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用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量

严佳 宋洪涛 周欣

严佳, 宋洪涛, 周欣. 用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
引用本文: 严佳, 宋洪涛, 周欣. 用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
YAN Jia, SONG Hongtao, ZHOU Xin. Simultaneous determination of three components in pharmacy compounded terbinafine ointment by HPLC method[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
Citation: YAN Jia, SONG Hongtao, ZHOU Xin. Simultaneous determination of three components in pharmacy compounded terbinafine ointment by HPLC method[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109

用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
基金项目: 中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院临床应用研究专项院内课题(2019L17)
详细信息
    作者简介:

    严 佳,硕士,主管药师,研究方向:药物新剂型与制剂新技术,Tel:(0591)22859963,Email:25831145@qq.com

    通讯作者: 宋洪涛,博士,主任药师,博士生导师,研究方向:药物新剂型与制剂新技术,Email:sohoto@vip.163.com周 欣,硕士,副主任药师,研究方向:药物分析与药物临床试验,Tel:(0591)22859459,Email:fzzyjg@163.com
  • 中图分类号: R284.1

Simultaneous determination of three components in pharmacy compounded terbinafine ointment by HPLC method

图(1) / 表(1)
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-07-28
  • 修回日期:  2020-11-04
  • 网络出版日期:  2021-05-25
  • 刊出日期:  2021-05-25

用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
    基金项目:  中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院临床应用研究专项院内课题(2019L17)
    作者简介:

    严 佳,硕士,主管药师,研究方向:药物新剂型与制剂新技术,Tel:(0591)22859963,Email:25831145@qq.com

    通讯作者: 宋洪涛,博士,主任药师,博士生导师,研究方向:药物新剂型与制剂新技术,Email:sohoto@vip.163.com周 欣,硕士,副主任药师,研究方向:药物分析与药物临床试验,Tel:(0591)22859459,Email:fzzyjg@163.com
  • 中图分类号: R284.1

摘要:   目的  建立同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分含量的HPLC法。  方法  色谱柱为ZORBAX SB-C8柱(4.6 mm×250 mm,5 µm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30),柱温:30 ℃,流速:1.0 ml/min,检测波长:248 nm,进样量:10 µl。  结果  盐酸特比萘芬在20.4~204.0 µg/ml(r =0.999 7),莫匹罗星在40.4~404.0 µg/ml(r=0.9998),糠酸莫米松在2.02~20.20 µg/ml(r=0.999 7)的浓度范围呈良好的线性关系,加样回收率分别为99.39%、99.21%、99.97%,RSD分别为0.82%、0.59%、0.81%(n=9)。  结论  该方法的专属性、重复性良好,可用于自制复方特比萘酚软膏中的特比萘酚、莫匹罗星、糠酸莫米松的含量测定。

English Abstract

严佳, 宋洪涛, 周欣. 用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
引用本文: 严佳, 宋洪涛, 周欣. 用HPLC法同时测定自制复方特比萘酚软膏中3个主药成分的含量[J]. 药学实践与服务, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
YAN Jia, SONG Hongtao, ZHOU Xin. Simultaneous determination of three components in pharmacy compounded terbinafine ointment by HPLC method[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
Citation: YAN Jia, SONG Hongtao, ZHOU Xin. Simultaneous determination of three components in pharmacy compounded terbinafine ointment by HPLC method[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2021, 39(3): 267-269, 279. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202007109
  • 浅部真菌病是由致病真菌(皮肤癣菌、念珠菌、马拉色菌等)所致的浅表真菌感染,为皮肤科高发的感染性疾病,以足癣发病率最高,而趾间糜烂型和水疱型为最主要的发病类型。部队官兵作训任务重、居住环境艰苦,且常年穿着透气性较差的胶鞋、作战靴,战士间易交叉感染,是此类型疾病的高发人群。目前,足癣治疗方案为外用抗真菌药物,但临床上使用的多为单方制剂,对治疗合并有细菌感染伴有瘙痒症状的浅部真菌病效果较差,患者有时需使用两种或两种以上的药物,因携带不便,导致依从性较低。因此,本实验在前期研制复方酮康唑软膏的基础上[1],拟选用盐酸特比萘芬作为外用抗真菌药替代酮康唑,制备一种外用复方制剂——复方特比萘芬软膏,用于治疗浅部真菌皮肤病并发细菌感染,以解决酮康唑化学性质不稳定、易变色的问题,也方便部队官兵携带使用。同时,建立HPLC法同时测定该复方制剂的3个主要成分:特比萘酚、糠酸莫米松、莫匹罗星的含量。

    • 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司,DAD检测器);DV215CD型电子天平[奥豪斯仪器(上海)有限公司]。

    • 盐酸特比萘芬对照品(批号:100563-201402,含量99.8%)、莫匹罗星对照品(批号:130568-200501,含量94.2%)、糠酸莫米松对照品(批号:100930-201201,含量99.9%)均购自中国食品药品检定研究院。盐酸特比萘芬原料药(批号:20150405)、莫匹罗星原料药(批号:20150301)购自武汉鑫佳灵生物科技有限公司;糠酸莫米松原料药(批号:20150228,浙江仙琚制药股份有限公司)。聚乙二醇400、聚乙二醇3350(中国医药对外贸易公司),甲醇为色谱纯,水为超纯水;其余试剂均为分析纯。

    • 精密称定盐酸特比萘芬对照品10.2 mg,置10 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至每1 ml含盐酸特比萘芬1020 μg的对照品储备液。精密移取盐酸特比萘芬对照品储备液1 ml置10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含量为102 μg/ml的盐酸特比萘芬对照品溶液。

    • 精密称定莫匹罗星20.2 mg,置10 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至每1 ml含莫匹罗星2020 μg的对照品储备液。再精密移取莫匹罗星的对照品储备液1 ml置10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含量为202 μg/ml的莫匹罗星对照品溶液。

    • 精密称定糠酸莫米松10.1 mg,置100 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至每1 ml含糠酸莫米松101 μg的对照品储备液。再精密移取糠酸莫米松的对照品储备液1 ml置10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含量为10.1 μg/ml的糠酸莫米松对照品溶液。

    • 分别取盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松对照品储备液各1 ml,置10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

    • 精密称取原料药盐酸特比萘芬1 g、莫匹罗星2 g、糠酸莫米松0.1 g,置100 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品,同法制备3份。精密吸取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。

    • 按“2.1.5”项下,分别配制缺盐酸特比萘芬、缺莫匹罗星、缺糠酸莫米松成分的溶液,即得阴性对照溶液。

    • 色谱柱为ZORBAX SB-C8柱(250 mm×4.6 mm,5 µm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30),检测波长248 nm,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃,进样量10 µl。

    • 分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液适量,滤过,取续滤液10 μl注入HPLC仪,分别记录色谱图。实验结果表明,该方法专属性良好,阴性对照无干扰。结果见图1

      图  1  复方特比萘芬的HPLC图

    • 分别精密吸取盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松对照品储备液各0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2 ml置10 ml量瓶中,用70%甲醇稀释配制成含盐酸特比萘芬浓度为20.4、40.8、81.6、102.0、122.4、142.8、163.2、204.0 µg/ml,含莫匹罗星浓度为40.4、80.8、161.6、202.0、242.4、282.8、323.2、404.0 µg/ml,含糠酸莫米松浓度为2.02、4.04、8.08、10.10、12.12、14.14、16.16、20.20 µg/ml的混合对照品溶液,滤过,取续滤液10 μl,按“2.2”项下色谱条件分析,记录色谱图,计算峰面积。以峰面积A对对照品浓度C(µg/ml)线性回归。实验结果表明,盐酸特比萘芬在20.4~204.0 µg/ml浓度范围内线性关系良好,回归方程为A=1.905×10C+25.90,r=0.999 7;莫匹罗星在40.4~404.0 µg/ml浓度范围内线性关系良好,回归方程为A=2.440C+1.446,r=0.999 8;糠酸莫米松在2.02~20.20 µg/ml浓度范围内线性关系良好,回归方程为A=2.838×10C+15.12,r=0.999 7。

    • 精密吸取同一份混合对照品溶液6次,每次10 μl,分别注入HPLC仪,记录峰面积,计算RSD值。盐酸特比萘酚、莫匹罗星、糠酸莫米松RSD(n=6)分别为0.05%、0.12%、0.25%,实验结果表明仪器精密度良好。

    • 精密称取同一批供试品6份,按“2.1.5”项下方法制备供试品溶液,滤过,取续滤液按“2.2”项下色谱条件分析,分别记录色谱图,测定峰面积,计算含量。盐酸特比萘酚、莫匹罗星、糠酸莫米松RSD(n=6)分别为0.19%、0.08%、0.44%,实验结果表明,RSD均小于1%,方法重复性良好。

    • 取供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、12、24 h取样10 μl注入HPLC仪,测定并计算不同时间点莫匹罗星、糠酸莫米松和盐酸特比萘芬的含量。盐酸特比萘酚、莫匹罗星、糠酸莫米松RSD(n=6)分别为0.66%、0.77%、0.57%。结果表明,供试品溶液在24 h内稳定。

    • 分别精密量取“2.1.1”、“2.1.2”、“2.1.3”项下盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松的对照品储备液各0.8、1、1.2 ml,分别置于3个10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,得低、中、高3种浓度的混合对照品溶液,每个浓度平行配制3份。滤过,弃去初滤液,取续滤液10 μl注入HPLC仪,测定并计算。实验结果表明,盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松平均回收率分别为(99.39±0.82)%、(99.21±0.59)%、(99.97±0.81)%,说明此方法回收率符合要求。

    • 按“2.1.5”项下配制供试品3批,每批3份,精密称取供试品1 ml,置于100 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液9份,测定,外标法计算药物含量。结果见表1

      表 1  样品含量测定结果(n=3,${{\bar {{x}} \pm {{s}} }}$,%)

      供试品莫匹罗星糠酸莫米松特比萘芬
      199.32±0.26100.8±0.37100.2±0.38
      299.95±0.26101.2±0.52101.8±0.56
      3100.3±0.87101.4±0.72100.5±1.04
    • 紫外光谱扫描结果显示,盐酸特比萘芬在282 nm具有最大吸收峰,莫匹罗星在220 nm处具有最大吸收峰,糠酸莫米松在248 nm处具有最大吸收峰。由于3个组分中糠酸莫米松含量较低,仅占处方量的0.1%,而盐酸特比萘芬占1%,莫匹罗星占2%。故为了让这3种药物能同时测定并保证糠酸莫米松的响应值,确定盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松的检测波长为248 nm,在此波长下3种主药均有较好的响应值,建立的HPLC法回收率试验结果符合要求。

    •   笔者曾首先尝试以甲醇-pH5.5磷酸盐缓冲液(65∶35)作为流动相,色谱柱选用C18[2],结果显示该色谱条件下,盐酸特比萘芬出峰时间太长,而莫匹罗星及糠酸莫米松的出峰时间偏早,且杂峰较多;还曾尝试以甲醇-水、甲醇-醋酸铵、甲醇-乙腈-水、乙腈-水等、甲醇-0.1%磷酸溶液、四氢呋喃-乙腈-四甲基氢氧化铵缓冲液[3-10]作为流动相,试验结果表明,甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30)作为流动相,C8色谱柱的条件下,盐酸特比萘芬出峰时间明显提前,三大主药出峰时间都在20 min以内,基线平稳,各峰分离度良好;但该条件下盐酸特比萘芬的峰型对称性不佳,有拖尾现象。故在此基础上,考虑莫匹罗星(弱酸性)[11-12],实验又尝试通过调节流动相pH改善峰型,发现在pH7.5时,盐酸特比萘芬具有良好的对称性,但莫匹罗星与糠酸莫米松拖尾严重。为保证大部分主药的峰型良好,本课题最终选用色谱条件为C8色谱柱,甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30)作为流动相。实验采用HPLC法,建立同时测定盐酸特比萘芬、莫匹罗星和糠酸莫米松的含量测定方法,所建立的分析方法简便、准确、灵敏度高,阴性对照无干扰。

参考文献 (12)

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