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Wentilactone A的遗传毒性评价

侍雯婧 田逸君 黄才国 朱玉平 严朗 郑怡文

侍雯婧, 田逸君, 黄才国, 朱玉平, 严朗, 郑怡文. Wentilactone A的遗传毒性评价[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
引用本文: 侍雯婧, 田逸君, 黄才国, 朱玉平, 严朗, 郑怡文. Wentilactone A的遗传毒性评价[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
SHI Wenjing, TIAN Yijun, HUANG Caiguo, ZHU Yuping, YAN Lang, ZHENG Yiwen. Genotoxicity evaluation of Wentilactone A[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
Citation: SHI Wenjing, TIAN Yijun, HUANG Caiguo, ZHU Yuping, YAN Lang, ZHENG Yiwen. Genotoxicity evaluation of Wentilactone A[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089

Wentilactone A的遗传毒性评价

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
详细信息
    作者简介:

    侍雯婧,本科,助教,研究方向:特殊毒理学、药物安全性评价,Email:swjmmjj@163.com

    通讯作者: 郑怡文,讲师,Email:yiwenzheng@sina.com,Tel:(021)81871027
  • 中图分类号: R734.2

Genotoxicity evaluation of Wentilactone A

  • 摘要:   目的  检测Wentilactone A的遗传毒性。  方法  应用经典遗传毒性检测组合(Ames试验、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验)检测Wentilactone A的遗传毒性。  结果  Ames试验结果提示,Wentilactone A在每皿5 000、500、50、5、0.5 μg 5个剂量下,在加和不加代谢活化系统(S9)时,对鼠伤寒沙门菌均无致突变性。CHO细胞染色体畸变试验结果提示,在终浓度23.74、47.48、94.96 μg/ml 3个剂量组,在加和不加S9中,于作用4 h和24 h的条件下培养的CHO细胞,均未诱发染色体畸变。小鼠骨髓微核试验在100、200、400 mg/kg 3个剂量下作用24 h以及400 mg/kg剂量下作用48 h对骨髓细胞的微核诱发率,与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。  结论  Wentilactone A对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对CHO细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓细胞微核的效应。上述结果提示Wentilactone A不具有遗传毒性和潜在致癌性。
  • 图  1  Wentilactone A的结构式

    表  1  阳性对照品名称及浓度

    组别菌株阳性对照品溶液终浓度(μg/皿)加入量(μl/皿)浓度(μg/ml)
    -S9组TA97敌克松50100500
    TA98敌克松50100500
    TA100甲基磺酸甲酯 1100 10
    TA102甲基磺酸甲酯 1100 10
    TA15354-硝基喹啉-N-氧化物0.5100 5
    +S9组TA972-氨基芴10100100
    TA982-氨基芴10100100
    TA1002-氨基芴10100100
    TA1021,8-二羟基蒽醌50100500
    TA1535环磷酰胺50100500
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    表  2  WA对5支菌株的回变菌落数试验结果(个/皿,${\rm{\bar x}}$±s)(第1次)

    组别(μg/皿)TA97TA98TA100TA102TA1535
    +S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9
    5 00036±540±421±321±2131±2693±17177±21185±2525±314±2
    50036±539±817±420±3114±2290±23195±8207±723±119±1
    5039±1035±521±721±3115±2197±8196±33179±1819±816±4
    541±640±321±522±4114±1587±19195±21193±819±214±1
    0.537±639±320±319±3128±1591±12201±14205±1420±616±4
    空白对照组40±736±517±219±499±1789±9213±30197±3421±719±4
    溶剂对照组40±634±122±526±295±889±9193±8199±2923±314±1
    阳性对照组839±24841±47936±561 077±55968±271 111±661 101±171 024±53342±44345±13
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    表  3  WA对5支菌株的回变菌落数试验结果(个/皿,${\rm{\bar x}}$±s)(第2次)

    组别(μg/皿)TA97TA98TA100TA102TA1535
    +S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9
    5 00038±534±520±521±5128±24105±26179±21189±1920±420±3
    50039±734±321±220±7108±1392±28192±16187±3016±319±4
    5038±930±319±318±1117±14102±5197±5196±2217±318±1
    537±829±418±217±1111±598±33206±24191±2116±120±2
    0.535±633±824±223±3107±797±8203±6193±1015±415±4
    空白对照组38±341±422±323±496±1293±8205±17186±1918±218±4
    溶剂对照组38±337±822±323±498±7100±12202±15197±1018±219±4
    阳性对照组881±18876±35900±111 077±111964±113996±81 024±371 011±8392±8392±22
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    表  4  WA对24 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(+S9)

    组别观察细胞数
    (个)
    各类染色体畸变数畸变细胞数
    (个)
    畸变率
    (%)
    断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
    23.74 μg/ml200 11000001 2 1
    47.48 μg/ml200 22000000 2 1
    94.96 μg/ml200 00000000 1 0.5
    溶剂对照组2002000000033 3 1.5
    阳性对照组100 900133001414
    注:阳性对照组:+S9、环磷酰胺(60 mg/ml);溶剂对照组:DMSO;* P<0.05,与溶剂对照组比较。
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    表  5  WA对24 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(-S9)

    组别观察细胞数
    (个)
    各类染色体畸变数畸变细胞数
    (个)
    畸变率
    (%)
    断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
    23.74 μg/ml20000000000 00
    47.48 μg/ml20010000000 10.5
    94.96 μg/ml20000000000 00
    溶剂对照组20000000000 00
    阳性对照组100440000401212*
    注:阳性对照组:-S9、丝裂霉素C(0.5 mg/ml);溶剂对照组:DMSO;*P<0.05,与溶剂对照组比较。
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    表  6  WA对4 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(-S9/4 h)

    组别观察细胞数
    (个)
    各类染色体畸变数畸变细胞数
    (个)
    畸变率
    (%)
    断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
    23.74 μg/ml2000000000000
    47.48 μg/ml2000000000000
    94.96 μg/ml2000000000000
    溶剂对照组200
    阳性对照组
    * P<0.05,与溶剂对照组比较。
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    表  7  WA对小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核效应试验结果

    组别性别动物数(只)观察PCE数(个)PCE/NCE(${\rm{\bar x}}$±s微核率(${\rm{\bar x}}$±s, ‰)
    100 mg/kg510 0202.40±0.891.60±0.96
    200 mg/kg510 0101.63±0.401.80±1.31
    400 mg/kg (24 h采样)510 0161.95±0.402.10±1.20
    400 mg/kg (48 h采样)510 0091.58±0.442.80±1.81
    溶媒对照组510 0092.37±0.692.10±1.20
    阳性对照组5 9 0952.18±0.3021.36±7.84*
    100 mg/kg510 0161.56±0.301.90±1.28
    200 mg/kg510 0091.52±0.281.60±0.70
    400 mg/kg (24 h采样)510 0061.40±0.732.40±2.01
    400 mg/kg (48 h采样)5 8 8021.43±0.631.29±1.26
    溶媒对照组5 9 0292.13±0.581.90±1.45
    阳性对照组510 0111.62±0.4220.88±4.94*
    *P<0.05,与溶剂对照组比较。
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  • [1] 姜文丽. Wentilactone A对小细胞肺癌增殖抑制和诱导凋亡的分子机制研究[D]. 上海: 第二军医大学, 2016.DOI: CNKI:CDMD:2.1016.327748
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    [4] 田逸君, 郑怡文, 朱玉平, 等. 雷公藤内酯醇的遗传毒性评价[J]. 药学实践杂志, 2016, 34(3):215-218. doi:  10.3969/j.issn.1006-0111.2016.03.006
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-04-16
  • 修回日期:  2020-06-02
  • 网络出版日期:  2020-11-27
  • 刊出日期:  2020-11-25

Wentilactone A的遗传毒性评价

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
    作者简介:

    侍雯婧,本科,助教,研究方向:特殊毒理学、药物安全性评价,Email:swjmmjj@163.com

    通讯作者: 郑怡文,讲师,Email:yiwenzheng@sina.com,Tel:(021)81871027
  • 中图分类号: R734.2

摘要:   目的  检测Wentilactone A的遗传毒性。  方法  应用经典遗传毒性检测组合(Ames试验、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验)检测Wentilactone A的遗传毒性。  结果  Ames试验结果提示,Wentilactone A在每皿5 000、500、50、5、0.5 μg 5个剂量下,在加和不加代谢活化系统(S9)时,对鼠伤寒沙门菌均无致突变性。CHO细胞染色体畸变试验结果提示,在终浓度23.74、47.48、94.96 μg/ml 3个剂量组,在加和不加S9中,于作用4 h和24 h的条件下培养的CHO细胞,均未诱发染色体畸变。小鼠骨髓微核试验在100、200、400 mg/kg 3个剂量下作用24 h以及400 mg/kg剂量下作用48 h对骨髓细胞的微核诱发率,与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。  结论  Wentilactone A对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对CHO细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓细胞微核的效应。上述结果提示Wentilactone A不具有遗传毒性和潜在致癌性。

English Abstract

侍雯婧, 田逸君, 黄才国, 朱玉平, 严朗, 郑怡文. Wentilactone A的遗传毒性评价[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
引用本文: 侍雯婧, 田逸君, 黄才国, 朱玉平, 严朗, 郑怡文. Wentilactone A的遗传毒性评价[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
SHI Wenjing, TIAN Yijun, HUANG Caiguo, ZHU Yuping, YAN Lang, ZHENG Yiwen. Genotoxicity evaluation of Wentilactone A[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
Citation: SHI Wenjing, TIAN Yijun, HUANG Caiguo, ZHU Yuping, YAN Lang, ZHENG Yiwen. Genotoxicity evaluation of Wentilactone A[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(6): 533-538. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202004089
  • Wentilactone A(WA)是从海洋微生物中分离得到的去甲二萜类小分子化合物,对小细胞肺癌细胞系NCI-H460和NCI-H446细胞的增殖具有抑制作用,可诱导小细胞肺癌细胞系NCI-H446和NCT-H1688细胞凋亡[1]。对小细胞肺癌细胞系NCT-H1688细胞的细胞迁移和集落形成具有抑制作用[2]。WA作为一种有效抗肿瘤候选物,已从制备工艺、理化性质、急性毒性、生殖毒性等方面证明其良好的成药性[3]。遗传毒性安全性实验更是对其临床前研究全面性的补充,为提高临床用药的安全性,为了验证其是否具有遗传毒性,本实验应用微生物回复突变试验(Ames试验)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验方法对WA的遗传毒性进行了系统的研究,为WA的临床前毒性评价提供资料[4]

    • Ames试验用WA(含量:99.9%,批号:20121115,黄色粉末)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验用(规格:10 ml,含量:50.8 mg/ml,批号:20130506,黄色澄明溶液)、小鼠骨髓微核试验用WA(规格:10 ml/支:100mg,含量:10.2 mg/ml,批号:20130407,黄色澄明溶液),均由海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室提供。WA的化学结构见图1

      图  1  Wentilactone A的结构式

    • 组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌(S. typhimurium)TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535共5支菌株,复旦大学公共卫生学院环境卫生教研室赠予。实验前对其进行鉴定(R因子和自发回变数鉴定),均符合规定标准。

    • 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞由复旦大学公共卫生学院毒理教研室赠予。

    • ICR小鼠(SPF级)共60只,每组10只,雌雄各半,5~6周龄,购入时体重16.5~20.8 g,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,动物质量合格证号:2008001629237。自购入起3天进行检疫,给药时体重20.3~23.6 g。

    • 按《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》[5-6]的设计要求,分别应用Ames试验[7]、体外培养CHO细胞染色体畸变试验[8]和小鼠骨髓微核试验[9]检测WA的遗传毒性。检测终点覆盖了基因突变、染色体畸变和细胞有丝分裂异常。

    • 根据《药物遗传毒性研究技术指导原则》的要求,应用S. typhimurium TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535共5支菌株,设每皿5 000、500、50、5、0.5 μg 5个剂量组。此外,设空白对照、溶剂对照和阳性对照组(具体剂量见表1)。采用标准平板掺入法,使细菌在加和不加代谢活化系统S9的条件下接触受试物,每皿均加入供试品或溶剂对照DMSO 0.1 ml,每个剂量组及对照组均设3个平行皿。并用最低极限的琼脂培养基培养48 h后,先用显微镜观察平皿上的菌苔生长情况,确定受试物无明显的抑菌或杀菌作用,再人工计数每皿回复突变的菌落数,记录原始数据,并计算每组的均值和标准差,与溶剂对照组进行比较,重复实验一次。

      表 1  阳性对照品名称及浓度

      组别菌株阳性对照品溶液终浓度(μg/皿)加入量(μl/皿)浓度(μg/ml)
      -S9组TA97敌克松50100500
      TA98敌克松50100500
      TA100甲基磺酸甲酯 1100 10
      TA102甲基磺酸甲酯 1100 10
      TA15354-硝基喹啉-N-氧化物0.5100 5
      +S9组TA972-氨基芴10100100
      TA982-氨基芴10100100
      TA1002-氨基芴10100100
      TA1021,8-二羟基蒽醌50100500
      TA1535环磷酰胺50100500
    • 在加和不加代谢活化系统S9的条件下,体外培养的CHO细胞中加入相应浓度的供试品或对照品,反应体系总体积为10 ml。低、中、高剂量组供试品终浓度分别为23.74、47.48和94.96 μg/ml,阳性对照组丝裂霉素C和环磷酰胺的终浓度分别为0.5 μg/ml、60 μg/ml,另设溶剂对照组分别作用于细胞4 h后换液继续培养至24 h,和药物作用细胞24 h后收集细胞。收获细胞前4 h,加入终浓度0.2 μg/ml秋水仙素,培养结束收集细胞,经离心、低渗处理、固定、离心、制片和Giemsa染色,每个剂量组制备2~3张玻片标本。

      镜检时每组观察200个染色体中分散良好、数目完整的中期分裂相细胞(若观察到大量染色体畸变细胞,如阳性对照组,分析细胞数可相应减少为至少100个细胞)。计数染色体或染色单体的断裂、缺失及其他类型结构异常的数目(裂隙和核内复制一般不作为畸变类型),记录原始数据计算畸变率。

    • 检疫期结束后分别按低、中、高组小鼠给药,分别予100、200、400 mg/kg剂量给药,其中高剂量组设两组分别在药物作用24 h和48 h后处死,并设阳性对照组和溶剂对照组。分别在药物作用24 h和48 h后处死小鼠,取股骨骨髓制成骨髓涂片,每只动物制2张涂片,经甲醇固定后用pH6.8的Giemsa染液染色。

      每只动物镜检约2000个骨髓嗜多染红细胞(PCE),计数含微核的PCE数(MNPCE),计算微核发生率,同时记录200个PCE计数过程中观察到的正染红细胞(NCE)的数目,并计算PCE/NCE值。

    • 对于易溶无毒的化合物,细菌实验最高浓度应达到5 mg/皿[10]。Ames试验设每皿5 000、500、50、5、0.5 μg 5个剂量组,每皿均加入相应浓度的供试品溶液0.1 ml,另设空白对照、溶剂对照和阳性对照。在哺乳动物细胞体外遗传实验中,毒性水平应高于50%细胞抑制率或细胞融合率[11]。通过预实验确定供试品的IC50为94.96 μg/ml。染色体畸变试验的低、中、高剂量组为23.74、47.48和94.96 μg/ml,试验时在10 ml的试验体系中分别加入0.1 ml各剂量组的应用液,另设阳性对照组和溶剂对照。ICR小鼠的微核试验采用小鼠经尾静脉注射给药,总剂量分别为100、200、400 mg/kg(单次给药剂量分别为50、100、200 mg/kg,分上、下午两次经尾静脉注射给药),给药容积为20 ml/kg体重;同时设阳性对照组和溶剂对照组。阳性对照组以40 mg/kg体重的剂量腹腔注射环磷酰胺,给药容量为10 ml/kg体重;溶剂对照组给药方式与受试物组相同,以20 ml/kg体重的容积经尾静脉注射生理盐水。

    • Ames试验结果的评价是以溶剂对照组的回复突变菌落数为基础,与受试物各剂量组相比较。若某剂量组回复突变菌落数为溶剂对照组的2倍以上,呈现可重复性,并在一定的剂量范围内存在着剂量-反应关系,则判断为阳性[12]。染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验均采用卡方检验或方差分析方法研究给药组与对照组之间是否具有统计学意义[13]

    • 受试物各剂量组和对照组的平皿均可见背景菌苔生长。5支菌株的自发回复突变菌落数以及阳性对照品诱发的回复突变菌落数均在历史参考范围内,并且各菌株阳性对照组的回复突变菌落与空白对照组相比数目显著增加,提示本试验系统符合要求。在最高剂量已达到5 000 μg/皿的受试条件下,未观察到受试物的抑菌现象。各剂量组受试物在加或不加S9时对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535所诱发的回复突变菌落数均与自发的突变菌落数相近,未观察到明显的剂量-反应关系。结果见表2表3

      表 2  WA对5支菌株的回变菌落数试验结果(个/皿,${\rm{\bar x}}$±s)(第1次)

      组别(μg/皿)TA97TA98TA100TA102TA1535
      +S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9
      5 00036±540±421±321±2131±2693±17177±21185±2525±314±2
      50036±539±817±420±3114±2290±23195±8207±723±119±1
      5039±1035±521±721±3115±2197±8196±33179±1819±816±4
      541±640±321±522±4114±1587±19195±21193±819±214±1
      0.537±639±320±319±3128±1591±12201±14205±1420±616±4
      空白对照组40±736±517±219±499±1789±9213±30197±3421±719±4
      溶剂对照组40±634±122±526±295±889±9193±8199±2923±314±1
      阳性对照组839±24841±47936±561 077±55968±271 111±661 101±171 024±53342±44345±13

      表 3  WA对5支菌株的回变菌落数试验结果(个/皿,${\rm{\bar x}}$±s)(第2次)

      组别(μg/皿)TA97TA98TA100TA102TA1535
      +S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9
      5 00038±534±520±521±5128±24105±26179±21189±1920±420±3
      50039±734±321±220±7108±1392±28192±16187±3016±319±4
      5038±930±319±318±1117±14102±5197±5196±2217±318±1
      537±829±418±217±1111±598±33206±24191±2116±120±2
      0.535±633±824±223±3107±797±8203±6193±1015±415±4
      空白对照组38±341±422±323±496±1293±8205±17186±1918±218±4
      溶剂对照组38±337±822±323±498±7100±12202±15197±1018±219±4
      阳性对照组881±18876±35900±111 077±111964±113996±81 024±371 011±8392±8392±22
    • 染色体分析结果显示,阳性对照组能够诱发受试细胞染色体的畸变率明显增高,24 h在+ S9和-S9的情况下染色体畸变率分别为11%和11%,与溶剂对照组相比,均有统计学差异(P<0.05);23.74、47.48和94.96 μg/ml受试物在24 h、+S9条件下染色体畸变率分别为1%、1%和0.5%,24 h、-S9条件下染色体畸变率分别为0%、0.5%和0%;4 h、-S9条件下染色体畸变率分别为0%、0%和0%。综上,受试物各剂量组细胞染色体畸变率均小于5%,与溶剂对照组结果相比,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结果见表4~6

      表 4  WA对24 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(+S9)

      组别观察细胞数
      (个)
      各类染色体畸变数畸变细胞数
      (个)
      畸变率
      (%)
      断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
      23.74 μg/ml200 11000001 2 1
      47.48 μg/ml200 22000000 2 1
      94.96 μg/ml200 00000000 1 0.5
      溶剂对照组2002000000033 3 1.5
      阳性对照组100 900133001414
      注:阳性对照组:+S9、环磷酰胺(60 mg/ml);溶剂对照组:DMSO;* P<0.05,与溶剂对照组比较。

      表 5  WA对24 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(-S9)

      组别观察细胞数
      (个)
      各类染色体畸变数畸变细胞数
      (个)
      畸变率
      (%)
      断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
      23.74 μg/ml20000000000 00
      47.48 μg/ml20010000000 10.5
      94.96 μg/ml20000000000 00
      溶剂对照组20000000000 00
      阳性对照组100440000401212*
      注:阳性对照组:-S9、丝裂霉素C(0.5 mg/ml);溶剂对照组:DMSO;*P<0.05,与溶剂对照组比较。

      表 6  WA对4 h体外培养CHO细胞的染色体畸变试验结果(-S9/4 h)

      组别观察细胞数
      (个)
      各类染色体畸变数畸变细胞数
      (个)
      畸变率
      (%)
      断裂断片双着丝粒三辐体四辐体碎片或微小体环状多倍体
      23.74 μg/ml2000000000000
      47.48 μg/ml2000000000000
      94.96 μg/ml2000000000000
      溶剂对照组200
      阳性对照组
      * P<0.05,与溶剂对照组比较。
    • 试验结果经统计学分析表明,WA在100、200、400 mg/kg剂量下未观察到对小鼠骨髓的抑制作用,溶媒对照组和阳性对照组雌、雄性小鼠骨髓PCE微核发生率分别为2.10‰和21.36‰、1.90‰和20.88‰,两组相比差异均有统计学意义(P<0.05),验证了本次试验系统的有效性。WA 100和2 000 mg/kg剂量24 h采样组雌、雄小鼠骨髓PCE微核率分别为1.60‰和1.80‰、1.90‰和1.60‰;400 mg/kg剂量24 h和48 h采样组雌、雄小鼠骨髓PCE微核率分别为2.10‰和2.80‰、2.40‰和1.29‰,与溶媒对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结果见表7

      表 7  WA对小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核效应试验结果

      组别性别动物数(只)观察PCE数(个)PCE/NCE(${\rm{\bar x}}$±s微核率(${\rm{\bar x}}$±s, ‰)
      100 mg/kg510 0202.40±0.891.60±0.96
      200 mg/kg510 0101.63±0.401.80±1.31
      400 mg/kg (24 h采样)510 0161.95±0.402.10±1.20
      400 mg/kg (48 h采样)510 0091.58±0.442.80±1.81
      溶媒对照组510 0092.37±0.692.10±1.20
      阳性对照组5 9 0952.18±0.3021.36±7.84*
      100 mg/kg510 0161.56±0.301.90±1.28
      200 mg/kg510 0091.52±0.281.60±0.70
      400 mg/kg (24 h采样)510 0061.40±0.732.40±2.01
      400 mg/kg (48 h采样)5 8 8021.43±0.631.29±1.26
      溶媒对照组5 9 0292.13±0.581.90±1.45
      阳性对照组510 0111.62±0.4220.88±4.94*
      *P<0.05,与溶剂对照组比较。
    • 沙门菌回复突变试验(Ames试验)被研究者广为采用,该法的特点是快速、简便、敏感、经济,是经典的测试化学物质或药物致突变性实验[10]。染色体畸变分析是采用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞体外培养的方法进行的。CHO细胞在加或不加代谢活化系统的条件下,与受试物接触一定时间后再于收集染色体4 h前用秋水仙碱处理,使细胞的有丝分裂停止在中期相。然后收集细胞,经低渗、固定、涂片和染色后,在显微镜下观察染色体数量和结构的改变,检测受试物的诱变性[7]。微核试验是检测化合物对染色体损伤作用的重要方法。凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化合物,微核试验都可检测[8]

      本研究采用遗传毒性研究经典组合的方法,分别从原核系统到真核系统,从体外试验系统到体内试验系统,体外试验中包含了加与不加代谢活化系统,能检测基因突变、染色体畸变等多个遗传学终点,符合国际标准化的要求[5-6]

      本研究结果显示,本试验条件下,采用标准平板掺入法,WA在每皿5 000、500、50、5、0.5 μg的受试剂量下,加或不加S9时对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌均无致突变性;对CHO细胞,在23.74、47.48、94.96 μg/ml 3个剂量组,加或不加S9,于24 h和48 h诱发的细胞染色体畸变率均小于5%,与溶剂对照组结果相比较其差异均无统计学意义(P>0.05),表明WA在受试剂量下无致CHO细胞染色体畸变效应;WA在100、200、400 mg/kg 3个剂量下,对ICR小鼠的微核诱发率与溶剂对照组比较均无显著差异,表明其在受试剂量下对ICR小鼠无致微核效应[14]。上述结果提示WA没有遗传毒性和潜在致癌性。

      此前有文献表明WA对小细胞肺癌的增殖有抑制作用,但对于遗传毒性未见报道。本研究对降低WA在研发过程中用于临床试验和疾病治疗的用药风险发挥重要作用。

参考文献 (14)

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