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核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达

吴红媛 厉建中 张俊平

吴红媛, 厉建中, 张俊平. 核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达[J]. 药学实践与服务, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
引用本文: 吴红媛, 厉建中, 张俊平. 核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达[J]. 药学实践与服务, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
WU Hong-yuan, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Construction and expression of adenovirus expressing ribosomal protein RPS3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
Citation: WU Hong-yuan, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Construction and expression of adenovirus expressing ribosomal protein RPS3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007

核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达

doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
基金项目: 国家自然科学基金(91013014).

Construction and expression of adenovirus expressing ribosomal protein RPS3a

  • 摘要: 目的 构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达。 方法 应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行Pme I酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组。鉴定后,经Pac I线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。病毒感染NIH3T3细胞,Western blot 分析RPS3a蛋白的表达。 结果 证实pAdTrack-CMV-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高。 结论 成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
  • [1] Lindstrom MS. Emerging functions of ribosomal proteins in gene-specific transcription andtranslation[J].Biochem Biophys Res Commun,2009,379(2):167.
    [2] Lecomte F, Szpirer J, Szpirer C. The S3a ribosomal protein gene is identical to the Fte-1 (v-fos transformation effector) gene and the TNF-α-induced TU-11 gene, and its transcript level is altered in transformed and tumor cells[J].Gene,1997,186(2):271.
    [3] Naora H, Nishida T, Shindo Y, et al. Antisense sequences of the nbl gene induce apoptosis in the human promyelocytic leukemia cell line HL-60[J].Leukemia,1998,12(4):532.
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  • [1] 王雪莲, 郑斯莉, 李志勇, 罗亨宇, 缪朝玉.  全身过表达人METRNL基因小鼠模型的构建与验证 . 药学实践与服务, 2024, 42(5): 198-202, 222. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311014
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出版历程
  • 收稿日期:  2012-12-31
  • 修回日期:  2013-05-20

核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达

doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
    基金项目:  国家自然科学基金(91013014).

摘要: 目的 构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达。 方法 应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行Pme I酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组。鉴定后,经Pac I线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。病毒感染NIH3T3细胞,Western blot 分析RPS3a蛋白的表达。 结果 证实pAdTrack-CMV-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高。 结论 成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础。

English Abstract

吴红媛, 厉建中, 张俊平. 核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达[J]. 药学实践与服务, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
引用本文: 吴红媛, 厉建中, 张俊平. 核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达[J]. 药学实践与服务, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
WU Hong-yuan, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Construction and expression of adenovirus expressing ribosomal protein RPS3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
Citation: WU Hong-yuan, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Construction and expression of adenovirus expressing ribosomal protein RPS3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2013, 31(5): 347-350. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2013.05.007
参考文献 (11)

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