-
辅酶Q10(CoQ10)是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物,作为细胞中的辅酶,其具有重要且广泛的药理作用[1],目前主要用于预防心血管疾病和增强免疫力等方面[2-4]。CoQ10分子量高、水溶性低,口服生物利用度低,注射剂稳定性差,对光十分敏感[5],越来越多的研究表明静脉注射乳剂是其理想载体[6]。
高油量可溶解更大量药物,对极难溶性药物的优势更为明显。但是目前对于含药静脉注射乳剂的研究中,油的质量体积比通常为10%[7],更高油量的研究相对较少。基于营养型脂肪乳剂的长期临床应用实践,高油量静脉注射乳剂的安全性已得到证实,具有广阔的发展空间和巨大的市场价值。同时乳剂不能经受冷冻也长期困扰着研究者们,卵磷脂与含亲水链段的乳化剂组合及恰当的油黏度是解决此问题的关键。本研究在乳剂经典处方中添加单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1),GM1含有一个较大的亲水头基,具有两亲性,利用其特殊的结构优势来解决乳剂不耐受冻融的难题。本研究旨在制备高油量、高载药量且耐冻融循环的CoQ10乳剂,建立其HPLC含量分析方法,并进行物理化学性质表征和稳定性评价,以弥补CoQ10现有制剂的不足,为高油量含药静脉注射乳剂的研究开发提供参考依据。
-
BS124s电子分析天平(德国Sartorius公司);DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂);高速分散机(德国IKA T18 ULTRA TURRAX);M-110L型微射流仪(美国Microfluidics公司);垂直旋转自动高压灭菌器(沈阳天美达科学仪器有限公司);Nicomp-380 激光粒度测定仪(美国Particle Sizing Systems公司);PHS-2C型数字显示酸度计(上海伟业仪器厂);CS120GXL型超速离心机(日本Hitachi公司);UV228紫外-可见光检测器、P230高压恒流泵(大连依利特分析仪器有限公司);高精度全自动交流稳压器(浙江中川电气科技有限公司);AT-130柱温箱(天津市金洲科学仪器有限公司);人工气候箱(德国MMM公司)。
CoQ10(广东润和生物科技有限公司,批号:2017052405,纯度
$\geqslant $ 98%),中链油(MCT,辽宁铁岭北亚药用油有限公司,注射级),大豆油(LCT,辽宁铁岭北亚药用油有限公司,注射级),蛋黄卵磷脂(E80,德国Lipoid公司,注射级),GM1(重庆寰瑞生物制药有限公司,注射级),维生素E(VE,BASF维生素有限公司),甘油(湖南尔康制药有限公司,注射级),聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯(HS15,德国BASF公司,注射级),葡萄糖注射液(昆明南疆制药有限公司),氯化钠注射液(吉林省都邦药业股份有限公司),灭菌注射用水(石家庄四药有限公司),其他试剂均为色谱纯。 -
油种类对乳剂的稳定性至关重要,LCT和MCT单独应用时均存在各自的缺陷,且乳剂不能经受冷冻,因此将二者联合应用,质量比为1∶1[8]。结合静脉注射乳剂经典处方组成,CoQ10乳剂按如下方法制备[9]。称取质量体积比为30% LCT/MCT (质量比1∶1)、2% E80、0.05% VE和2% CoQ10于60 ℃水浴中加热熔融、分散均匀。2.25%甘油和0.2% GM1溶解于适量重蒸水中,60 ℃加热搅拌至完全溶解。待两相温度平衡后,高剪切搅拌下(8000 r/min)将水相加入油相中,完全加入后继续分散5 min,即得初乳。待初乳冷却至室温后,加重蒸水定容至处方量。将初乳转移至微射流仪中,经6 000 psi均质3个循环,14 000 psi均质6个循环减小粒径。依次过0.80和0.45 μm微孔滤膜。将所得乳剂分装,充氮气,121 ℃灭菌8 min。
-
色谱柱:Betasil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm,大连依利特);流动相:甲醇-无水乙醇(体积比20∶80);柱温:35 ℃;流速:1.0 ml/min;检测波长:275 nm;进样量:20 μl。
-
精密称定CoQ10 25.0 mg,置于25 ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为1000.0 μg/ml的CoQ10对照品储备液。精密移取CoQ10乳剂0.1 ml,置于10 ml量瓶中,加入无水乙醇破坏乳剂并稀释至刻度,摇匀,过0.45 μm微孔滤膜,即得CoQ10乳剂样品溶液。
-
取CoQ10乙醇溶液20 μl进样,记录色谱图。将空白乳和CoQ10乳剂分别加适量无水乙醇破乳,经0.45 μm微孔滤膜滤过,取各续滤液20 μl进样,记录色谱图。在此色谱条件下辅料和溶剂对药物测定无干扰,见图1。
-
精密量取CoQ10对照品储备液适量,用无水乙醇稀释成浓度为10.0、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0 μg/ml的系列标准溶液,过0.45 μm微孔滤膜,各取20 μl进样分析,记录峰面积A。以A对浓度C(μg/ml)进行线性回归,得线性方程为A=15738 C- 12584,r=0.999 8。结果表明CoQ10在10.0 ~ 250.0 μg/ml范围内线性关系良好。
-
分别取低、中、高浓度(25.0、100.0、200.0 μg/ml)的CoQ10对照品溶液,于2、4、6、8、10 h各测定一次,以峰面积求算日内精密度;于1、2、3、4、5天各测定一次,以峰面积求算日间精密度。结果表明RSD均小于2%,方法精密度良好。
-
取“2.2.2”项下CoQ10乳剂样品溶液室温下避光放置,于0、2、4、6、8、10、24 h分别取20 μl进样分析,记录峰面积。计算得各时间点峰面积为0 h测定值的100.45%、101.23%、99.27%、100.26%、99.34%及100.06%,表明样品溶液在24 h内稳定。
-
按“2.2.2”项下方法平行制备6份CoQ10乳剂样品溶液。另精密称定CoQ10适量,加乙醇溶解并稀释成浓度为200.0 μg/ml的溶液,摇匀,过0.45 μm微孔滤膜,即得对照品溶液。精密量取样品和对照品溶液20 μl进样,记录峰面积。外标法计算得样品中药物浓度分别为201.3、199.6、198.2、200.7、199.2、198.4 μg/ml,RSD为0.62%,表明该方法重复性良好。
-
精密移取CoQ10对照品储备液0.25、1.0和2.0 ml各3份于10 ml量瓶中,分别加入0.1 ml空白乳,再加乙醇破坏乳剂并稀释至刻度,摇匀,过0.45 μm微孔滤膜。将上述各溶液进样分析,记录峰面积,按“2.2.4”项下标准曲线方程求得药物浓度,计算回收率。结果表明25、100和200 μg/ml CoQ10样品溶液的平均回收率分别为100.04%、99.63%和100.49%,RSD分别为0.29%、0.80%和0.52%。
-
按照“2.1”项下的处方工艺制备CoQ10乳剂,观察其外观。CoQ10乳剂外观为淡黄色均匀乳状液体,无油滴、不溶性成分或块状团聚物,见图2。
-
取CoQ10乳剂适量,用蒸馏水稀释至适宜浓度,采用激光散射粒径测定仪测定3批CoQ10乳剂的粒径、粒径分布和Zeta电位。测定波长为632.8 nm,测定角为90°,测定温度为25 ℃。结果显示3批样品的平均粒径为(239.5±0.8)nm,未见大于5 μm的粒子,符合静脉注射液的要求;粒径为(0.300±0.011)nm;Zeta电位为(−32.28±2.04)mV。同时测定了CoQ10乳剂的pH值为(5.86±0.02),符合注射剂质量要求。
-
精密量取CoQ10 乳剂0.1 ml(含CoQ10约2 mg)于10 ml量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,过0.45 μm微孔滤膜,取20 μl进样,记录色谱图。另取相同浓度的药物溶液,同法测定。外标法计算乳剂中CoQ10的含量,最终测得3批供试品的标示量百分比分别为99.18 %、101.50 %和101.08%,RSD为1.24%。
-
采用超速离心法测定CoQ10乳剂的包封率。乳剂经过超速离心后,油相、乳化层和水相彻底分开,将油相与乳化层中的药物量合并考虑,通过测定水相中的药物量来计算包封率。精密移取CoQ10乳剂0.1 ml至10 ml量瓶中,加入乙醇稀释至刻度,混匀,过0.45 μm微孔滤膜,取续滤液进行HPLC检测,外标法计算药物总量。移取CoQ10乳剂4 ml至超速离心管中,温度为4 ℃,以50 000 r/min离心2 h。精密移取下层液体1.0 ml至10 ml量瓶中,乙醇稀释至刻度,混匀,过0.45 μm微孔滤膜,取续滤液进行HPLC检测,外标法计算水相中药物含量。按上述方法测得3批CoQ10乳剂的平均包封率为(98.5%±1.1)%,表明药物绝大部分存在于制剂的油相和油水界面层中。
-
将CoQ10乳剂分装于西林瓶,充氮气密封,121 ℃灭菌8 min。参考《化学药物稳定性研究技术指导原则》中涉及乳剂冻融试验的方法,将灭菌后样品在−20 ℃冷冻48 h,40 ℃放置48 h为一个循环,共循环3次,每完成一个循环测定粒径。结果显示3批CoQ10乳剂均具有良好的灭菌稳定性和冻融稳定性,见表1。
表 1 CoQ10乳剂的灭菌和冻融试验结果
批次 粒径(l/nm) 灭菌前 灭菌后 冻融1次 冻融2次 冻融3次 1 241.4 239.6 255.7 263.0 271.2 2 238.5 240.0 252.6 265.9 272.3 3 240.2 238.7 259.0 263.5 269.1 -
以平均粒径和粒径分布为指标,考察CoQ10乳剂在5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液中的稀释稳定性。将制剂用上述稀释介质进行50倍稀释,于0、2、4、6、8、10、12、24 h取样,测定粒径和粒径分布。结果见图3,制剂经5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液稀释后放置24 h,粒径和粒径分布均比较稳定,稀释稳定性良好。
-
CoQ10结构中含有大量不饱和双键,是典型的光敏性药物。以药物含量为主要指标,考察不同因素对CoQ10乳剂光解速率的影响。将样品分装于透明西林瓶,置于人工气候箱中,于(25±2) ℃、(4500±500)lux条件下进行强制光解试验,调整样品与光源的距离约10 cm,使受光均匀,分别于0、24、48、72、96、120 h取样,HPLC法测定药物含量。绘制光降解曲线,并进行反应级数拟合,求出光解半衰期(t1/2)。
-
将适量CoQ10用无水乙醇溶解并稀释,即得CoQ10溶液。称取0.25% CoQ10和3% HS15于55 ℃水浴中加热熔融,分散均匀。搅拌状态下加入预热至相同温度的注射用水,搅拌10 min,即得CoQ10胶束。制备相同药物浓度(1 mg/ml)的CoQ10溶液、胶束和乳剂进行光解试验。光解曲线见图4,反应级数均为一级。对CoQ10的光保护作用由强到弱依次为乳剂、胶束和溶液,t1/2分别为239.0、50.6和29.4 h。
-
将CoQ10乳剂(20 mg/ml)分别稀释0、2、4、10、20倍进行光解试验。光解曲线见图5,反应级数均为一级,稀释倍数由低到高,t1/2分别为533.1、495.0、288.8、115.5和62.4 h。
-
分别制备0.1%(1 mg/ml)和2.0%(20 mg/ml)载药量的CoQ10乳剂,进行光解试验。光解曲线见图6,反应级数均为一级,0.1%和2.0%载药量乳剂的t1/2分别为233.5和533.1 h。结果表明,光解速率与载药量呈反比,载药量越大,光解速率越小。
-
CoQ10乳剂需在冰箱(2~8 ℃)内储存,因此以下稳定性实验参照《中国药典》2020版中对温度特别敏感药物制剂的实验条件进行。
-
将CoQ10乳剂分装于棕色西林瓶中,充氮气、密封,在(25±2) ℃、(4 500±500) lux条件下,于第0、5、10天取样,以制剂外观、含量、粒径、pH为评价指标,考察CoQ10乳剂的光照稳定性。结果(见表2)表明3批制剂的含量和pH略有下降,提示该乳剂需避光制备与储存。
表 2 CoQ10乳剂的光照稳定性试验结果
天数(t/d) 外观 含量(%) 粒径(l/nm) pH 0 良好 100.4 243.2 5.82 5 良好 97.7 239.8 5.79 10 良好 93.6 241.4 5.70 -
将CoQ10乳剂分装于西林瓶中,充氮气、密封,在(40±2) ℃条件下避光放置,于第0、5、10天取样,以制剂外观、含量、粒径、pH为评价指标,考察CoQ10乳剂在高温条件下的稳定性。结果(见表3)显示3批制剂的含量和pH随时间延长呈下降趋势。
表 3 CoQ10乳剂在40 ℃的稳定性试验结果
天数(t/d) 外观 含量(%) 粒径(l/nm) pH 0 良好 100.4 243.2 5.82 5 良好 100.2 245.2 5.57 10 良好 99.5 245.0 5.21 -
取3批CoQ10乳剂分装于西林瓶中,充氮气、密封,在(25±2) ℃、相对湿度60%的条件下避光放置6个月,分别于第0、1、2、3、6个月取样,观察制剂外观,测定含量、粒径和pH值。结果表明,CoQ10乳剂在(25±2) ℃条件下避光放置6个月,各指标均在合格范围内,稳定性良好。
-
取3批CoQ10乳剂分装于西林瓶中,充氮气、密封,在(5±3) ℃条件下避光放置12个月,分别于第0、3、6、9、12个月取样,观察制剂外观,测定含量、粒径和pH值。结果表明,CoQ10乳剂在(5±3) ℃条件下避光放置12个月,各指标均在合格范围内,稳定性良好。
-
乳剂冷冻期间冰晶的形成会破坏乳化膜,从而引发小油滴聚集成大油滴,甚至导致浮油、破乳。解决乳剂冻融问题的主要手段为油相和乳化剂的合理选择。其一是油相要有恰当的黏度,将LCT与MCT联合应用既能克服单独使用存在的问题,又可取长补短,有利于乳剂冻融稳定性的提高。其二,牢固的乳化膜可增强乳剂的冻融稳定性,有研究[11]发现卵磷脂与含亲水链段的乳化剂组合对提高冻融稳定性有至关重要的作用。本实验CoQ10乳剂处方组成中的GM1是一种内源性糖脂,具有生物可降解、无免疫原性等特点[12],近年来已有研究将GM1应用于乳剂、脂质体和胶束的制备[12-14]。GM1是两亲性物质,可与卵磷脂形成复合乳化膜,增加膜的韧性。其结构中的较大亲水头基形成的空间立体位阻,及结构中唾液酸的荷负电对提高乳剂的冻融稳定性也至关重要。此外,在水相中加入含羟基的醇类或糖类(冻融保护剂),可以增加水相黏度,减慢冰晶的生长速度和程度,增强乳剂的冻融稳定性。
-
CoQ10的光解具有浓度依赖性,起始浓度高时光解速率相对较慢,但当制剂稀释倍数增加时,其透光性大大增加,光解反应加剧。对于微粒给药系统,粒径是一个重要参数,同时其光解具有一定的粒径依赖性。本研究所制备的乳剂属于高油量低磷脂含量,与普通乳剂相比粒径较大,因此光稳定性要更好。推测原因为光不容易穿透大粒径制剂的内部,降低了药物的曝光率;此外,粒径大时粒子的曲率较低,比表面积小,因此曝光机会少,越不易光解[10]。本实验证明了将CoQ10包封入乳剂中可减少其曝光机会,对药物能起到一定的保护作用。但CoQ10乳剂仍需低温氮气环境下保存,使用过程中避光处理,以减少光解的概率。
The improvement of formulation process and quality evaluation of coenzyme Q10 emulsion
-
摘要:
目的 对处方工艺改进的辅酶Q10乳剂进行质量评价,并建立其含量测定方法。 方法 制备高油量辅酶Q10乳剂,利用HPLC建立其含量测定与有关分析方法,并进行理化性质表征,测定包封率,考察灭菌、冻融和稀释稳定性,进行强光降解试验以及影响因素、加速和长期试验。 结果 辅酶Q10乳剂粒径、Zeta电位、pH值、含量和包封率分别为(239.5±0.8)nm、(−32.28±2.04)mV、(5.86±0.02)、(100.59±1.24)%和(98.5±1.1)%,灭菌、冻融和稀释稳定性均良好。乳剂光解速率与稀释倍数呈正比,与载药量呈反比。辅酶Q10乳剂需避光制备、低温储存;(40±2) ℃避光放置10天,pH值下降0.61;加速和长期试验稳定性良好。 结论 高油量辅酶Q10乳剂符合静脉注射液的质量要求,稳定性良好。 Abstract:Objective To evaluate the quality of coenzyme Q10 emulsion with improved formulation and technology and establish an assay method. Methods Coenzyme Q10 emulsion with a high oil concentration was prepared and analyzed by HPLC. The physical and chemical properties of the emulsion were characterized, and the entrapment efficiency was determined. The stability of sterilization, freeze-thaw and dilution was investigated. The photodegradation test as well as the influencing factors, acceleration and long-term stability tests were carried out. Results The particle size, Zeta potential, pH value, content and entrapment efficiency of coenzyme Q10 emulsion were (239.5±0.8) nm、(−32.28±2.04) mV、(5.86±0.02)、 (100.59±1.24) % and (98.5±1.1) %, respectively. The stability of sterilization, freeze-thaw and dilution was good. The photolysis rate was directly proportional to the dilution ratio and inversely proportional to the drug loading. Coenzyme Q10 emulsion should be prepared in light free environment and stored at a low temperature. The pH value dropped 0.61 when it was kept in darkness at (40±2) ℃ for 10 days. It exhibited good stability both in the accelerated and long-term test. Conclusion The physicochemical properties of coenzyme Q10 emulsion with a high oil concentration meet the quality requirements for intravenous injection with good stability. -
Key words:
- high oil content /
- coenzyme Q10 /
- emulsion /
- physicochemical property /
- stability
-
阿弗他溃疡(RAU)又称为复发性口腔溃疡,其发病率高,约占口腔黏膜病的20%[1],发病人群主要是青壮年,女性居多,春、冬季发病率较高[2]。表现为口腔黏膜反复发作的溃疡,呈假膜覆盖的凹陷面,中间为白色炎症,边缘红肿。目前病因病机尚不明确[3],被广泛接受的诱发因素有气候环境、食物营养、心理精神和免疫因素等[4],研究发现口腔溃疡的发病可能与口腔微生物密切相关[5],可通过纠正口腔菌群平衡达到加速愈合、控制炎症、抑制复发。经过前期研究,选用硫酸新霉素,针对口腔菌群中异常增多的G−菌;克霉唑对引起口腔黏膜疾病的白念珠菌针对性强;选用不发生双硫仑反应的奥硝唑作为抗厌氧菌药物;达克罗宁作为局麻药,黏膜穿透性强,局麻时间长;采用冰片作为创口收敛剂,兼具抗炎、消肿、改善气味的功能;甘草次酸作为抗炎剂,与糖皮质激素相比长期使用副作用较低。以上6种成分之间无配伍禁忌,其中硫酸新霉素和克霉唑口服均不吸收,安全性高[4]。采用物理凝聚法分散水不溶性成分,通过溶剂浇铸法制备膜剂[6-9]。本课题采用层次分析法结合单因素考察对不同成膜材料的黏附时间、溶蚀时间等9项考察指标综合评分,优选出最合适的成膜材料;采用层次分析与正交试验相结合,优选成膜材料的最佳配比,兼顾使用舒适性和生产适用性的同时,重点筛选出黏附性好且缓释时间较长的成膜材料配比。
1. 仪器与试药
1.1 仪器
AE240精密电子天平(瑞士METTLER公司);磁力搅拌器(宁波市鄞州群安实验仪器有限公司);托盘天平(福州天平仪器厂);DHG-9145A电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);水浴恒温振荡器(上海智城分析仪器制造有限公司);OS2O-Pro型搅拌器(北京大龙试验仪器有限公司);拉力测试仪(和晟仪器科技有限公司);游标卡尺(上海台海工量具有限公司)。
1.2 材料
聚乙烯醇1788(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20170318);羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:20180412);海藻酸钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:20190810);羟丙基纤维素(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20170415);羟丙甲基纤维素钠(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20170318);明胶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20180517);水胶体敷料(康维德医疗用品有限公司,批号:9F04020)。硫酸新霉素(南京都莱生物技术有限公司,批号:20180312);克霉唑(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20170518);奥硝唑(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:20180522);盐酸达克罗宁(苏州裕元生物科技有限公司,批号:20170215);甘草次酸(天津希恩思生化科技有限公司);冰片(亳州寿言斋健康科技有限公司,批号:20191021)。
2. 方法与结果
2.1 成膜材料单因素考察
取聚乙烯醇1788(PVA-1788)、羟丙基纤维素(HPC)、羟丙甲基纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、海藻酸钠(SA)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、明胶(GEL)各3 g置于60 ml水中搅拌1 h,然后加热至60 ℃,搅拌至完全溶解得成膜材料凝胶,采用溶剂浇铸法铺展于培养皿中,置60 ℃烘箱烘干。从外观、拉伸性能、厚度、成膜时间、脱模效果、溶胀系数、溶蚀时间、黏附力和黏附时间9个方面进行评价。
2.1.1 外观评价
膜剂成品外观评价标准:①气泡:无气泡得5分;少量气泡,易除去,得4分;少量气泡,经1 h静置可除去,得3分;需大于1 h静置、抽真空、离心等方法才能将气泡除去,得2分;采用各种方法处理后膜剂中仍存在大量气泡得1分;气泡较多,干燥后无法成完整膜剂得0分。②颜色:无色透明得5分;半透明得4分;半透明且带有黄色或其他较浅颜色得3分;半透明且有絮状、颗粒状纹路得2分;呈不透明颜色,且有絮状、颗粒状纹路得1分;外观颜色较深、纹理较多、不透明得0分。③柔软度:柔软、不卷曲得5分;柔软稍有卷曲得4分;反向卷曲后缓慢恢复原来形状得3分;膜较硬,卷曲后快速恢复原来形状得2分;卷曲可能碎裂,得1分;硬度较大无法制得膜剂得0分。从表1和图1可知,PVA-1788和HPC颜色透明,气泡较少,柔软度较好,外观较其他材料好。
表 1 成膜材料的外观评价成膜材料 气泡 颜色 柔软度 总评分
(分)性状 评分
(分)性状 评分
(分)性状 评分
(分)PVA-1788 无 5 透明 5 很柔软 5 15 HPC 无 5 透明 5 很柔软 5 15 HPMC 无 5 透明 5 厚、硬 2 12 MC 大量 2 白色 4 较硬 3 9 SA 少量 4 黄色 2 厚、硬 2 8 CMC-Na 少量 4 白色 5 很柔软 5 14 GEL 无 5 淡黄色 4 厚、硬 2 11 注:PVA-1788:聚乙烯醇1788;HPC:羟丙基纤维素;HPMC:羟丙甲基纤维素;MC:甲基纤维素;SA:海藻酸钠;CMC-Na:羧甲基纤维素钠;GEL:明胶 2.1.2 膜剂拉伸性能的考察
取各实验组膜剂1片(2 cm×1 cm),利用拉力测试仪测量各实验组膜剂的拉伸长度与断点力,通过拉伸长度/断点力的比值判断拉伸性能,数值越大,可拉伸距离越大,膜剂拉断所需力相对越小,与口腔黏膜贴敷时顺应性越高。以拉伸长度/断点力比值的最大值作为100%,采用归一化法对其他各组进行评价,各实验组测定3次求平均值。结果见表2,PVA-1788的拉伸性能明显优于其他材料。
表 2 成膜材料的拉伸性能评价成膜材料 拉伸长度
(l/mm)断点力
(f/kg)拉伸长度/
断点力评分
(分)PVA-1788 24.24 2.137 11.34 100 HPC 4.935 1.644 3.002 26.47 HPMC 0.925 4.063 0.227 0.020 MC 2.180 7.443 0.293 0.026 SA 2.638 4.566 0.578 0.051 CMC-Na 2.611 7.772 0.336 0.030 GEL 0.436 2.056 0.212 0.019 2.1.3 膜剂厚度测定
分别从各实验组中选取10片膜剂,用游标卡尺测量总厚度,计算每片膜剂的平均厚度,取平均厚度的倒数,以最大值作为100%,用归一化法对其他各实验组膜剂进行评分。由表3可知,制备的膜剂中,HPC厚度最薄,MC最厚,其余各组差异较小,膜剂越薄口腔黏膜舒适性越好。
表 3 各试验组成膜材料的厚度、成膜时间和脱膜效果成膜材料 膜剂厚度 成膜时间 脱膜效果 测定值
(l/mm)评分
(分)时间
(t/min)评分
(分)面积
(s/cm2)评分
(分)PVA-1788 0.13 76.92 240 60.0 54.0 100 HPC 0.10 100.00 330 42.9 43.2 80 HPMC 0.11 90.91 143 100.0 54.0 100 MC 0.15 66.67 258 55.7 54.0 100 SA 0.11 90.91 195 72.9 54.0 100 CMC-Na 0.12 83.33 255 55.7 54.0 100 GEL 0.12 83.33 238 60.0 27.0 50 2.1.4 成膜时间考察
对各实验组的成膜时间进行测定,取成膜时间的倒数,以倒数的最大值为100%,用归一化法对其他成膜材料进行评分,成膜时间短,有利于提高生产效率,结果见表3。
2.1.5 脱膜效果考察
以剥离最大面积的膜的面积占培养皿(半径4.3 cm)的百分比作为评判标准,以完全脱模为100%。结果见表3,PVA-1788、HPMC、MC、SA、CMC-Na可以直接撕取完整膜剂,脱模较容易。
2.1.6 溶胀试验
称取0.4 g氯化钠、0.795 g氯化钙、0.4 g氯化钾、1.0 g尿素、0.78 g磷酸钠、0.005 g硫化钠,加热水400 ml溶解,放冷后转移至1000 ml容量瓶中,用纯化水稀释至刻度,用氢氧化钠调节pH至6.8,即得人工唾液。取各试验组膜剂1片(1 cm×1 cm),称量记为m,将膜剂放入培养皿中称重记为W0。将膜剂润湿黏附于培养皿中,加入人工唾液[10-11],分别在10、30、60、120、240 min时,倒去人工唾液,称量培养皿加膜剂的质量Wi。计算公式如下:溶胀系数=(Wi−W0)/m×100%;每组平行3次,求各时间点溶胀系数的平均值,以各组溶胀系数最大的值作为100%,用归一化法对其他各组进行评分。由表4中结果可知,CMC-Na溶胀系数最大。
表 4 成膜材料的溶胀系数成膜材料 溶胀系数(%) 评分
(分)10 min 30 min 60 min 120 min 240 min 480 min PVA-1788 396 429 549* 312 0 — 18.35 HPC 731 936* 806 447 0 — 31.28 HPMC 641 1028* 579 10 0 — 34.36 MC 811 884 1170 1456* 1660 1528 55.48 SA 1489 2468* 2232 283 0 — 82.49 CMC-Na 1023 1670 2262 2849 2992* 2357 100 GEL 622 548 553 759* 627 0 25.37 注:*表示各试验组最大溶胀系数,—表示溶蚀殆尽,实验终止。 2.1.7 溶蚀试验
取1片膜剂(1 cm×1 cm)称重记为m,称取2 ml EP管称重记为n。将膜剂润湿黏贴在EP管下缘。在EP管中加入2 ml人工唾液,在37 ℃恒温振荡器中以100 r/min振荡10 min,倒出液体,称重记为W0,然后重新加入2 ml纯化水并恒温振荡20 min,如此重复10次,于各时间点倒出管内液体后称重,依次记为Wi。以相邻时间点重量差异计算溶蚀速率,公式如下:溶蚀速率=[(Wi−Wi−1)/20(W0−m−n)]×100%。以各组溶蚀时间最大值作为100%,用归一化法对其他各组进行评分。结果见表5,MC溶蚀时间较长,在200 min内未出现明显溶蚀减重,溶蚀系数出现负数是由于溶胀增重略大于溶蚀损失,这将阻碍药效成分随着膜剂溶蚀的释放。CMC-Na溶蚀速率较小,其溶蚀时间可长达180 min,缓释性能显著优于其他成膜材料,较适合制备缓释膜剂。
表 5 成膜材料的溶蚀系数成膜材料 连续时间点的平均溶蚀百分率(%) 溶蚀时间
(t/min)每分钟溶
蚀速率(%)评分
(分)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PVA-1788 24.62 36.92 20.00 18.46 0.00 — — — — — 80 1.25 40 HPC 37.50 24.04 38.46 0.00 — — — — — — 60 1.67 30 HPMC 54.55 45.45 0.00 — — — — — — — 40 2.5 20 MC 0.00 −12.26 0.94 −6.60 −2.83 0.00 −3.77 6.60 −3.77 7.55 200 −0.07 100 SA 49.07 50.93 0.00 — — — — — — — 40 2.5 20 CMC-Na −17.71 −2.21 4.79 15.46 26.19 37.14 20.88 14.20 1.26 0.00 180 0.56 90 GEL 100.0 0.00 — — — — — — — — 20 5.0 10 注:“—”代表溶蚀殆尽,实验终止。 2.1.8 黏附力考察
黏附膜剂黏附力测定[10]:取两块同样大小的橡皮,分别固定于天平托盘上及玻璃板下方,调节高度和重量使上下橡皮相互接触时天平平衡。取膜剂(1 cm×1 cm)预先用人工唾液润湿,黏于下橡皮表面,将上橡皮与膜剂接触,天平空托盘加50 g砝码使上下橡皮自然按压膜剂90 s,移去50 g砝码,在下橡皮固定的托盘里依次加入重量逐渐增加的砝码,以5 s内上、下橡皮分离为标准,所加砝码的重量即为黏附力。将各组黏附力最大值作为100%,用归一化法对其他各组进行评分。由表6可知,MC的黏附力最好,其次是PVA-1788。
表 6 成膜材料的黏附时间成膜材料 黏附力 黏附时间 称重
(m/g)评分
(分)时间
(t/min)评分
(分)PVA-1788 121 88.97 100 100 HPC 100 73.53 60 60 HPMC 40 29.41 50 50 MC 136 100 85 85 SA 119 87.5 80 80 CMC-Na 90 66.18 38 38 GEL 6.7 0.05 5 5 2.1.9 黏附时间考察
取水胶体敷料(2 cm×2 cm)粘贴于500 ml烧杯内侧,用人工唾液润湿膜剂(1 cm×1 cm),将膜剂按压在水胶体敷料上约20 s,在膜剂表面覆盖一层1 cm×1 cm薄塑料膜用以降低溶蚀对黏附时间的干扰,在烧杯中加入人工唾液,液面没过膜剂。在恒温37 ℃,150 r/min搅拌,于300 min内监测黏附时间[12],各组试验组取3片计算平均值。将各组黏附时间的最大值作为100%,用归一化法对其他各组进行评分。由表6可知,PVA-1788的黏附时间最长,可达100 min。
2.2 采用单因素考察结合层次分析法对成膜材料进行综合评价
2.2.1 根据膜剂考察指标之间的关系建立两两比较优先矩阵
根据“2.1”项下9个考察指标对缓释膜剂的贡献度,设计两两比较矩阵,见表7。
表 7 各目标按照两两比较重要程度建立指标层矩阵指标 外观 厚度 拉伸
性能脱模
效果成膜
时间黏附
时间黏附
力溶胀
系数溶蚀
速度外观 1 1 1 1 1 0.5 0.5 0.33 0.25 厚度 1 1 1 1 1 0.5 0.5 0.33 0.25 拉伸性能 1 1 1 1 1 0.5 0.5 0.33 0.25 脱模效果 1 1 1 1 1 0.5 0.5 0.33 0.25 成膜时间 1 1 1 1 1 0.5 0.5 0.33 0.25 黏附时间 2 2 2 2 2 1 1 0.5 0.5 黏附力 2 2 2 2 2 1 1 0.5 0.5 溶胀系数 3 3 3 3 3 2 2 1 1 溶蚀速度 4 4 4 4 4 2 2 1 1 2.2.2 层次分析法(AHP)各考察指标权重系数的计算
根据各指标对比的优先矩阵(表3)及公式(1)计算初始权重系数Wi′:
$$ \mathrm{W}_{t}'=\sqrt{\mathrm{a}_{1} \times \mathrm{a}_{2} \times \mathrm{a}_{3} \cdots \mathrm{a}_{m}} \text{} $$ (1) 式中m为受检验层次目标数,a1~am为矩阵两两比较的评分,经计算各指标成分初始权重系数分别为:W1′=0.65042、W2′=0.65042、W3′=0.65042、W4′=0.65042、W5′=0.65042、W6′=1.25992、W7′=1.25992、W8′=2.14765、W9′=2.51984。
按照公式(2)计算归一化权重系数Wi,
$${\rm{W}}_i= \displaystyle\frac{{\rm{W}}_i'}{\sum\limits_{j=1}^{m}}{{\rm{W}}_i'}$$ (2) 得各指标成分权重系数W1=0.06230、W2=0.06230、W3=0.06230、W4=0.06230、W5=0.06230、W6=0.12069、W7=0.12069、W8=0.20572、W9=0.24138。
2.2.3 一致性检验
CR为随机一致性比率,定义CR=CI/RI作为衡量所得权重系数是否合理的指标,一致性指标CI=(λmax−m)/(m−1),式中m为次级目标数,矩阵的最大特征根
$\lambda_{m=x}=1 / m {\sum\limits_{j=1}^{m}}\left[{\sum\limits_{j=1}^{m}}\left(a_{j j} \times W_{j}\right)+W_{j}\right]$ ,当矩阵阶数=9时,平均随机一致性指标RI=1.45。经计算λmax=9.0153;则CI=(λmax−m)/(m−1)=0.00192;CR=CI/RI=0.00192/1.45=0.00132;CR<0.1则表明9项指标优先比较矩阵满足一致性要求,故所得权重系数有效,结果具有一致性。2.2.4 考察指标综合评价
根据单因素考察所得出的评分(表1~6),结合层次分析法权重系数,对成膜材料性能进行综合评分,其中,CMC-Na和PVA-1788综合评分最高,分别为87.45和64.49。详见表8。
表 8 成膜材料综合评分结果成膜材料 外观 厚度 拉伸性能 成膜时间 脱模效果 黏附时间 黏附力 溶胀系数 溶蚀速度 评分
(分)PVA-1788 6.23 4.79 6.23 3.70 6.23 12.10 10.74 3.77 10.73 64.49 HPC 6.23 6.23 1.65 2.69 4.98 7.24 8.87 6.44 8.05 52.38 HPMC 4.98 5.66 0.125 6.23 6.23 5.98 3.55 7.07 5.36 45.19 MC 3.74 4.15 0.161 3.45 6.23 9.20 10.56 11.42 0.00 48.90 SA 3.32 5.66 0.317 4.55 6.23 4.37 7.99 16.97 5.36 54.78 CMC-Na 5.82 5.19 0.185 3.48 6.23 9.77 12.07 20.57 24.14 87.45 GEL 4.57 5.19 0.117 3.74 3.12 0.57 0.595 5.222 2.68 25.80 通过单因素考察各种成膜材料,筛选出CMC-Na和PVA-1788,两种膜剂基质各有优点。CMC-Na溶胀系数大、溶蚀时间长,可改善其他基质较快溶解的缺点。PVA-1788黏附力大、黏附时间长,是良好的黏附性材料,可改善膜剂外观和柔软度,提高成膜效率和成品率。
2.3 缓释膜剂制备工艺的研究
采用物理凝聚法结合溶剂浇铸法设计膜剂制备工艺如下:取1.56 g的PVA-1788加入12.5 ml水,以300 r/min搅拌30 min,后加热至60 ℃搅拌至完全溶解,得PVA-1788凝胶。取4.68 g的CMC-Na加入117 ml水,以800 r/min在45 ℃下搅拌至完全溶解,得CMC-Na凝胶。将两种凝胶搅拌混合均匀,作为溶液①;分别取硫酸新霉素、盐酸达克罗宁、甘草次酸,分别加入40 ml水溶解,作为溶液②;取克霉唑、奥硝唑与冰片加入30 ml无水乙醇搅拌至溶解,作为溶液③;将溶液②、③缓慢加入45 ℃溶液①中,边加边以1 000 r/min搅拌,得质地均匀的含药混悬凝胶,静置消泡。
取凝胶16 g,浇铸铺展于半径为4.3 cm的培养皿中。取一份立即放置于烘箱中60 ℃干燥5 h;另取一份凝胶放置4 ℃冰箱12 h后转移至烘箱中60 ℃干燥5 h。待完全干燥后,将膜剂分割成2 cm×1 cm 小片,即得口腔膜剂,结果见图2。物理凝聚法制备的凝胶趁热烘干制得膜剂表面为乳白色不透明,颜色均匀。而物理凝聚法制备的凝胶经低温放置12 h制得膜剂烘干后可看到颗粒较小的沉淀,说明在低温下放置时间过长可能形成较大结晶,影响膜剂质量,趁热烘干可抑制水不溶性药物的析出。
2.4 成膜材料配比的正交试验
2.4.1 正交试验设计
在筛选出CMC-Na和PVA-1788作为成膜材料的基础上配伍一定比例甘油作为增塑剂,可提高膜剂的柔软度和脱膜效果,用量为成膜材料质量的0.5%~2%。按“2.3”方法制备膜剂进行正交试验,正交试验因素水平表见表9。
表 9 正交试验因素水平表水平 A因素PVA-1788
用量(m/g)B因素CMC-Na
用量(m/g)C因素甘油
用量(%)1 1 1 0.5 2 2 2 1 3 3 3 2 2.4.2 正交试验结果
以外观、厚度、拉伸性能、脱膜效果、成膜时间、溶胀系数、溶蚀速率、黏附时间、黏附力9个方面为评价指标,按照单因素考察的试验方法,结合“2.2.2”项下层次分析法各考察指标的权重系数计算综合评分(表10),通过方差分析(表11)和直观分析(表12)优选膜剂成膜材料的最佳比例。
表 10 正交试验综合评分结果组别 外观 厚度 拉伸性能 成膜时间 脱模效果 黏附时间 黏附力 溶胀系数 溶蚀速度 综合评分
(分)1 5.40 6.23 1.58 5.19 4.36 12.07 9.06 12.45 17.24 73.58 2 5.40 6.23 3.50 5.19 3.74 12.07 10.56 14.92 17.24 78.85 3 4.98 6.23 2.63 5.56 3.74 4.83 11.31 20.57 24.14 83.99 4 5.82 6.23 6.23 5.99 3.12 3.22 8.30 7.77 20.69 67.37 5 5.40 6.23 2.44 4.58 6.23 12.07 8.30 11.48 24.14 80.87 6 4.15 5.19 0.67 5.66 3.74 12.07 12.07 16.05 20.69 80.29 7 5.82 6.23 4.36 5.77 6.23 12.07 6.03 7.46 20.69 74.66 8 6.23 5.19 0.58 5.37 4.98 12.07 9.05 9.99 20.69 74.16 9 5.39 6.23 0.96 6.23 4.36 12.07 5.28 9.95 24.14 74.61 表 11 正交试验综合评分方差分析因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 P PVA-1788用量(m/g) 0.003 2 3.000 19.000 >0.05 CMC-Na用量(m/g) 0.009 2 9.000 19.000 >0.05 甘油用量(%) 0.006 2 6.000 19.000 >0.05 误差 0.00 2 表 12 正交试验综合评分直观分析序号 A因素PVA-
1788用量(m/g)B因素CMC-Na
用量(m/g)C因素甘油
用量(%)综合评分
(分)1 1 1 1 73.58 2 1 2 2 78.85 3 1 3 3 83.99 4 2 1 2 67.37 5 2 2 3 80.87 6 2 3 1 80.29 7 3 1 3 74.66 8 3 2 1 74.159 9 3 3 2 74.61 K1 0.850* 0.781 0.816 K2 0.821 0.838 0.798 K3 0.804 0.855* 0.861* R 0.046 0.074 0.063 注:*表示各因素最优水平条件 从正交试验方差结果显示,PVA-1788用量、CMC-Na用量、甘油用量对综合评分的贡献无显著性差异,三者用量配比需通过直观分析结果进行合理分配,正交试验直观分析显示,CMC-Na用量对综合评分影响较大,其次是甘油的用量,PVA-1788用量对综合评分影响较小。最优条件为A1B3C3,即最佳配比为:PVA-1788与CMC-Na的比例为1∶3,甘油用量为成膜材料用量的2%,与正交试验第3组试验条件一致,综合评分为83.99。
2.5 自制膜剂与市售膜剂的比较
按照“2.4.2”项下最优配比制备口腔溃疡缓释膜剂(D),依次进行外观评价、厚度、拉伸性能、溶胀速率、溶蚀速率、黏附力和黏附时间的测定,方法见“2.1”项下,并与市售复方庆大霉素膜(A)、复方氯己定地塞米松膜(B)及某医院院内制剂(C)进行对比,结果见表13,外观情况见图3。
表 13 自制膜剂与市售膜剂在不同考察项目的比较考察项目 复方庆大霉素膜(A) 复方氯己定地塞米松膜(B) 某医院院内制剂(C) 自制膜剂(D) 气泡 无 无 较多 无 颜色 浅蓝 黄色 浅黄色 白色 柔软度 很柔软 很柔软 较硬 软硬
适中平均拉伸长度(l/mm) 18.844 7.010 0.998 3.443 平均断点力(f/kg) 0.472 1.513 1.190 1.306 平均厚度(l/mm) 0.110 0.120 0.180 0.130 最大溶胀系数(%) 492.5 539.0 1898.1 1939.6 溶蚀时间(t/min) 60.0 60.0 140.0 120.0 黏附力(m/g) 40.0 45.0 5.0 55.0 黏附时间(t/min) 17.3 20.7 53.3 101.7 3. 讨论
以往对制剂进行研究一般仅以其中1~2种考察指标对制剂的性能进行评价,而考察指标的重要程度则常以主观设定权重,这样评价一种制剂性能的优劣不仅不全面,而且受到主观因素影响较大,往往评价重点考察指标的同时无法兼顾一般的考察指标。正如本课题筛选成膜材料需根据膜剂制备目标综合考察外观、厚度、拉伸性能、成膜时间、脱膜效果、黏附力、黏附时间、溶胀系数和溶蚀时间9个方面的考察指标,面对种类繁多、重要程度各不相同的考察指标,再采用以往的主观评价显得逻辑混乱且无说服力。因此,本课题采用单因素考察结合层次分析法,通过建立指标层不同指标两两比较矩阵,将不同重要性的指标进行统计学处理,得出科学合理的权重系数,以降低主观因素引起的误差,使评价更加全面、合理、客观。通过成膜材料单因素考察可知PVA-1788的弹性、拉伸性能、黏附力和黏附时间优于其他成膜材料,CNC-Na能使得膜剂吸水溶胀逐渐转变成凝胶状,提高膜剂的溶蚀时间。在单因素考察的基础上,设计正交试验,筛选出成膜材料的最佳配比为PVA-1788:CNC-Na为3∶1,并加入两者用量2%的甘油。
物理凝聚法是将分子或离子状态分散的药物溶液加入另一种分散介质中凝聚形成混悬液的方法,可制得10 μm以下的微粒。本试验将不溶于水的克霉唑、奥硝唑和冰片溶于无水乙醇中,在高速搅拌下缓慢加入水溶液中,使药物快速分散成极小的微粒,再利用成膜材料水凝胶的高黏度,抑制结晶增大和沉淀,并采用溶剂浇铸法迅速铺展和干燥,在药物微粒在尚未形成较大结晶前即完成膜剂的干燥,使不溶性药物均匀嵌入膜剂中。
自制膜剂为白色,外观均匀,无气泡,弹性适中,质地柔软,厚度较薄,气味清香,口味微甜,患者顺应性高,在口腔内使用舒适性好。市售复方氯己定地塞米松膜色素含量过高,溶蚀较快,使用后口感较差,对口腔有严重染色现象。市售复方庆大霉素膜具有较大的柔软度和拉伸长度,在实际使用中发现过于柔软,在口腔中易发生皱缩和折叠,在口腔粘贴过程中失败率较高。此外市售两种膜剂的黏附时间和溶蚀时间均较短,实际使用时无法起到长效缓释的作用。某医院院内制剂成膜材料为CMC-Na,因此具有较大的溶胀系数和较长的溶蚀时间,具有良好的缓释作用。单纯使用CMC-Na也存在一些缺陷,如气泡较多、拉伸性能较差、厚度较大、质地较硬等,其中最大的缺陷是CMC-Na初始黏附性较差,在试验过程中初始贴敷成功率较低,极易掉落,需要较长时间吸水溶胀形成凝胶后,才具有一定黏附性。本试验自制膜剂采用PVA-1788与CMC-Na配伍,使膜剂同时具备了较长的黏附时间和溶蚀时间,从黏附和缓释两方面确保膜剂对溃疡创面的滞留,改善了膜剂的外观、柔软度和拉伸性能,起到长效物理隔离和治疗作用。
-
表 1 CoQ10乳剂的灭菌和冻融试验结果
批次 粒径(l/nm) 灭菌前 灭菌后 冻融1次 冻融2次 冻融3次 1 241.4 239.6 255.7 263.0 271.2 2 238.5 240.0 252.6 265.9 272.3 3 240.2 238.7 259.0 263.5 269.1 表 2 CoQ10乳剂的光照稳定性试验结果
天数(t/d) 外观 含量(%) 粒径(l/nm) pH 0 良好 100.4 243.2 5.82 5 良好 97.7 239.8 5.79 10 良好 93.6 241.4 5.70 表 3 CoQ10乳剂在40 ℃的稳定性试验结果
天数(t/d) 外观 含量(%) 粒径(l/nm) pH 0 良好 100.4 243.2 5.82 5 良好 100.2 245.2 5.57 10 良好 99.5 245.0 5.21 -
[1] GARRIDO-MARAVER J, CORDERO M D, OROPESA-AVILA M, et al. Clinical applications of coenzyme Q10[J]. Front Biosci (Landmark Ed),2014,19:619-633. doi: 10.2741/4231 [2] ZOZINA V I, COVANTEV S, GOROSHKO O A, et al. Coenzyme Q10 in cardiovascular and metabolic diseases: current state of the problem[J]. Curr Cardiol Rev,2018,14(3):164-174. doi: 10.2174/1573403X14666180416115428 [3] YANG Y K, WANG L P, CHEN L, et al. Coenzyme Q10 treatment of cardiovascular disorders of ageing including heart failure, hypertension and endothelial dysfunction[J]. Clin Chim Acta,2015,450:83-89. doi: 10.1016/j.cca.2015.08.002 [4] FAROUGH S, KARAA A, WALKER M A, et al. Coenzyme Q10 and immunity: a case report and new implications for treatment of recurrent infections in metabolic diseases[J]. Clin Immunol,2014,155(2):209-212. doi: 10.1016/j.clim.2014.09.010 [5] 陈帅, 高彦祥. 基于生物大分子的辅酶Q10纳米传递载体的研究进展[J]. 中国食品学报, 2021, 21(1):361-369. [6] 温跃兰, 周卫, 陈宁. 辅酶Q10静脉注射乳的制备及其体外释放研究[J]. 华西药学杂志, 2015, 30(2):157-159. [7] 俞发, 张永昕. 姜黄素脂肪乳剂的制备工艺研究[J]. 中药材, 2015, 38(4):838-840. [8] SMYRNIOTIS V E, KOSTOPANAGIOTOU G G, ARKADOPOULOS N F, et al. Long-chain versus medium-chain lipids in acute pancreatitis complicated by acute respiratory distress syndrome: effects on pulmonary hemodynamics and gas exchange[J]. Clin Nutr,2001,20(2):139-143. doi: 10.1054/clnu.2000.0370 [9] WANG Y, WANG C L, DENG Y H, et al. A new application of monosialotetrahexosylganglioside in pharmaceutics: preparation of freeze-thaw-resistant coenzyme Q10 emulsions[J]. Eur J Pharm Sci,2021,159:105701. doi: 10.1016/j.ejps.2021.105701 [10] 邹佳, 于彬, 宋阳, 等. 粒径和质量浓度对辅酶Q10脂质体光解动力学的影响[J]. 沈阳药科大学学报, 2010, 27(1):24-27,33. [11] 邓意辉, 赵静, 董晓辉, 等. 一种复合型乳化剂及用其制备的乳剂及其制备方法: CN101091890A[P]. 2007-12-26. [12] ZHANG T, ZHOU S L, KANG L, et al. The effect of monosialylganglioside mix modifying the PEGylated liposomal epirubicin on the accelerated blood clearance phenomenon[J]. Asian J Pharm Sci,2017,12(2):134-142. doi: 10.1016/j.ajps.2016.06.005 [13] 王旭玲, 苏钰清, 宋艳志, 等. 不同密度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰乳剂比格犬体内药动学[J]. 沈阳药科大学学报, 2017, 34(4):338-344. [14] LEONHARD V, ALASINO R V, BIANCO I D, et al. Self-assembled micelles of monosialogangliosides as nanodelivery vehicles for taxanes[J]. J Control Release,2012,162(3):619-627. doi: 10.1016/j.jconrel.2012.07.031 -