚型、痰瘀痹阻型、瘀血阻滞型、脾虚湿盛型和寒热错杂型^[2]，在治疗上主要以泄浊利湿、通络止痛为主^[3]。茵连痛风颗粒为上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院自制制剂，是著名夏氏外科传人夏涵教授数十年的经典经验方。该制剂由茵陈、连钱草和伸筋草三味中药组成，用于治疗间歇期痛风性关节炎^[4]。茵连痛风颗粒的成分多样，前期研究中发现其不同部位群对痛风模型大鼠均有不同程度的抗炎镇痛作用^[5]，但其作用有效成分和疾病靶标的关系尚不明确，抗炎镇痛作用可能与香豆素^[6]、黄酮、有机酸^[7]、三萜类、生物碱类以及蒽醌类^[8]等成分有关。因此，笔者采用网络药理学方法对茵连痛风颗粒的抗炎镇痛作用机制进行分析，预测茵连痛风颗粒的主要活性成分和潜在靶标部位，以期为该制剂建立临床疗效的质量评估体系提供支持。

1. 材料与方法

1.1. 茵连痛风颗粒活性成分及靶点的筛选

本研究利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)^[9]（http://tcmspw.com/tcmsp.php）检索获得茵连痛风颗粒中三味中药的化学成分，通过TCMSP筛选出化学成分对应的数据，预测成分的口服利用度(OB) 和类药性(DL)^[10]，以OB≥30%且DL≥0.18作为筛选条件，筛选出活性成分，再将其依次输入TCMSP，查找得到潜在的靶点蛋白，并通过Uniprot数据库（https://www.uniprot.org/）^[11]匹配蛋白所对应的基因。

1.2. 茵连痛风颗粒活性成分-预测靶点网络的构建

将茵连痛风颗粒的活性成分及潜在靶点导入Cytoscape 3.7.2软件（http://www.cytoscape.org /），构建并预测茵连痛风颗粒的活性成分及靶点网络。

1.3. 抗炎镇痛靶点的收集

基于OMIM数据库^[12]检索抗炎、镇痛相关靶蛋白基因，搜索关键词"pain"、"ache"、"soreness"、"inflammation"、"inflammatory"，所有靶标均通过UniProt数据库获取其UniProt ID信息。

1.4. 茵连痛风颗粒蛋白互作网络的构建

将OMIM中获取到的蛋白质信息导入STRNG数据库，筛选出蛋白相互作用分值>0.7的高置信数据^[13]，用Cytoscape 3.7.2构建与抗炎镇痛有关的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI) 网络。

1.5. 网络合并

利用Cytoscape 3.7.2中的Merge功能，将茵连痛风颗粒活性成分-预测靶点网络与抗炎镇痛的PPI网络合并，确定两者共有的潜在作用靶点。通过Cytoscape3.7.2构建茵连痛风颗粒活性成分-潜在靶点网络，并分析茵连痛风颗粒抗炎镇痛的潜在靶点。

1.6. 通路及生物过程的富集分析

采用David v6.8数据库(https://david.ncifcrf.gov/home.jsp)^[14-16]，对与抗炎镇痛相关的茵连痛风颗粒活性成分-潜在靶点网络中的蛋白进行基于基因组百科全书(KEGG)的生物通路富集分析，并利用OmicShare对通路进行可视化，采用Davidv6.8数据库，对与抗炎镇痛相关的茵连痛风颗粒活性成分-潜在靶点网络中的蛋白进行基因本体GO功能富集分析^[13]。

3. 讨论

茵连痛风颗粒由茵陈、连钱草和伸筋草三味中药组成，茵陈具有清利湿热、利胆退黄的功效；连钱草具有利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿的功效；伸筋草具有祛风除湿、舒筋活络的功效。三者合用增强了清热利湿，通络止痛的作用^[18]。

本研究通过TCMSP、Uniprot数据库筛选潜在的抗炎镇痛活性成分，得出槲皮素、β-谷甾醇、茵陈色原酮、异鼠李素等23个黄酮类、甾体类成分。这些成分与现有文献报道中关于抗炎镇痛的活性成分相符^[19-22]。其中，共有成分槲皮素为黄酮类化合物，有研究表明槲皮素对炎症反应具有良好的抑制作用，对化学刺激疼痛模型和热刺激疼痛模型均有显著的镇痛作用^[23]。共有成分β-谷甾醇为甾体类化合物，具有类似于氢化可的松的抗炎活性，其抗炎机制主要是通过局部免疫调节来发挥抗炎作用^[24]。

通过OMIM数据库、STRNG数据库及Cytoscape软件构建抗炎镇痛靶标蛋白-蛋白交互网络，揭示茵连痛风颗粒通过多靶点起到抗炎镇痛的作用。本研究共得到PTGS2、TNF、IL-6、IL-10等37个茵连痛风颗粒抗炎镇痛的关键靶点。前列腺素内过氧化物合酶PTGS），又称为环氧合酶（COX），存在两个亚型，即COX-1和COX-2^[25]。PTGS2产生炎症性前列腺素，参与炎症的发生，同时与其他预测所得出的靶点都有密切联系^[26-27]。TNF^[28]、IL-6有致痛和痛觉增敏的作用，IL-10有活性较强的抗炎作用，除具抑制促炎细胞因子的产生外，还能促进其他抗炎因子的产生、下调促炎因子受体的表达^[29]。PTGS2等靶点是抗炎镇痛的关键靶点，在炎症反应、基因表达等生物过程中起着至关重要的作用。

KEGG富集结果表明，茵连痛风颗粒抗炎镇痛关键靶点基因显著富集在TNF信号通路、MAPK信号通路、核转录因子B信号通路等。茵陈中的黄酮类成分具有重要的抗炎活性，其潜在的抗炎机制可能与其对NF-κB和MAPK信号通路的抑制有关^[6]。研究表明^[30]，茵陈色原酮通过JNK途径激活转录因子E2相关因子2（Nrf2）及其下游靶标血红素加氧酶1（HO-1）水平，减弱LPS诱导的小胶质细胞炎症反应，也可有效抑制MyD88和Toll/IL-1接头蛋白（TIRAP）介导的信号通路，进而抑制LPS诱导的NF-κB、蛋白激酶B（Akt）和MAPK激活的炎症基因活化，从而发挥抗炎作用。

综上所述，本研究基于网络药理学，对茵连痛风颗粒抗炎镇痛的多成分、多靶点和多信号通路进行相关性研究，初步揭示了茵连痛风颗粒中三味中药的抗炎镇痛分子机制，为进一步开展和实验验证茵连痛风颗粒抗炎镇痛作用机制提供理论依据。

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编号	活性成分	OB（%）	DL	来源
YC1	异鼠李素	49.60	0.31	茵陈
A1	β-谷甾醇	36.91	0.75	茵陈
YC2	茵陈黄酮	48.96	0.41	茵陈
YC3	芫花素	37.13	0.24	茵陈
YC4	蓟黄素	30.35	0.30	茵陈
YC5	异茵陈黄酮	57.40	0.41	茵陈
YC6	紫杉醇	46.11	0.33	茵陈
YC7	依帕替丁	42.55	0.37	茵陈
YC8	茵陈色原酮	57.56	0.31	茵陈
YC9	4'-甲基茵陈色原酮	72.18	0.35	茵陈
YC10	脱甲氧基姜黄素	52.33	0.25	茵陈
YC11	茵陈黄酮A	68.32	0.24	茵陈
A2	槲皮素	46.43	0.28	茵陈
LQC1	金合欢素	34.97	0.24	连钱草
LQC2	蒙花苷	39.84	0.71	连钱草
LQC3	丁子香萜	55.38	0.78	连钱草
A1	β-谷甾醇	36.91	0.75	连钱草
LQC4	山奈酚	41.88	0.24	连钱草
LQC5	木犀草素	36.16	0.25	连钱草
A2	槲皮素	46.43	0.28	连钱草
SJC1	谷甾醇	36.91	0.75	伸筋草
SJC2	福莫尼汀	69.67	0.21	伸筋草
SJC3	豆甾醇	43.83	0.76	伸筋草

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