留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

应中央军委要求,2022年9月起,《药学实践杂志》将更名为《药学实践与服务》,双月刊,正文96页;2023年1月起,拟出版月刊,正文64页,数据库收录情况与原《药学实践杂志》相同。欢迎作者踊跃投稿!

UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量

崔莉莉 陈勇 张蒙伟 鄢红霞 高守红 陈万生

崔莉莉, 陈勇, 张蒙伟, 鄢红霞, 高守红, 陈万生. UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
引用本文: 崔莉莉, 陈勇, 张蒙伟, 鄢红霞, 高守红, 陈万生. UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
CUI Lili, CHEN Yong, ZHANG Mengwei, YAN Hongxia, GAO Shouhong, CHEN Wansheng. Determination of 11 main components in Hanshi Yufei decoction, a COVID-19 empirical prescription by UHPLC-MS/MS[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
Citation: CUI Lili, CHEN Yong, ZHANG Mengwei, YAN Hongxia, GAO Shouhong, CHEN Wansheng. Determination of 11 main components in Hanshi Yufei decoction, a COVID-19 empirical prescription by UHPLC-MS/MS[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017

UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
基金项目: 上海市临床药学重点专科建设项目(2016-40044-002);上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目(2016ZB0303)
详细信息
    作者简介:

    崔莉莉,硕士生,研究方向:药物分析与临床药学,Email:CuiLiLi1993@126.com

    通讯作者: 高守红,硕士,副主任药师,研究方向:药物分析与临床药学,Email:gaoshouhong@smmu.edu.cn
  • 中图分类号: R917

Determination of 11 main components in Hanshi Yufei decoction, a COVID-19 empirical prescription by UHPLC-MS/MS

图(2) / 表(2)
计量
  • 文章访问数:  2222
  • HTML全文浏览量:  723
  • PDF下载量:  35
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2020-12-05
  • 修回日期:  2021-03-13
  • 网络出版日期:  2021-03-31
  • 刊出日期:  2021-03-25

UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
    基金项目:  上海市临床药学重点专科建设项目(2016-40044-002);上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目(2016ZB0303)
    作者简介:

    崔莉莉,硕士生,研究方向:药物分析与临床药学,Email:CuiLiLi1993@126.com

    通讯作者: 高守红,硕士,副主任药师,研究方向:药物分析与临床药学,Email:gaoshouhong@smmu.edu.cn
  • 中图分类号: R917

摘要:   目的  建立测定寒湿郁肺汤中11个主成分含量的方法。  方法  采用超高效液相色谱串联质谱法(UHPLC-MS/MS),色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(3.5 μm,2.1 mm×150 mm ),流动相为0.2%甲酸-10 mmol/L醋酸铵水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~0.6 min, 80%~40%A; 0.6~1 min, 40%~30%A; 1~4.3 min, 30%~5%A),流速0.3 ml/min,柱温40 ℃。以利血平为检测内标,采用多反应监测模式同时测定香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷11个化学主成分的含量。  结果  寒湿郁肺汤中11个主成分在各自浓度范围内线性关系良好(r>0.98),平均回收率在93.11%~111.73%。  结论  该实验所建立的方法操作简便、重复性好,为寒湿郁肺汤的质量控制提供了实验室依据。

English Abstract

崔莉莉, 陈勇, 张蒙伟, 鄢红霞, 高守红, 陈万生. UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
引用本文: 崔莉莉, 陈勇, 张蒙伟, 鄢红霞, 高守红, 陈万生. UHPLC-MS/MS法测定新冠肺炎经验方寒湿郁肺汤中11种主成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
CUI Lili, CHEN Yong, ZHANG Mengwei, YAN Hongxia, GAO Shouhong, CHEN Wansheng. Determination of 11 main components in Hanshi Yufei decoction, a COVID-19 empirical prescription by UHPLC-MS/MS[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
Citation: CUI Lili, CHEN Yong, ZHANG Mengwei, YAN Hongxia, GAO Shouhong, CHEN Wansheng. Determination of 11 main components in Hanshi Yufei decoction, a COVID-19 empirical prescription by UHPLC-MS/MS[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(2): 148-151, 156. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202012017
  • 新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,COVID-19),具有较强的人际传播能力,传播速度快[1-3]。COVID-19患者会出现与流感类似的症状,包括发烧、咳嗽、乏力、腹泻等,重症患者出现呼吸困难或低氧血症,可发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、多器官功能衰竭等导致死亡[4]。中医药早期干预可有效预防病情向重、危重方向恶化[5]。目前,中医药控制COVID-19的疗效普遍受到重视[6],业界提倡结合不同疾病阶段使用不同的处方[2]。寒湿郁肺汤为武汉火神山医院依据国家卫健委印发的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》所引进的四种肺炎诊疗中药汤剂处方之一,用于新型冠状病毒初期治疗,该汤剂由苍术、陈皮、厚朴、藿香、草果、生麻黄、羌活、生姜共八味中药组方而成。

    UHPLC-MS/MS因具有分离能力强,检测限低,高灵敏度,高选择性等特点,易于开发为临床检测项目的参考方法[7]。本研究应用UHPLC-MS/MS法,依照2015版中国药典对寒湿郁肺汤中11种主成分进行含量测定,为后续的质量研究奠定基础。

    • Agilent1290超高效液相色谱仪(包括G4220A二元高压泵、G4226A自动进样器、G1330B控温箱、G1316C柱温箱)、Agilent G6460A型三重四极杆串联质谱仪、电喷雾离子源、Mass Hunter化学工作站B.06.00(美国Agilent公司);BSA124S-CW型天平、CPA225D型天平(德国Sartorius公司);Mini spin型离心机、移液枪(德国Eppendorf公司);Labnet VX-200型定时可调速涡旋混合器(美国Labnet公司);SK7200H型超声仪(上海科导超声仪器有限公司);UNIVERSAL32R型台式冷冻离心机(德国Hettich公司)。

    • 香草酸(批号:H11J9Z65318)、厚朴酚(批号:Y27J10C91584)、和厚朴酚(批号:T28O6B5149)、汉黄芩素(批号:T11J11R108209)、刺槐素(批号:C12O8Q45551)、6-姜酚(批号:P29O10F101611)、桔皮素(批号:H24F11K108893)、羌活醇(批号:R28M9F57295)、川陈皮素(批号:N10J10R90249)、紫花前胡苷(批号:W07A10Z94862)、利血平(批号:Y02M11Y17235)、橙皮苷(批号:P06D9F77001)均为对照品,纯度均≥97%,购于上海源叶生物科技有限公司;甲醇(批号:10951907818,质谱级)、乙腈(批号:JA075930,质谱级)购自德国默克公司;甲酸(批号:17033D,分析纯)、乙酸铵(批号:H1709024,色谱纯)购自阿拉丁试剂(上海)有限公司;水为屈臣氏蒸馏水(广州屈臣氏食品饮料有限公司),其余试剂均为分析纯。

    • 寒湿郁肺汤中苍术(批号:20092108)、陈皮(批号:20010181)、厚朴(批号:20061903)、藿香(批号:20031708)、草果(批号:19092902)、生麻黄(批号:20200301)、羌活(批号:20070709)等中药材均由上海长征医院药材科提供,生姜(批号:19062404)购于广西壮族自治区。

    • 分别取各对照品适量,精密称定,用甲醇配制成含1.01 mg/ml香草酸、0.99 mg/ml厚朴酚、1.03 mg/ml和厚朴酚、1.00 mg/ml汉黄芩素、1.00 mg/ml刺槐素、1.01 mg/ml 6-姜酚、1.02 mg/ml桔皮素、1.01 mg/ml羌活醇、1.03 mg/ml川陈皮素、1.00 mg/ml紫花前胡苷、1.00 mg/ml利血平(IS)和1.00 mg/ml橙皮苷的对照品溶液,于−20 ℃冰箱保存,备用。

    • 取寒湿郁肺汤中苍术15 g、陈皮10 g、厚朴10 g、藿香10 g、草果6 g、生麻黄6 g、羌活10 g、生姜10 g,精密称定,置锅中,加水500 ml,浸泡30 min,加热至煮沸后调至文火煎20 min,取药液;第二次加水300 ml,加热至煮沸后调至文火煎20 min,取药液,与第一次药液混匀,取出,放冷。精密量取药液1 ml,加入1 μg/ml的利血平10 μl,涡旋3 min,14 500 r/min离心10 min,取上清液,经0.22 μm微孔滤膜过滤,续滤液即为供试品溶液。

    • Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱( 3.5 μm,2.1 mm×150 mm ),流动相为0.2%甲酸水−10 mmol/L醋酸铵溶液(A)-乙腈(B);梯度洗脱:0~0.6 min, 80%~40% A; 0.6~1 min, 40%~30% A; 1~4.3 min, 30%~5% A;流速:0.3 ml/min;柱温:40 ℃;进样量:10 μl,每个样品的分析周期为4.3 min。

    • 采用电喷雾离子源(ESI)和多反应监测模式(MRM)。正负离子同时扫描;氮气作为雾化气和干燥气;高纯氮气为碰撞气,毛细管电压为4 000 V;碰撞气压为40 psi;鞘流气温为350 ℃,干燥气温为325 ℃,干燥气流速为12 L/min;将一定浓度的标准溶液和内标溶液进样,在ESI电离方式下进行产物离子全扫描分析(见图1),定量分析质荷比详见表1

      图  1  寒湿郁肺汤中11个主成分及内标的二级产物离子图

      表 1  寒湿郁肺汤中11个主成分及内标的质谱检测参数

      测定成分母离子
      m/z
      子离子
      m/z
      裂解电压
      (V)
      碰撞能量
      (V)
      ESI
      模式
      香草酸 167.1 152.3 70 10
      厚朴酚 265.1 247 148 29
      和厚朴酚 265.2 223.4 135 29
      汉黄芩素 283.1 268.1 105 13
      刺槐素 284.9 241.9 140 34
      6-姜酚 293.2 293.2 130 0
      桔皮素 373.1 343.2 135 28 +
      羌活醇 377.3 377.3 130 0 +
      川陈皮素 403.3 373.3 130 26 +
      紫花前胡苷 409.2 247.2 95 11 +
      利血平(IS) 609.2 195 240 35
      橙皮苷 609.2 300.9 135 15
    • 分别精密吸取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液各10 μl,按“2.1.2”项下方法制样,再按照“2.2”项下色谱与质谱条件进样测定,记录图谱。结果显示,专属性符合相关要求(图2)。

      图  2  寒湿郁肺汤中11个主成分及内标的MRM色谱图

    • 精密量取对照品溶液适量,浓度稀释为如下的混合对照品溶液:香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、桔皮素、羌活醇、紫花前胡苷的线性浓度为20、50、100、200、500、1 000、1 500、2 000 ng/ml;6-姜酚、川陈皮素、橙皮苷的线性浓度为200、500、1 000、2 000、5 000、10 000、15 000、20 000 ng/ml。采用内标定量法按“2.2”项下色谱与质谱条件进行测定,并记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(Y),对照品质量浓度为横坐标(C),绘制标准曲线,并进行线性回归,结果见表2

      表 2  寒湿郁肺汤中11种成分的线性考察

      测定成分回归方程r线性范围(μg/ml)
      香草酸Y=9.023C-1.3450.990.02~2.00
      厚朴酚Y=0.023C+0.0020.990.02~2.00
      和厚朴酚Y=0.028C-0.0600.980.02~2.00
      汉黄芩素Y=0.701C+1.8020.980.02~2.00
      刺槐素Y=0.488C+0.2050.990.02~2.00
      6-姜酚Y=0.003C+1.5100.990.20~20.00
      桔皮素Y=4.291C+70.5730.990.02~2.00
      羌活醇Y=0.173C+3.8490.980.02~2.00
      川陈皮素Y=0.576C+277.0120.990.20~20.00
      紫花前胡苷Y=0.362C-0.0810.990.02~2.00
      橙皮苷Y=0.011C+0.0610.990.20~20.00
    • 将母液稀释10倍,按“2.2”项下色谱与质谱条件进行测定,连续进样6次,记录峰面积,计算RSD。结果显示,香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷11种成分的峰面积RSD分别为1.83%、5.57%、4.39%、3.14%、4.25%、4.01%、1.26%、1.40%、1.75%、3.29%、2.55%,表明该方法精密度良好。

    • 取同一份寒湿郁肺汤供试品溶液,按“2.1.2”项下方法平行制备6份,按“2.2”项下色谱与质谱条件进行测定,记录峰面积,计算RSD。结果显示,香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷11种化学成分的峰面积RSD分别为4.78%、8.40%、5.55%、3.27%、1.51%、3.30%、1.30%、3.37%、1.21%、1.98%、2.46%,表明该方法重复性良好。

    • 取同一份供试品溶液,按“2.1.2”项下方法制备,室温放置,按“2.2”项下色谱与质谱条件,分别于0、2、4、6、12、16、24 h进样测定,记录峰面积,计算RSD。结果显示,香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷11种化学成分在4 h内的峰面积RSD分别为5.81%、4.68%、3.17%、13.09%、13.20%、8.99%、6.19%、5.19%、4.18%、5.55%、9.47%,表明供试品溶液在室温放置4 h内稳定性良好。

    • 精密称取已知含量的寒湿郁肺汤样品,加入各对照品适量,平行制备6份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.2”项下色谱与质谱条件进样测定,进行UHPLC-MS/MS分析,计算各待测物的平均回收率及其RSD。11种待测物:香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷的平均加样回收率分别为111.73%、102.96%、108.94%、102.90%、99.36%、104.83%、100.55%、100.27%、105.49%、96.92%、93.11%,RSD分别为2.44%、2.37%、4.44%、1.92%、4.60%、2.57%、1.79%、2.36%、4.99%、3.08%、3.59%,表明该方法的准确度良好。

    • 取9批寒湿郁肺汤药材,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.2”项下色谱与质谱条件进行测定,计算寒湿郁肺汤9批样本中11种成分:香草酸、厚朴酚、和厚朴酚、汉黄芩素、刺槐素、6-姜酚、桔皮素、羌活醇、川陈皮素、紫花前胡苷、橙皮苷的含量,测定结果为香草酸0.07~0.09 μg/ml、厚朴酚0.06~0.07 μg/ml、和厚朴酚0.26~0.57 μg/ml、汉黄芩素0.07~0.09 μg/ml、刺槐素0.27~0.29 μg/ml、6-姜酚0.55~0.58 μg/ml、桔皮素0.31~0.33 μg/ml、羌活醇0.54~0.58 μg/ml、川陈皮素3.78~3.81 μg/ml、紫花前胡苷0.31~0.33 μg/ml、橙皮苷1.58~1.61 μg/ml。

    • 在预实验中分别考察了Agilent ZORBAX SB C18(3.5 μm,2.1 mm ×100 mm)、Agilent ZORBAX SB-C18(3.5 μm,2.1 mm×150 mm)、Waters Xbridge®HILIC(3.5 μm,2.1 mm×100 mm)、Waters Atlantis®T3(3 μm,2.1 mm×100 mm)、Agilent Eclipse XDB-C18(3.5 μm,2.1 mm×150 mm)等色谱柱对11个待测成分含量测定的影响,结果显示,当色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(3.5 μm,2.1mm×150 mm)时,11个待测成分及内标的峰形最佳。

    •   实验中分别考察了水-乙腈、0.1%甲酸水-乙腈、0.15%甲酸水-乙腈、0.2%甲酸水-乙腈、5 mmol/L醋酸铵溶液-乙腈、10 mmol/L醋酸铵水-乙腈、0.2%甲酸-10 mmol/L醋酸铵水溶液-甲醇、0.2%甲酸-10 mmol/L醋酸铵水溶液-乙腈等流动相对11个成分含量测定的影响,结果显示,此11个待测成分在0.2%甲酸-10 mmol/L醋酸铵水溶液-乙腈中,采用梯度洗脱,响应与峰形均佳。

    • 在预实验中分别考察了培美曲塞、利血平、卡马西平三个标准品作为内标时的响应和出峰时间,最终选用了出峰时间居中、响应好、稳定性高的利血平作为内标。本实验中所选取的化学成分以药典为基础,结合文献调研,舍弃挥发油类成分及违禁成分,最终选取了11个能代表药材的化学成分进行研究。

    • 本研究基于UHPLC-MS/MS同时测定寒湿郁肺汤中11个成分含量的方法,经色谱柱、流动相的优化和全面的方法学考察,成功应用于样品中寒湿郁肺汤11种成分的测定。该法简便可靠,可为寒湿郁肺汤中的成分检测提供一定的方法参考,也为寒湿郁肺汤的质量控制及质量标准研究奠定了基础。

参考文献 (7)

目录

    /

    返回文章
    返回