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人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

刘莹 厉建中 张俊平

刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.
引用本文: 刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.
LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.
Citation: LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

基金项目:  国家自然科学基金(30600766和30871353).

Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a

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出版历程
  • 收稿日期:  2010-06-09
  • 修回日期:  2010-09-12

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

    基金项目:   国家自然科学基金(30600766和30871353).

摘要: 目的 克隆人核糖体蛋白S3a (Ribosomal protein S3a, RPS3a)基因,并表达、纯化其蛋白,分析RPS3a蛋白的细胞定位,为其功能研究奠定基础。 方法 应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,克隆到原核表达载体PET-21a中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,PET21a-RPS3a融合表达载体在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中以可溶性蛋白的形式高效表达RPS3a蛋白,超声破碎细胞,通过Ni2+-NTA亲和层析柱初步纯化,再应用50 kD超滤膜进一步纯化。用Western Blot印迹实验检测纯化后的蛋白。构建绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP )的pEGFP-N1-RPS3a表达载体,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察RPS3a重组荧光蛋白在细胞内的分布。 结果 获得了较高纯度的RPS3a蛋白,亚细胞定位分析表明RPS3a蛋白主要分布于细胞质。 结论 成功克隆了RPS3a基因并表达纯化了其蛋白,确定其亚细胞分布,为进一步研究RPS3a蛋白的性质和功能奠定了基础。

English Abstract

刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.
引用本文: 刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.
LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.
Citation: LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.
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