留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

应中央军委要求,2022年9月起,《药学实践杂志》将更名为《药学实践与服务》,双月刊,正文96页;2023年1月起,拟出版月刊,正文64页,数据库收录情况与原《药学实践杂志》相同。欢迎作者踊跃投稿!

15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定

任丹 齐方圆 黄紫妍 秦路平 朱波

任丹, 齐方圆, 黄紫妍, 秦路平, 朱波. 15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
引用本文: 任丹, 齐方圆, 黄紫妍, 秦路平, 朱波. 15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
REN Dan, QI Fangyuan, HUANG Ziyan, QIN Luping, ZHU Bo. Determination of harpagide and harpagoside contents in Scrophularia ningpoensis from 15 origins[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
Citation: REN Dan, QI Fangyuan, HUANG Ziyan, QIN Luping, ZHU Bo. Determination of harpagide and harpagoside contents in Scrophularia ningpoensis from 15 origins[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102

15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
基金项目: 浙江省重点研发项目(2021C04029)
详细信息
    作者简介:

    任 丹,硕士研究生,Email:rd1849966232@163.com

    通讯作者: 秦路平,教授,研究方向:中药资源评价与质量控制,Email:lpqin@zcmu.edu.cn朱 波,助理研究员,研究方向:中药资源评价,Email:zhubo@zcmu.edu.cn
  • 中图分类号: R284

Determination of harpagide and harpagoside contents in Scrophularia ningpoensis from 15 origins

图(2) / 表(5)
计量
  • 文章访问数:  2164
  • HTML全文浏览量:  979
  • PDF下载量:  30
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2020-08-26
  • 修回日期:  2021-05-16
  • 网络出版日期:  2021-07-21
  • 刊出日期:  2021-07-25

15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
    基金项目:  浙江省重点研发项目(2021C04029)
    作者简介:

    任 丹,硕士研究生,Email:rd1849966232@163.com

    通讯作者: 秦路平,教授,研究方向:中药资源评价与质量控制,Email:lpqin@zcmu.edu.cn朱 波,助理研究员,研究方向:中药资源评价,Email:zhubo@zcmu.edu.cn
  • 中图分类号: R284

摘要:   目的  建立HPLC法同时测定玄参中哈巴苷、哈巴俄苷的含量。  方法  采用HPLC-PDA法测定,固定相采用Eclipse Plus C18色谱柱,以乙腈–0.03%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 ml/min;检测波长210、280 nm。  结果  哈巴苷、哈巴俄苷分别在0.1020~0.5100 mg/ml(r=0.9999)、0.0340~0.1700 mg/ml(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.44%、97.08%,RSD分别为0.93%、1.24%。不同产地之间哈巴苷与哈巴俄苷含量差异大(P<0.01),其中、四川陇东、浙江临安、磐安、河南南丰含量较高。  结论  该方法稳定准确,重复性好,可用于玄参的质量控制。

English Abstract

任丹, 齐方圆, 黄紫妍, 秦路平, 朱波. 15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
引用本文: 任丹, 齐方圆, 黄紫妍, 秦路平, 朱波. 15个产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷含量测定[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
REN Dan, QI Fangyuan, HUANG Ziyan, QIN Luping, ZHU Bo. Determination of harpagide and harpagoside contents in Scrophularia ningpoensis from 15 origins[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
Citation: REN Dan, QI Fangyuan, HUANG Ziyan, QIN Luping, ZHU Bo. Determination of harpagide and harpagoside contents in Scrophularia ningpoensis from 15 origins[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(4): 313-316, 330. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202008102
  • 玄参别名元参、黑参、浙玄参等,为我国传统大宗药材,主产地为浙江、安徽、四川、贵州等地[1-2]。玄参,始载于《神农本草经》,被列为中品,味甘、苦、咸,性微寒[3];归肺、胃、肾经,具有清热凉血,滋阴降火,解毒散结的功效,常用于热病伤阴,舌绛烦渴,津伤便秘、目赤、咽痛等症[4-5]。环烯醚萜苷类是玄参的主要有效成分,包括哈巴苷、哈巴俄苷等,临床上主要用于脑缺血、高血压、糖尿病等疾病,具有抗炎、保护心血管、抗肿瘤、免疫调节等作用[6-9]

    关于不同产地玄参有效成分含量测定的报道较少,仅有的报道也只集中在少数产地[10-11]。玄参药材原植物生长环境差别大,不同的生境因子下药材质量参差不齐,且在栽培过程中,栽培品系繁多混杂,严重阻碍了玄参产业的可持续发展。2020版《中国药典》规定将哈巴苷、哈巴俄苷作为玄参药材的质控成分,现代药理学研究也表明哈巴苷、哈巴俄苷具有保护心血管、保护神经的药理作用[12-13]。因此,课题组以哈巴苷和哈巴俄苷成分为指标性成分,收集全国玄参15个主产区玄参种质资源,建立HPLC法对其进行含量测定,分析不同产地玄参环烯醚萜苷类成分之间的差异性,以期为玄参药材质量控制提供理论依据。

    • 2019年11月至2019年12月,收集浙江磐安、安徽谯城区、贵州阳溪、河南朱庄、四川陇东等15个产地新鲜玄参种质资源,经浙江中医药大学药学教研室秦路平教授鉴定为玄参科植物玄参(Scrophularia ningpoensis Hemsl.)的干燥根,信息见表1

      表 1  不同产地玄参样品信息

      编号产地经度(°)纬度(°)海拔(l/m)降雨量(l/mm)年平均温度(t/℃)
      S1浙江磐安120.4329.05 1020 1440.1 17.4
      S2浙江临安119.7230.2310501463.316.2
      S3杭州植物园120.1330.27251400.316.1
      S4安徽涡阳116.2233.5240809.815.1
      S5安徽谯城区115.7733.8835805.014.5
      S6安徽利辛116.2033.1522823.914.8
      S7河南太丘116.1333.9332740.514.3
      S8河南南丰115.2033.6534738.614.6
      S9河南朱庄114.5133.0133740.514.3
      S10四川陇东102.7130.4814281000.012.6
      S11四川永富102.6530.551456984.613.4
      S12四川五龙102.7730.401410993.412.5
      S13贵州洛龙107.7129.068321170.422.1
      S14贵州阳溪107.5729.0713001100.316.3
      S15贵州玉溪107.3629.0513241070.315.6
    • Waters Alliance e2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司);ZORBAX Eclipse C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);XS105型电子分析天平(梅特勒-多利多公司);超纯水仪(美国Millipore公司);DXF–60D型中药打粉机(广州市大祥电子机械设备有限公司);KQ–300DV型超声波(广州颖汉科技有限公司);DHG–9031A型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信试验仪器有限公司)。哈巴苷(B20481)、哈巴俄苷(B20480)对照品均购于上海源叶生物科技有限公司。乙腈(色谱级,美国天地公司),磷酸(色谱级,上海阿拉丁公司),其余试剂均为分析纯。

    • ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)–0.03%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(1~10 min,3%~10% A;10~20 min,10%~33% A;20~25 min,33%~50% A;25~30 min,50%~80% A;30~35 min,80% A;35~37 min,80%~3% A;37~42 min,3% A);体积流量1.0 ml/min,柱温30 ℃,进样量为10 μl;检测波长为210、280 nm。色谱图见图1

      图  1  玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的色谱图

    • 精密称取哈巴苷、哈巴俄苷对照品适量,用30%甲醇溶液制备成终质量浓度为每1 ml含哈巴苷0.6 mg、哈巴俄苷0.2 mg的混合对照品溶液,于4 ℃冰箱中保存备用。分别精密吸取哈巴苷、哈巴俄苷混合对照品溶液0.34、0.67、1.00、1.40、1.70 ml置于2 ml容量瓶中,30%甲醇溶液定容至2 ml,吸取上述溶液适量,0.45 μm微孔滤膜过滤,按“1.3.1”项下色谱条件依次进样。哈巴苷的检测波长为210 nm,哈巴俄苷的检测波长为280 nm。以对照品溶液质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行回归,结果见表2,可知哈巴苷与哈巴俄苷在各自范围内线性关系良好。

      表 2  线性关系考察

      成分回归方程线性范围r
      哈巴苷Y=2964.3X+5156.40.1020~0.5100 mg/ml0.9999
      哈巴俄苷Y=13919X+366.10.0340~0.1700 mg/ml0.9999
    • 将洗净后的玄参根切片,置于60 ℃烘箱中烘至恒定质量,粉碎后过3号筛。精密称取玄参根样品粉末0.25 g,置于25 ml具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇溶液25 ml,密塞,称定重量,浸泡1 h,超声处理45 min(300 W, 40 kHz),放冷,再称定重量,用50%甲醇溶液补足损失的重量,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。按“1.3.1”项下色谱条件平行测定3次。

    • 精密吸取哈巴苷、哈巴俄苷对照品溶液适量,按“1.3.1”项下色谱条件依次进样6次,测得哈巴苷、哈巴俄苷峰面积RSD分别为0.11%、0.09%,表明仪器精密度良好。

    • 取浙江磐安样品,按“1.3.3”项下方法制备供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、18、24 h,按“1.3.1”项下色谱条件进样,测得哈巴苷、哈巴俄苷峰面积RSD分别为0.24%、0.17%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

    • 取浙江磐安样品6份,按“1.3.3”项下方法制备供试品溶液,按“1.3.1”项下色谱条件进样,测得哈巴苷、哈巴俄苷含量的RSD分别为0.59%、0.50%,表明该方法重复性良好。

    • 取含量已知的浙江磐安样品,精密称定0.125 g, 加入哈巴苷、哈巴俄苷对照品适量,按“1.3.3”项下方法制备成供试品溶液,按“1.3.1”项下色谱条件进样,计算回收率,结果见表3

      表 3  加样回收率试验结果(n=6)

      成分称样量(m/g)原有量(m /mg)加入量(m /mg)测得量(m /mg)回收率(%)平均回收率(RSD)(%)
      哈巴苷0.12510.07480.07480.14780.975997.44(0.93)
      0.12500.07480.07480.14760.9733
      0.12510.07480.07480.14860.9866
      0.12540.07500.07500.14820.9760
      0.12530.07490.07490.14800.9760
      0.12510.07480.07480.14650.9586
      哈巴俄苷0.12500.10650.10650.20930.965397.08(1.24)
      0.12540.10680.10680.21260.9906
      0.12520.10670.10680.20890.9569
      0.12510.10660.10680.21090.9766
      0.12530.10680.10680.20960.9625
      0.12510.10660.10680.21050.9728
    • 应用SPSS 19.0软件处理数据。方差分析采用单因素ANOVA分析,聚类分析采用组间连接法[14]

    • 15个产地间玄参根中哈巴苷、哈巴俄苷的含量存在统计学差异(P<0.01),结果见表4。哈巴苷、哈巴俄苷含量以及两者总量分别为0.791、0.228、1.265 mg/g。四川陇东产哈巴苷含量最高、安徽谯城区含量最低;浙江磐安产哈巴俄苷含量最高,四川永富含量最低;四川陇东产哈巴苷与哈巴俄苷总量最高,杭州植物园最低,含量范围在0.752~1.529 mg/g之间,均符合《中国药典》2020版质量标准。

      表 4  不同产地间玄参样品中各成分含量测定结果($\bar x \pm s$n=3,mg/g)

      样品哈巴苷含量哈巴俄苷含量哈巴苷与哈巴俄苷总量
      S10.598±0.0030.852±0.0031.450±0.006
      S20.979±0.0020.520±0.0041.499±0.006
      S30.600±0.0070.152±0.0090.752±0.013
      S40.625±0.0030.542±0.0031.167±0.004
      S50.489±0.0020.831±0.0081.320±0.009
      S60.558±0.0030.615±0.0061.173±0.009
      S70.730±0.0210.626±0.0171.355±0.038
      S80.921±0.0070.563±0.0061.484±0.002
      S90.642±0.0040.655±0.0041.297±0.008
      S101.147±0.0060.382±0.0021.529±0.008
      S110.992±0.0160.036±0.0021.029±0.017
      S120.560±0.0020.422±0.0010.983±0.002
      S130.759±0.0060.385±0.0051.144±0.009
      S141.120±0.0090.234±0.0151.355±0.024
      S151.140±0.0070.297±0.2941.434±0.010
      均值0.791**0.228**1.265**
      **P<0.01,表示不同产地的哈巴苷或哈巴俄苷含量存在极显著差异。
    • 对不同产地之间中的有效成分与生境因子进行相关性分析,结果如表5所示,哈巴苷与海拔、降雨量、年平均温度呈正相关关系,与海拔正相关系数最高为(0.440);与经度、纬度之间呈负相关关系,与经度负相关系数最高为(–0.419)。哈巴俄苷与经度、纬度呈正相关,与海拔、降雨量、年平均温度呈负相关,与海拔负相关系数最高为(–0.360)。

      表 5  玄参中哈巴苷、哈巴俄苷含有量与生境因子相关性分析

      项目哈巴苷哈巴
      俄苷
      经度纬度海拔年降
      雨量
      年平均
      温度
      哈巴苷1.000
      哈巴俄苷−0.5531.000
      经度−0.4190.5721.000
      纬度−0.3410.5060.3701.000
      海拔0.440−0.360−0.620*−0.768**1.000
      年降雨量0.098−0.2430.184−0.795**0.5081.000
      年平均温度0.079−0.237−0.005−0.5070.0090.3631.000
      *P<0.05,表示显著相关;**P<0.01,表示极显著相关。
    • 以哈巴苷、哈巴俄苷含量以及两者总量为参考指标,对15个产地玄参进行聚类分析,根据欧式距离D2=19.98将不同产地划分为3个类群,如图2所示。类群I共5个产地,分别为浙江临安,河南南丰,贵州阳溪、玉溪,四川陇东,该类玄参中哈巴苷含量、哈巴苷和哈巴俄苷总量最高;类群II有8个产地、分别为贵州洛龙,四川五龙,安徽利辛、谯城区、涡阳,浙江磐安,河南太丘、朱庄,这些产地哈巴俄苷含量次之;类群III共有2个产地,分别是四川永富和杭州植物园,这两个产地的哈巴俄苷含量、哈巴苷和哈巴俄苷总量最低。

      图  2  15批玄参样品聚类树状图

    • 本试验采用高效液相法测定玄参哈巴苷与哈巴俄苷含量,经PDA检测器对哈巴苷和哈巴俄苷标准品溶液进行波长扫描,结果显示,哈巴苷的最大检测波长是210 nm,与溶剂甲醇的吸收波长一致,此处会有溶剂峰的出现,而哈巴俄苷的最大检测波长是280 nm,此时基线平稳,未与溶剂峰相重叠,因此,确定检测波长为210 nm和280 nm;采用2020版《中国药典》中哈巴苷与哈巴俄苷的含量测定的提取方法及流动相,结果显示,提取、分离效果良好,哈巴苷与哈巴俄苷在甲醇中超声处理45 min即可提取完全,各峰之间的分离度>1.5,理论塔板数>5000,哈巴苷与哈巴俄苷的保留时间分别是10.107、24.116 min。

      药用植物的生长环境对次生代谢产物的积累起着非常关键的作用,包括经纬度、海拔、降雨量等[14]。本实验结果显示,15个产地玄参根中哈巴苷、哈巴俄苷的含量存在统计学差异(P<0.01),其中四川陇东、河南南丰、浙江临安、磐安含量最高;海拔、降雨量、年平均温度与哈巴苷之间呈正相关,与哈巴俄苷呈负相关。课题组发现,浙江临安、磐安的海拔分别是1050 m、1020 m,远高于杭州植物园的25 m,因此,临安、磐安哈巴苷的含量要高于植物园,这与实验结果一致;经纬度与哈巴俄苷呈正相关,且相关系数较大,经纬度越高,哈巴俄苷的含量就越大,四川陇东、永富、五龙的经纬度低于安徽利辛、涡阳、谯城区,因此,前者的哈巴俄苷的含量低于后者。结果显示,经纬度越高越有利于哈巴俄苷的积累,降雨量越大,海拔越高,越有利于哈巴苷的积累,故可优先在拥有上述环境条件的种质中选择。本实验只对玄参中哈巴苷、哈巴俄苷的含量进行测定,下一步将继续增加其他活性成分的含量测定,为玄参的质量控制提供参考依据。

参考文献 (14)

目录

    /

    返回文章
    返回