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荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）是指供体荧光分子发射光谱与受体分子的吸收光谱有显著的重叠且分子间距小于10 nm时发生的一种非放射性的能量转移[1]，导致供体荧光淬灭而受体荧光增强或不变。近些年，FRET技术以其精准高效的特点被广泛应用在分析检测领域，为检测生物分子提供了重要的分析方法。基于FRET技术，实现了活细胞内ATP分子的检测[2]，金属离子如汞离子的检测[3-4]，许多疾病相关基因[5-6]以及酶活性的检测等[7-8]。
银纳米簇（AgNCs），作为一种新型的低毒性“绿色”荧光标记材料，具有量子产率高、毒性低、生物相容性好等特点[9]，使得其被广泛应用在多个研究领域。在银纳米簇的合成过程中，相较于其他的合成模板，DNA更具优势，如DNA具有分子识别的功能（包括对于互补链和小分子的识别），不同序列的DNA模板可调谐不同的发射波长等[10]。
研究发现，G碱基可以增强DNA/银纳米簇（DNA/AgNCs）的荧光强度[11-12]，基于此，我们设计了系列非银簇模板部分的互补链，考察G碱基个数对于银簇荧光强度的影响，实验结果显示，暴露的G碱基个数与银簇的荧光强度呈正相关关系。该实验不仅验证了G碱基对于银簇荧光的增强作用，还提示我们在设计含有G-四联体适配体的荧光探针时，可通过改变非银簇部分的互补链长短来调控荧光的淬灭及恢复程度，以获得最佳的检测效果。
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VS-100C恒温混匀仪（无锡沃信仪器制造有限公司）；FL-6500荧光分光光度计（PerkinElmer）；ZEN3600粒径电位测定仪（英国马尔文公司）；精密电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；Vortex-Genie2多功能旋涡混合器（美国Scientific Industries公司）；TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）；实验室pH计 FE20[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Tecnai G2 F30高分辨率电子显微镜（荷兰FEI公司）
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硝酸银、硼氢化钠、盐酸(国药集团化学试剂有限公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris，大连美仑生物技术有限公司)；氯化镁、氯化钠、氯化钾(上海泰坦科技股份有限公司)；试剂均为分析纯。实验用水为屈臣氏蒸馏水。
相关DNA序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。合成DNA-AgNCs的模板序列及P1A5C5的互补序列如表1、表2所示。
表 1 DNA/AgNCs的模板序列
名称 序列（5′—3′） P1C5 GGAGGTGGTGGGGCCCCCTAATTCCCCC P1AC5 GGAGGTGGTGGGGACCCCCTAATTCCCCC P1A5C5 GGAGGTGGTGGGGAAAAACCCCCTAATTCCCCC P1N GGAGGTGGTGGGGCCCTAACTCCCC P1Y GGAGGTGGTGGGGCCCTTAATCCCC 表 2 P1A5C5的互补序列
名称 序列（5′—3′） 0G CCTCCACCACCCCTTTTT 1G CTCCACCACCCCTTTTT 2G TCCACCACCCCTTTTT 4G TCCACCCCTTTTT 5G CACCCCTTTTT 6G ACCCCTTTTT 7G CCCTTTTT -
加入相应体积的20 mmol/L Tris-HCl（pH=7.4）缓冲溶液将DNA溶解，即制得100μmol/L DNA溶液，将制得的DNA溶液95 ℃加热5 min后，冰水浴冷却10 min。
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参考文献中的合成方法[13]，将一定体积的硝酸银溶液加入到上述DNA溶液中（20 mmol/L Tris-HCl，pH=7.4），充分震荡混匀，25 ℃孵育20 min，静置，将一定体积新配制的硼氢化钠引入到上述反应混合物中，最终使得体系中DNA、硝酸银、硼氢化钠的浓度分别为5、30、30μmol/L（即DNA：Ag+∶NaBH4的摩尔比为1∶6∶6），剧烈震荡混匀，室温下避光反应3 h后，4 ℃避光反应过夜。得到的银纳米簇溶液在4 ℃保存以备用。
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荧光图谱表征：将2μmol/L的银纳米簇溶液在200～800 nm波长范围内进行荧光光谱预扫描，设置激发和发射狭缝宽度为10 nm，扫描速度为1200 nm/min，电压值为400 V。
高分辨率透射电子显微镜表征：将银纳米簇溶液滴加铜网后观察。
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在含有100 mmol/L NaCl,2 mmol/L MgCl2，5 mmol/L KCl的20 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液中（pH=7.4），加入银簇溶液（2μmol/L），将互补的DNA溶液（表2）以1∶1的摩尔比分别加入到上述体系溶液中，充分震荡混匀，37 ℃孵育20 min。在室温条件下进行荧光光谱测量。激发波长为486 nm，激发和发射狭缝宽度为10 nm，扫描速度为1200 nm/min，电压值为400 V。
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在进行DNA/AgNCs的合成时，基于胞嘧啶碱基与银离子的作用，一般选择富含胞嘧啶碱基的序列作为合成模板，笔者根据文献报道的模板序列结合模板优化设计[13-16]，选择了5种银簇模板并进行了相应的碱基优化设计，如表1所示，结果显示P1A5C5的荧光信号强度较高（如图1），且4 ℃避光保存45 d后，荧光信号强度基本不变，稳定性良好。因此，我们使用该序列合成的DNA/AgNCs进行后续的实验研究。
图 1 5种DNA/AgNCs模板序列的荧光图谱表征
对生成的P1A5C5银纳米簇体系进行荧光激发光谱和发射光谱的表征，结果如图2所示，在487 nm激发条件下，发射波长为577 nm。
图 2 P1 A5 C5银纳米簇的荧光图谱表征
DNA/AgNCs的高分辨透射电子显微镜（HRTEM）图片如图3所示，从图中可以看出，DNA/AgNCs的直径约为2~3 nm,分散性良好。
图 3 DNA/AgNCs的高分辨率透射电子显微镜图
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在银簇P1A5C5序列5′-GGAGGTGGTGGGGAAAAACCCCCTAATTCCCCC-3′中，CCCCCTAATTCCCCC为成簇模板序列，下划线部分为岩沙海葵毒素的G-四联体适配体[17]。基于G碱基对银簇的荧光信号强度有增强作用这一现象，我们设计了一系列适配体部分的互补序列（表2），通过C-G碱基互补，适配体部分暴露的G碱基个数不同，导致与银纳米簇作用的碱基G数目不同，进而对银纳米簇的荧光信号强度产生不同的影响。结果显示，随着暴露的G碱基个数的增加，荧光信号强度增加（图4A），对暴露的G碱基个数与荧光信号强度关系进行拟合，得到的线性方程为：Y=1726.1X+8972.5，r=0.9789（图4 B）。该研究证明了G碱基对银簇的荧光具有增强效果，反之，通过C-G碱基互补配对，G碱基与银簇的作用位点被占据，无法与银簇作用，难以达到增强荧光信号强度的作用。因此，随着暴露碱基个数的减少，荧光强度减弱。基于此，可实现与G-四联体适配体有关的荧光开关的设计，进而实现对目标物的检测。
图 4 P1 A5 C5与互补链作用后的荧光光谱图及线性关系图
在DNA序列和银纳米簇进行碱基互补配对时，结合互补序列的Tm值，我们研究了互补链间实现碱基互补配对所需的温度和时间。实验结果显示，相较于4 ℃，在37 ℃条件下孵育，互补链间相互作用较强，容易实现碱基互补配对，荧光信号强度变化较为明显；同时，考察了在37 ℃下作用1 h内的荧光变化情况，结果显示，荧光变化强度随时间未发生明显变化，最终选择20 min作为孵育时间。
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该实验利用含有G四联体适配体的DNA序列合成了荧光银纳米簇，基于G碱基可以增强银纳米簇的荧光这一现象，并结合碱基互补配对的原则，设计了8种G四联体适配体的互补链，在互补链和适配体部分碱基互补配对后，荧光信号强度也产生相应的变化。随着互补链长度的缩短，暴露的G碱基个数增加，荧光信号增强，且暴露的G碱基个数与荧光信号强度拟合得到的线性方程为：Y=1726.1X+8972.5，r=0.9789。该实验不仅证实了G碱基对荧光银纳米簇有荧光增强作用，还提示我们在设计含有G四联体的银纳米簇荧光探针时，可以通过互补链对荧光信号的干扰程度来调控荧光的开闭，这对进一步扩展银纳米簇在荧光分析方法中的应用具有指导意义。
The effect of different guanine base number on fluorescence intensity of DNA/ silver nanoclusters
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摘要:
目的 通过C-G碱基互补配对的方式，考察不同鸟嘌呤碱基(G)数目对DNA/银纳米簇荧光信号强度的影响，以此来探究新的荧光探针开关构建的方法。 方法 利用核酸碱基互补配对原则，设计了一系列银纳米簇的适配体部分的互补序列,考察了银纳米簇的适配体序列中暴露的G碱基个数对荧光信号的影响。 结果 碱基G可增强银纳米簇的荧光信号强度，且荧光信号强度与G碱基个数呈现正相关关系，拟合线性方程为Y=1726.1X+8972.5，r=0.9789。 结论 该实验研究对于调节银纳米簇的荧光强度以及设计适配体为G四联体的荧光探针开关具有借鉴意义。 Abstract:Objective To investigate the effect of different guanine base numbers on the fluorescence intensity of DNA/ silver nanoclusters through C-G base complementary pairing, in order to explore a new method for the construction of fluorescent probe switches. Methods Designed complementary sequences of aptamer parts of a series of silver nanoclusters by using the nucleic acid base complementary pairing principle, and investigated the effect of the number of G bases exposed in the aptamer sequence on the fluorescence signal. Results Base G could enhance the fluorescence signal intensity of silver nanoclusters, and the fluorescence signal strength was positively correlated with the number of G bases. The fitting linear equation was Y=1726.1X+8972.5, r=0.9789. Conclusion This study is a great reference for the regulation of fluorescence intensity of silver nanoclusters and the design of G quadruplet aptamer fluorescent probe switch. -
Key words:
- DNA/AgNCs /
- complementary pairing /
- fluorescence probe /
- aptamer
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皮肤是人体最大的器官，日常生活中难免受到损伤形成伤口，如轻微的皮肤擦伤、割伤和烧伤等。对于日常的小伤口，一般可以任其自愈，但若稍不注意沾水或接触外界细菌，则容易造成感染，影响伤口愈合，甚至造成溃烂。我们常用的创面处理方法有：使用创可贴覆盖；双氧水或碘伏消毒处理；纱布包扎等。这些处理方法存在着防水透气性差、撕除时疼痛和使用不便等问题。20世纪60年代，Winter博士的研究证实了湿润的伤口环境有助于上皮组织更快的形成，并以此为依据提出了“湿性愈合”的概念[1]。这一研究提高了人们对伤口护理的认识，也为研发封闭敷料奠定了基础。由于传统的敷料不能在伤口处使用较长时间，也不能为伤口愈合提供一个湿润的环境，因此，各种高科技的湿性疗法的伤口护理产品层出不穷。在日本及美国等发达国家，出现以硝化纤维为主要材料的新型创伤敷料[2-4]，可用于密封小型伤口甚至保护烧伤创面。此类创伤敷料在使用前为液体形态，涂抹在伤口后有机溶剂迅速挥发，短时间覆盖伤口形成保护膜，具有防水、杀菌、预防伤口感染等优点[5-7]。本研究拟以市售小林液体创可贴为基础，以硝化纤维为膜材，优化处方，制备一种性能更为优良的液体创伤敷料。
1. 材料
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Shimadzu HS-20气相色谱仪（日本Shimadzu公司）；拉力试验机（上海和晟仪器有限公司）；AL204型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；D2400型纯水/超纯水一体机（美国明澈公司）；25型无极调速电动搅拌机（江苏江阴科技器械厂）。
1.2 试药
小林液体创可贴（日本小林制药株式会社）；硝化纤维（衡水东方化工有限公司）；蓖麻油、樟脑、苯甲醇、乙酸丁酯、异丙醇、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇（均为国药集团化学试剂有限公司）；棕榈酸异丙酯（IPP，青岛优索化学科技有限公司）；乙酸乙酯（上海联试试剂有限公司）。
2. 方法与结果
2.1 市售产品小林液体创可贴中苯甲醇含量及溶剂组成的测定
2.1.1 苯甲醇的含量测定
采用高效液相色谱法测定，色谱条件：采用Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱：ODS-C18色谱柱；流动相：甲醇-水（50∶50 V/V）；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；柱温：40 ℃；检测波长：257 nm。
标准曲线的绘制：精密称定苯甲醇对照品151.3 mg置于100 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度；精密量取上述溶液1、2、2.5、3、4 ml于25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。市售产品（供试品）溶液的配制：精密称定244.3 mg市售产品于50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
实验结果：色谱图良好，苯甲醇对照品及市售产品均在5.87 min附近有峰且峰型良好。标准曲线回归方程为：Y = 13040X + 212.7 (r=0.999)；经计算得市售产品苯甲醇的使用量为4.0%。
2.1.2 溶剂组成的测定
采用气相色谱法测定，色谱条件：采用 HS-20气相色谱仪；色谱柱：DB-624毛细管柱；载气：H2 50 ml/min；空气450 ml/min；进样量：1 μl；柱温：40 ℃/min持续3 min，10 ℃程序升温至200 ℃，持续1 min；检测器温度：250 ℃；气化室温度：220 ℃；FID检测器。
标准曲线的绘制：精密称定异丙醇1.0077 g，乙酸乙酯0.9933 g，乙酸丁酯1.0014 g于100 ml容量瓶中，加入适量N,N-二甲基甲酰胺（DMF）混合均匀，用DMF稀释至刻度。分别取上述溶液0.1、0.25、0.5、0.75、1.0 ml置于25 ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。
市售产品（供试品）溶液的配制：精密称定1.186 0 g市售产品于100 ml容量品中，加入适量的DMF超声溶解，用DMF稀释至刻度，精密量取1 ml上述液体于10 ml容量瓶中，用DMF稀释至刻度。
实验结果：色谱图良好，异丙醇对照品及市售产品均在6.84 min附近有峰且峰型良好，乙酸乙酯对照品及市售产品均在9.25 min附近有峰且峰型良好，乙酸丁酯对照品及市售产品均在14.07 min附近有峰且峰型良好；苯甲醇标准曲线、乙酸乙酯标准曲线和乙酸丁酯标准曲线的回归方程分别为：
Y = 20152X + 2.692， r=1.000
Y = 15311X + 33.45 ，r=0.999
Y = 24428X – 17.33， r=0.999
经计算得市售产品中异丙醇的使用量为35.1%，乙酸乙酯的使用量为21.4%，乙酸丁酯的使用量为5.3%。即三者使用比例为：6.6∶4∶1。
2.2 液体创伤敷料及敷料薄膜的制备
2.2.1 液体创伤敷料的制备方法
采用硝化纤维（4%~8%）作为成膜材料，蓖麻油（1%~9%）为增塑剂，苯甲醇（4%）为抑菌剂，棕榈酸异丙酯（IPP，2%）为皮肤柔润剂，樟脑（0.3%）为芳香剂，以异丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯（三者比例为6.6∶4∶1）作为溶剂制备创伤敷料。制备方法如下：于50 ml烧杯中精密称定处方量蓖麻油、苯甲醇、IPP、樟脑，加入上述3种混合溶剂使混合均匀，加入处方量硝化纤维，密封静置过夜待硝化纤维充分溶解，过夜后搅拌使硝化纤维混合均匀，超声除气泡即得。
2.2.2 敷料薄膜的制备方法
精密称定2 g按“2.2.1”项制备的液体创伤敷料，加入20 ml乙酸乙酯稀释使之混合均匀、黏度下降并充分溶解。将此液体置于90 mm培养皿中待溶剂挥干后可见均一透明无色薄膜。所制薄膜外观如图1所示。
2.3 评价指标的确立
按照中华人民共和国医药行业标准YY/T 0471-2004对直接接触类创伤敷料，进行舒适性、防水性、透气性的考察。舒适性考察主要为考察敷料薄膜的抗张强度及断点伸长百分率[8-9]；防水性考察薄膜的防水能力；透气性考察薄膜的水蒸气透过率（MVTR）[10]。抗张强度及断点伸长百分率的考察运用拉伸试验机，并采用公式1、公式2进行计算；防水性的考察采用倒杯法，记录24 h后的重量差异，如图2所示，以公式3进行计算；MVTR的考察方法：在西林瓶中加入蒸馏水，用薄膜覆盖密封，使水液面距薄膜（5±1）mm，置干燥器中，记录24 h后的重量差异，以公式4进行计算。
$$ {\text{抗张强度}}= {\rm{F}}/{\rm{S}}\quad\quad\quad\quad\quad\quad\quad\;\;\;\;\; $$ (1) $$ {\text{断点伸长百分率}} = {{\rm{L}}_{{\rm{max}}}}/{{\rm{L}}_{\rm{o}}} \times 100 {\text%} $$ (2) $$ {\text{水分损失率}}= \left( {{{\rm{M}}_{\rm{0}}} - {{\rm{M}}_{24{\rm{h}}}}} \right)/{{\rm{M}}_{\rm{W}}}\quad\;\;\; $$ (3) $$ {\text{水蒸气透过率}} = \left( {{{\rm{M}}_{\rm{0}}} - {{\rm{M}}_{24{\rm{h}}}}} \right)/\left( {{\rm{s}} \times t} \right) $$ (4) 式中，F为拉伸力；S为薄膜面积；Lmax为拉伸最大距离；L0为初始膜长；M0为初始西林瓶重量；M24h为24 h后西林瓶重量；MW为西林瓶内水重量；s为瓶口面积；t为时间24 h。
2.4 硝化纤维用量的考察
分别采用4%、6%、8%的硝化纤维制备液体创伤敷料，对所制的薄膜进行评价，其断点伸长百分率、防水性能考察的水透过率及MVTR值随着硝化纤维用量的增加呈下降趋势，抗张强度随着硝化纤维用量的增加呈上升趋势。其考察结果如图3~图6所示：
由图3、图4可知，硝化纤维的用量为4%、6%时，断点伸长百分率在170%以上，可认为薄膜韧性较好，在伤口表面有较好的舒适性，而硝化纤维用量为8%时，其断点伸长百分率较低，不足150%；在硝化纤维用量为4%时，所制薄膜过薄，导致其抗张强度较差，不及2.0 MPa。从图5可知，MVTR值在0.3~0.6 mg/(cm2·h)之间，随硝化纤维用量增加而减小，但均具有一定的透气性；由图6可知，三个不同梯度的硝化纤维在24 h内其水损失率均在2.5%以下，可认为防水性良好。综上考察结果，本次采用的硝化纤维用量为6%。
2.5 蓖麻油用量的考察
确定硝化纤维使用量为6%后，分别采用1%、5%、9%用量的蓖麻油制备液体创伤敷料，对所制的薄膜进行评价，由图7、图8可知，其断点伸长百分率随蓖麻油用量增加呈上升趋势，在蓖麻油使用量为1%时断点伸长百分率较差，不及150%，在5%~9%上升趋势明显且在蓖麻油用量为9%时达到190%，断点伸长百分率值数据较为理想；抗张强度随蓖麻油用量未呈明显下降趋势，反而是在蓖麻油使用量为5%时具有最大的抗张强度，而伸长率较好的9%用量蓖麻油处方抗张强度明显较小，在2.5 MPa左右，故蓖麻油用量选用浓度为5%。
关于蓖麻油对防水性能和透气性能的影响如图9、图10所示，蓖麻油用量为1%时其MVTR值明显高于5%和9%时，且其水损失率也高于5%和9%时，由于5%与9%的防水性没有太大的差异。由此可以得出的结论是，随着蓖麻油的加入，创伤敷料的透气性变差，同时其防水性能却有所增强，1%用量蓖麻油透气性能极佳，但机械性能及防水性相对较差，又因其水损失率24 h也没有达到5%，也可以认为其防水性能良好。所以下一步的考察尽量满足透气性的需求。
综合断点伸长百分率、抗张强度、MVTR值、水损失率，在保证机械强度的同时尽量满足其透气性的要求。拟在1%~5%之间再另设梯度进行考察。拟定蓖麻油使用量为2%、3%、4%时对上述指标再行考察。
由图11、图12可知处方断点伸长百分率及抗张强度在1%~5%范围内随蓖麻油用量的增加总体上均有一定的上升趋势。断点伸长百分率在蓖麻油用量为1%、2%时相差不大，在2%~5%时有明显的上升趋势；抗张强度在蓖麻油用量1%、2%时和4%、5%时相差不大，在蓖麻油用量从2%~4%时有明显的上升趋势。
由图13、图14可知在蓖麻油用量为1%~5%范围内MVTR值及水损失率随处方中蓖麻油用量的增加而呈下降趋势。
综合以上几个因素对处方中的蓖麻油用量进行考察，从所制薄膜的机械性能来看，在蓖麻油用量为1%~3%时，断点伸长百分率不及160%，抗张强度较差，不及3.60 MPa，故此用量不予考虑，从所制薄膜的防水透气效果来看，4%、5%用量均有一定的透气效果，且防水性测试结果显示二者水损失率均不超过2.50%。综上考虑，确定蓖麻油的使用量为4%。
3. 讨论
本文对市售产品的抑菌剂含量及溶剂组成进行了分析，以此作为基础对自制的液体创伤敷料进行单因素考察，确定了硝化纤维的最终用量为6%，蓖麻油的使用量为4%，所成薄膜具有良好的机械性能，具有透气性的同时又有着良好的防水效果。硝化纤维为主要的成膜材料，其用量对几个评价指标均有影响，其主要原因是其使用量的不同可造成所成薄膜的厚度不同，即创伤敷料薄膜厚度与硝化纤维用量成正比，其膜的厚度必然影响各项指标性能。蓖麻油作为增塑剂，对处方的影响主要在于：蓖麻油的加入能改变硝化纤维聚合物链之间的结构，使链与链之间的作用力产生变化从而在一定程度上影响薄膜的塑性。其次，蓖麻油的加入，可能堵塞了硝化纤维薄膜的纳米孔道，故呈现出其用量增加透气性能下降的趋势。
皮肤创伤，在临床和日常生活中都较为常见，伤口愈合的速度一定程度上取决于创伤表面环境，创伤表面环境需保持一定的潮湿性，即湿润表面可以加速伤口愈合，因此良好的创伤敷料，应具有一定的透气性，对于日常伤口来说，由于伤口表面的复杂，使用在创伤表面的敷料也应具有一定的机械性能。本实验主要探讨了硝化纤维和蓖麻油的用量对创伤敷料性能的影响，为下一步制备性能更加优良的创伤敷料提供研究基础。
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表 1 DNA/AgNCs的模板序列
名称 序列（5′—3′） P1C5 GGAGGTGGTGGGGCCCCCTAATTCCCCC P1AC5 GGAGGTGGTGGGGACCCCCTAATTCCCCC P1A5C5 GGAGGTGGTGGGGAAAAACCCCCTAATTCCCCC P1N GGAGGTGGTGGGGCCCTAACTCCCC P1Y GGAGGTGGTGGGGCCCTTAATCCCC 
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表 2 P1A5C5的互补序列
名称 序列（5′—3′） 0G CCTCCACCACCCCTTTTT 1G CTCCACCACCCCTTTTT 2G TCCACCACCCCTTTTT 4G TCCACCCCTTTTT 5G CACCCCTTTTT 6G ACCCCTTTTT 7G CCCTTTTT
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[1] CHEN X, KO S K, KIM M J, et al. A thiol-specific fluorescent probe and its application for bioimaging[J]. Chem Commun (Camb),2010,46(16):2751-2753. doi: 10.1039/b925453f [2] ZHAO J, GAO J, XUE W, et al. Upconversion luminescence-activated DNA nanodevice for ATP sensing in living cells[J]. J Am Chem Soc,2018,140(2):578-581. doi: 10.1021/jacs.7b11161 [3] AMIRI S, AHMADI R, SALIMI A, et al. Ultrasensitive and highly selective FRET aptasensor for Hg2+ measurement in fish samples using carbon dots/AuNPs as donor/acceptor platform[J]. New J Chem,2018,42(19):16027-16035. doi: 10.1039/C8NJ02781A [4] GUO H, LI J S, LI Y W, et al. A turn-on fluorescent sensor for Hg2+ detection based on graphene oxide and DNA aptamers[J]. New J Chem,2018,42(13):11147-11152. doi: 10.1039/C8NJ01709C [5] FANG B Y, LI C, AN J, et al. HIV-related DNA detection through switching on hybridized quenched fluorescent DNA-Ag nanoclusters[J]. Nanoscale,2018,10(12):5532-5538. doi: 10.1039/C7NR09647J [6] GUO W, YUAN J, DONG Q, et al. Highly sequence-dependent formation of fluorescent silver nanoclusters in hybridized DNA duplexes for single nucleotide mutation identification[J]. J Am Chem Soc,2010,132(3):932-934. doi: 10.1021/ja907075s [7] WANG L J, REN M, ZHANG Q Y, et al. Excision repair-initiated enzyme-assisted bicyclic cascade signal amplification for ultrasensitive detection of uracil-DNA glycosylase[J]. Anal Chem,2017,89(8):4488-4494. doi: 10.1021/acs.analchem.6b04673 [8] XU N, WANG Q, LEI J, et al. Label-free triple-helix aptamer as sensing platform for “signal-on” fluorescent detection of thrombin[J]. Talanta,2015,132:387-391. doi: 10.1016/j.talanta.2014.09.031 [9] LATORRE A, SOMOZA Á. DNA-mediated silver nanoclusters: synthesis, properties and applications[J]. Chembiochem,2012,13(7):951-958. doi: 10.1002/cbic.201200053 [10] LIU J W. DNA-stabilized, fluorescent, metal nanoclusters for biosensor development[J]. Trac Trends Anal Chem,2014,58:99-111. doi: 10.1016/j.trac.2013.12.014 [11] YEH H C, SHARMA J, HAN J J, et al. A DNA-silver nanocluster probe that fluoresces upon hybridization[J]. Nano Lett,2010,10(8):3106-3110. doi: 10.1021/nl101773c [12] WALCZAK S, MORISHITA K, AHMED M, et al. Towards understanding of poly-guanine activated fluorescent silver nanoclusters[J]. Nanotechnology,2014,25(15):155501. doi: 10.1088/0957-4484/25/15/155501 [13] RICHARDS C I, CHOI S, HSIANG J C, et al. Oligonucleotide-stabilized Ag nanocluster fluorophores[J]. J Am Chem Soc,2008,130(15):5038-5039. doi: 10.1021/ja8005644 [14] MA J L, YIN B C, YE B C. DNA template-regulated intergrowth of a fluorescent silver nanocluster emitter pair[J]. RSC Adv,2015,5(119):98467-98471. doi: 10.1039/C5RA21159J [15] LIN R, TAO G, CHEN Y, et al. Constructing a robust fluorescent DNA-stabilized silver nanocluster probe module by attaching a duplex moiety[J]. Chemistry,2017,23(45):10893-10900. doi: 10.1002/chem.201701879 [16] JIANG Y T, TANG Y G, MIAO P. Polydopamine nanosphere@silver nanoclusters for fluorescence detection of multiplex tumor markers[J]. Nanoscale,2019,11(17):8119-8123. doi: 10.1039/C9NR01307E [17] GAO S, ZHENG X, HU B, et al. Enzyme-linked, aptamer-based, competitive biolayer interferometry biosensor for palytoxin[J]. Biosens Bioelectron,2017,89(pt 2):952-958. -
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