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应中央军委要求,2022年9月起,《药学实践杂志》将更名为《药学实践与服务》,双月刊,正文96页;2023年1月起,拟出版月刊,正文64页,数据库收录情况与原《药学实践杂志》相同。欢迎作者踊跃投稿!

肝苏颗粒质量标准提升研究

陶朝阳 史鹏杰 周鑫 孙连娜

陶朝阳, 史鹏杰, 周鑫, 孙连娜. 肝苏颗粒质量标准提升研究[J]. 药学实践与服务, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
引用本文: 陶朝阳, 史鹏杰, 周鑫, 孙连娜. 肝苏颗粒质量标准提升研究[J]. 药学实践与服务, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
TAO Chaoyang, SHI Pengjie, ZHOU Xin, SUN Lianna. Study on quality standard improvement for Gansu granules[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
Citation: TAO Chaoyang, SHI Pengjie, ZHOU Xin, SUN Lianna. Study on quality standard improvement for Gansu granules[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061

肝苏颗粒质量标准提升研究

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
基金项目: 国家重点研发计划资助(2019YFC1711000)
详细信息
    作者简介:

    陶朝阳,博士,研究方向:中药质量标准研究,Tel: 0891-6858350,Email: taozhaoyang73@163.com

    通讯作者: 孙连娜,博士,副教授,研究方向:中药品质评价,Tel: 021-51322211, Email: sssnmr@163.com
  • 中图分类号: R917

Study on quality standard improvement for Gansu granules

  • 摘要:   目的  建立肝苏颗粒质量标准,有效控制药品质量。  方法  以乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为指标性成分,改进肝苏颗粒的薄层鉴别方法;采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱,以乙腈-0.5%甲酸水溶液为流动相,以280nm检测波长,建立乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC含量测定方法。  结果  采用所建立的TLC方法鉴别肝苏颗粒时,特征斑点分离度良好、清晰;定量分析结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度在2.4~240 µg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系(r= 0.9999),平均加样回收率为100.76%,RSD为0.66%,准确度良好。  结论  本实验所建立的TLC鉴别方法和 HPLC含量测定方法专属性强、重现性好,可以作为肝苏颗粒质量控制的提高标准。
  • 图  1  肝苏颗粒TLC色谱图

    1. 乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷; GSKL-1~GSKL-15. 15个批次肝苏颗粒供试品

    图  2  肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的 HPLC 色图谱

    A.乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品; B.肝苏颗粒样品; C.80%甲醇溶剂

    表  1  乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率试验结果(n=6)

    样品
    编号
    样品中含量
    (mg)
    加入量
    (mg)
    测得总量
    (mg)
    回收率
    (%)
    平均回收率
    (%)
    RSD
    (%)
    GSKL-100.960.951.9306102.17100.760.66
    0.951.9102100.02
    0.951.9146100.48
    0.951.9162100.65
    0.951.9162100.65
    0.951.9156100.59
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    表  2  15批肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定结果($ \overline x $±SD)

    样品编号含量(mg/袋)
    GSKL-117.87±0.13
    GSKL-219.02±0.07
    GSKL-319.19±0.40
    GSKL-418.67±0.14
    GSKL-518.37±0.07
    GSKL-618.84±0.08
    GSKL-718.00±0.01
    GSKL-815.99±0.02
    GSKL-917.17±0.01
    GSKL-1017.31±0.03
    GSKL-1117.50±0.02
    GSKL-1220.93±0.16
    GSKL-1320.12±0.16
    GSKL-1415.30±0.06
    GSKL-1517.46±0.08
    下载: 导出CSV
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图(2) / 表(2)
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-07-18
  • 修回日期:  2022-09-06
  • 网络出版日期:  2022-11-28
  • 刊出日期:  2022-11-25

肝苏颗粒质量标准提升研究

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
    基金项目:  国家重点研发计划资助(2019YFC1711000)
    作者简介:

    陶朝阳,博士,研究方向:中药质量标准研究,Tel: 0891-6858350,Email: taozhaoyang73@163.com

    通讯作者: 孙连娜,博士,副教授,研究方向:中药品质评价,Tel: 021-51322211, Email: sssnmr@163.com
  • 中图分类号: R917

摘要:   目的  建立肝苏颗粒质量标准,有效控制药品质量。  方法  以乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为指标性成分,改进肝苏颗粒的薄层鉴别方法;采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱,以乙腈-0.5%甲酸水溶液为流动相,以280nm检测波长,建立乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC含量测定方法。  结果  采用所建立的TLC方法鉴别肝苏颗粒时,特征斑点分离度良好、清晰;定量分析结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度在2.4~240 µg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系(r= 0.9999),平均加样回收率为100.76%,RSD为0.66%,准确度良好。  结论  本实验所建立的TLC鉴别方法和 HPLC含量测定方法专属性强、重现性好,可以作为肝苏颗粒质量控制的提高标准。

English Abstract

陶朝阳, 史鹏杰, 周鑫, 孙连娜. 肝苏颗粒质量标准提升研究[J]. 药学实践与服务, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
引用本文: 陶朝阳, 史鹏杰, 周鑫, 孙连娜. 肝苏颗粒质量标准提升研究[J]. 药学实践与服务, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
TAO Chaoyang, SHI Pengjie, ZHOU Xin, SUN Lianna. Study on quality standard improvement for Gansu granules[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
Citation: TAO Chaoyang, SHI Pengjie, ZHOU Xin, SUN Lianna. Study on quality standard improvement for Gansu granules[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
  • 肝苏颗粒是由苗药赶黄草(Penthorum chinense Pursh)加工制成的单方制剂,1998年被列为基本药物,在临床上主要用于治疗酒精性肝损伤、慢性乙型肝炎等疾病[1],目前收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十三册》(下称《部颁标准》)[2]。近年来对肝苏颗粒的研究主要集中于药理与临床研究,药理研究表明肝苏颗粒对CCl4致化学性、胆管阻塞性和免疫性大鼠肝纤维化模型均有治疗作用,可明显抑制肝脏脂质过氧化损伤,改善肝功能和减轻肝脏纤维化[2-4];临床上,明确了采用肝苏颗粒联合西药共同作用,在治疗慢性乙型肝炎、保肝降酶、退黄上均具有高于单用西药的治疗效果[5-8],但对其制剂质量控制的研究较少,鉴于《部颁标准》发布时间久远,随着研究进展及分析技术与设备的进步,应制定更为科学、完善的标准,以保证制剂稳定、临床用药安全。

    • Agilent 1260高效液相色谱仪、DAD紫外检测器、Chemstation色谱工作站(美国Agilent 公司);XS105DU 电子天平、XS104电子天平(梅特勒公司);HSW-24 四孔水浴锅、SY-360H超声仪(上海诚献仪器设备有限公司);DHG-9053A鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);DL-I-15台式封闭电炉(天津恒瑞科教仪器有限公司);ATS 4全自动点样仪(瑞士CAMAG公司)。

    • 乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为本课题组分离纯化而得,采用高效液相色谱法以峰面积归一化法测定其纯度均大于98%;15批含糖型肝苏颗粒均由四川古蔺肝苏药业有限公司提供,(批号:190401、190402、190403、190404、190405、190406、190407、190408、190409、190410、190411、190412、190111、190119、190123,分别编号为GSKL1~GSKL15,规格:9g/袋);乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯,水为杭州娃哈哈纯净水,其余试剂均为分析纯。

    • 取肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取1.0 g,精密称定,精密加入10 ml 80%甲醇,称定重量,超声提取15 min(功率350 W,频率53 kHz),取出放至室温,用80%甲醇补足失重,摇匀,过0.45 µm微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷标准品适量,精密称定,置于容量瓶,加入80%甲醇定容至刻度线,制成每1 ml含乔松苷1 mg的标准品溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液5 µl、对照品溶液2 µl,分别点于同一高效硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以5%三氯化铝乙醇溶液,晾干,热风吹至斑点显色清晰,置紫外光(365 nm)下检视。根据图1显示,供试品色谱与对照品色谱中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在相同位置显示相同颜色斑点。

      图  1  肝苏颗粒TLC色谱图

    • 色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B);梯度洗脱:0~10 min,28%→30% A;10~17.5 min,30%→ 34.5% A;17.5~20 min,34.5%→90% A;检测波长:280 nm(紫外检测时间20 min);柱温:30 ℃;流速:1.0ml/min;进样量:10 μl。

    • 取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,精密称定,加80%甲醇制成质量浓度分别为0.24 mg/ml的对照品储备液。

    • 取肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取粉末1.0 g,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入25 ml 80%甲醇溶液,称定重量,超声处理15 min,取出放至室温,用80%甲醇补足失重,摇匀,取样过0.45 μm微孔滤膜,取续滤液即得。

    • 取提取溶剂80%甲醇与对照品储备液、样品溶液,按上述色谱条件进样10 µl,记录色谱图,结果见图2。根据结果,乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷分离效果良好,分离度大于1.5,理论塔板数不低于7700。

      图  2  肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的 HPLC 色图谱

    • 量取对照品储备液(240µg/ml)适量,依次用80%甲醇稀释成240、120、60、24、4.8、2.4µg/ml,以进样质量为横坐标 (X) ,峰面积为纵坐标 (Y) 进行回归,得乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线为:Y=2323.5748X+2.0537,r= 0.9999,表明乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在2.4~240 µg/ml范围内线性关系良好。

    • 精密吸取对照品溶液(240µg/ml)10µl,在上述液相色谱条件下连续进样6次,测定峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积RSD为0.13%,表明仪器精密度良好。

    • 取肝苏颗粒(GSKL-10),按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液6份,测定峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰的平均峰面积为1789.29,RSD为2.12%,表明该方法重复性良好。

    • 取肝苏颗粒(GSKL-10),按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,并按“2.2.1”项下色谱条件,分别于0、4、8、12、24 h进样,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积为1788.29,RSD为0.67%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

    • 分别称取肝苏颗粒(GSKL-10)6份已知含量的样品约0.5 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,按照接近 1∶1 的量计算所需添加的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液,加入到样品中,按“2.2.3”项下方法平行制成6份供试品溶液,进样 10 μl,记录峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率为100.76%,RSD 为 0.66%,说明该方法准确度较好,计算结果见表1

      表 1  乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率试验结果(n=6)

      样品
      编号
      样品中含量
      (mg)
      加入量
      (mg)
      测得总量
      (mg)
      回收率
      (%)
      平均回收率
      (%)
      RSD
      (%)
      GSKL-100.960.951.9306102.17100.760.66
      0.951.9102100.02
      0.951.9146100.48
      0.951.9162100.65
      0.951.9162100.65
      0.951.9156100.59
    • 分别取每批肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取粉末1.0 g,精密称定,按“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液,每批样品平行制备2份,每份进样3次,进样量10 μl,记录峰面积,计算乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量,结果见表2

      表 2  15批肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定结果($ \overline x $±SD)

      样品编号含量(mg/袋)
      GSKL-117.87±0.13
      GSKL-219.02±0.07
      GSKL-319.19±0.40
      GSKL-418.67±0.14
      GSKL-518.37±0.07
      GSKL-618.84±0.08
      GSKL-718.00±0.01
      GSKL-815.99±0.02
      GSKL-917.17±0.01
      GSKL-1017.31±0.03
      GSKL-1117.50±0.02
      GSKL-1220.93±0.16
      GSKL-1320.12±0.16
      GSKL-1415.30±0.06
      GSKL-1517.46±0.08
    • 肝苏颗粒目前没有被中国药典收录,仅收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十三册》附录中,其中将槲皮素作为薄层鉴别项下的主要成分,但是槲皮素的含量较低,且专属性较差。按照部颁标准的方法制备供试品溶液,方法较为繁琐且样品浓稠不易展开。本研究结合前期关于肝苏颗粒活性成分的报道[9-12],选择了乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为特征成分进行薄层鉴别。在本实验中,综合考察了供试品的点样体积(2 µl、5 µl)对薄层展开的影响,发现样品点样量5 µl、对照品点样量2 µl并点成条带状,视检结果最佳。为了进一步考察薄层鉴别的适用性,本研究还对实验室温度(4 ℃、22 ℃)、湿度(30%、70%)以及不同品牌硅胶板(MachereyNagel牌、黄海牌、银龙牌)进行了考察,发现本实验建立的肝苏颗粒薄层鉴别方法耐用性较好,可以更好的实现肝苏颗粒质量标准提升。

    • 文献研究发现,乔松素-7-O-β-D-葡萄糖在肝苏颗粒中的含量较高,且具有较高的专属性,因此,在本研究中将其作为肝苏颗粒的含量测定的指标性成分。同时,在确定含量测定成分的基础上,为了充分获得肝苏颗粒中的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量,本研究对供试品溶液的提取方法(超声、回流)、提取溶剂(水、不同体积分数的甲醇)、提取料液比(1∶25、1∶50、1∶100)及提取时间(0.25、0.5、0.75 h)等进行了考察,最终确定采用80%甲醇(1∶25)超声提取0.25 h作为肝苏颗粒供试品溶液的制备方法。

    • 本研究采用二极管阵列检测器对待测成分进行了全波长光谱扫描,结果显示,待测成分在280 nm波长处均有较强吸收,基线较平稳,分离度较好,且测定不受杂质的干扰,故最终选择280 nm作为检测波长。本研究考察了2种流动相体系(乙腈-水、甲醇-水)对色谱峰峰形的影响,发现乙腈-水系统能够实现乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的分离度,但是出现了较为严重的拖尾现象。通过对乔松素-7-O-β-D-葡萄糖结构的分析发现,其中含有较多的酚羟基,因此在水相中添加酸(0.5%甲酸)会大大改善乔松素-7-O-β-D-葡萄糖拖尾的现象,故选择乙腈-0.5%甲酸溶液作为流动相。当然,在本研究中还对肝苏颗粒中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量测定的耐用性进行了考察,通过外标一点法分别对不同仪器不同色谱柱[Atlantis®T3 (4.6 mm×250 mm,5µm)、DikmaDiamonsilC18 (4.6 mm×250 mm,5µm)]、不同柱温(20、25、30 ℃)、不同流速(0.8、1.0、1.2ml/min)进行考察,发现均能够满足乔松素-7-O-β-D-葡萄糖的含量测定,说明本研究建立的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖含量测定方法具有很强的普适性。

      综上,本文建立的肝苏颗粒薄层鉴别及乔松素-7-O-β-D-葡萄糖含量测定的方法,解决了现行标准中供试品制备繁琐、指标性成分含量低且专属性差的难点,具有精密度高、重复性好和稳定有效的特点。综合考虑测定结果及肝苏颗粒制备过程中该成分的转移率,拟定本品每袋含乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷(C21H22O9)计,不得少于12.0 mg,可用于肝苏颗粒药品质量的控制。

参考文献 (12)

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